制备干燥的自由流动的疏水蛋白制剂的方法技术

制备干燥的自由流动的稳定疏水蛋白制剂的方法，该方法通过在喷雾装置中喷雾和干燥疏水蛋白水溶液来进行，其任选地包含添加剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】专利技术概述本专利技术涉及用于制备干燥的自由流动的稳定疏水蛋白制剂的改良方 法，该方法通过在喷雾装置中喷射疏水蛋白的水溶液来进行。本专利技术还涉 及通过该方法制备的疏水蛋白制剂，其包含所述疏水蛋白制剂。分离疏水蛋白通常在水溶液状态下进行。在该状态下，疏水蛋白失活 或被微生物分解，其储存和运输的成本可能很高。因此需要制备无水的疏 水蛋白制剂，该制剂含有使其特定作用损失最小的浓缩形式的疏水蛋白。而且，这些制剂由粒度为50-600nm的具有良好表面的颗粒组成，以确保 其在进一步的加工工业中与其他物质形成均一混合物或具有良好的应用性。有多种喷雾方法可用于从含有酶的水性介质中去除水分。 在美国专利说明书4,617,272中，含有酶的介质被喷射到在流化床中加 热的惰性颗粒上。聚烯烃、聚碳酸酯、聚曱基丙烯酸甲酯或聚苯乙烯被认为是合适的惰性颗粒。该方法的一个缺点是由这些惰性颗粒产生的干燥酵粉不能用于食品和 动物铜料工业。根据经济专利DD 2637卯中描述的另一种方法，凝乳蛋白酶产品通过 将蛋白酶水溶液喷射到位于流化床制粒机中的载体物质上来制备。所描述 的栽体物质为脱脂奶粉和/或含有糊精的物质。尽管所得的产品具有良好的酶稳定性和可倾倒性，并且所用的载体物 质也是生理上相容的，但该方法的缺点是必须使用相对于酶固体多达10 倍量的载体物质。EP522269描述了制备干燥的自由流动的稳定酶制剂的方法，该方法通过在喷雾装置中喷射酶的水溶液(如果适宜时可包含添加剂)来进行，其中所述酶溶液在0-50°C下采用相对于溶液中酶固体成分的5-60重量％的喷射 辅料共同喷射，所述辅料包括疏7jO圭石和/或高级脂肪酸的金属盐，随后将 通过该方法得到的栽有喷射辅料的颗粒进行干燥。因此本专利技术的目的是提出一种方法，使得疏水蛋白水溶液转化为干燥、 稳定的疏水蛋白制剂，该制剂可用于进一步的加工工业。现已发现，当疏水蛋白水溶液(如果适宜时可包含添加剂)采用相对于 溶液中疏水蛋白固体成分的5-200重量％的喷射辅料(其包括一种或多种糖 醇)共同喷射并将通过该方法得到的载有喷射辅料的颗粒干燥时，本文开头 所定义的方法导致了特别合适的疏水蛋白制剂。疏水蛋白是约IOO个AA的小蛋白，它是丝状真菌的特征，在其他有 机体中不存在。最近，在天蓝色链霉菌(6^e/7to"^ce:y coWco/or)中发现了疏 水蛋白样的蛋白，其被称为"chaplins"，同样具有高度的表面活性的特性。 在水/空气界面上，chaplins可以聚集产生类淀粉样蛋白的原纤维(Classen 等人，2003 Genes Dev 1714-1726; Elliot等人，2003, Genes Dev. 17， 1727-1740)。疏水蛋白以不溶于水的形式分布于多种真菌结构的表面，例如气生菌 丝、孢子、子实体。从子嚢菌纲、半知菌纲和担子菌纲中能够分离出疏水 蛋白的基因。某些真菌含有一种以上的疏水蛋白基因，例如裂褶菌 (5V7"'zo/ ^y〃w附 co附附""e)、 灰盖鬼伞(CV / /7Vi附 "Viere"5)和构巢曲霉 (As7^^7'〃附mV/"/fl""。不同的疏水蛋白显然参与了真菌发育的不同阶段。 这些疏水蛋白可能负责不同的功能(van Wetter等人，2000， Mol. Microbiol. 36， 201-210; Kershaw等人，1998， Fungal Genet. Biol， 1998， 23， 18-33)。专利技术详述本专利技术方法特别适合的疏水蛋白是具有通式(I)结构的多肽， Xn-Ci_Xi_5o_C2-Xq-5-C3—Xp-C4-X"ioo-c5-Xi一5o-C6-Xo_5-C7"Xi—5o_C8-Xm (I)4其中X可以是20种天然存在的氨基酸(Phe、 Leu、 Ser、 Tyr、 Cys、 Trp、 Pro、 His、 Gln、 Arg、 Ile、 Met、 Thr、 Asn、 Lys、 Val、 Ala、 Asp、 Glu、 Gly)中的任何一种，X旁边的下标表示氨基酸的数目，其中n和m 是0-500之间的数字，优选15-300之间的数字，p为1-250之间的数字， 优选1-100之间的数字，C为半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、甲硫 氨酸或苏氨酸，其中至少4个用C表示的残基为半胱氨酸，条件是至少一 个缩写为Xn或Xm或Xp的肽序列是具有至少20个氨基酸长度的肽序列， 其在天然状态下不与疏水蛋白相连，当其涂覆在玻璃表面时，造成接触角 改变至少20度。氨基酸C，至C8优选为半胱氨酸，但是它们也可以被其他有类似空间 填充的氨基酸所替换，优选丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、曱硫氨酸或甘氨酸。 然而，C1至CN立置至少有4个、优选至少5个、特别优选至少6个、尤 其优选至少7个应当由半胱氨酸组成。根据本专利技术，半胱氨酸可以以还原 形式存在于本专利技术的蛋白中，或者彼此形成二硫键。特别优选的是形成分 子内的C-C桥，特别是具有至少l个、优选2个、特别优选3个以及非常 特别优选4个分子内二石克键的那些。在用上述的有类似空间填充的氨基酸 替换半胱氨酸时，这些C位置有利的是成对地替换可以彼此形成分子内二 石克键的半胱氨酸。如果在以X表示的位置上也采用半胱氨酸、丝氨酸、丙氨酸、甘氨酸、 甲硫氨酸或苏氨酸时，通式中各个C位置的编号也相应地改变。特别有利的多肽是通式(II)所示的那些，Xn-C'-X;3-25-C2-Xo.2画C3-X5—50-C4-X2—35—C5-X2—15_C6-X0—2-C7-X3-35_C8-Xm (II)其中X可以是20种天然存在的氨基酸(Phe、 Leu、 Ser、 Tyr、 Cys、 Trp、 l)ro、 His、 Gln、 Arg、 Ile、 Met、 Thr、 Asn、 Lys、 Val、 Ala、 Asp、 Glu、 Gly)中的任何一种，X旁边的下标表示氨基酸的数目，其中n和m 是2-300之间的数字，C为半胱氨酸、丙氨酸、丝氨酸、甘氨酸、曱硫氨5酸或苏氨酸，其中至少4个用C表示的残基为半胱氨酸，条件是至少一个缩写为Xn或Xm的肽序列是具有至少35个氨基酸长度的肽序列，其在天然状态下不与疏水蛋白相连，当其涂覆在玻璃表面时，造成接触角改变至少20度。疏水蛋白的来源在这里没有影响。例如，疏水蛋白可以从例如微生物 如细菌、酵母和真菌中分离。根据本专利技术，特别是通过遗传修饰的生物体 获得的疏水蛋白是合适的。可以添加到疏水蛋白水溶液中的合适添加剂是常规的添加剂，优选生 理上可接受的物质。这些物质包括多糖，例如纤维素化合物、果胶类和不同来源的淀粉类； 形成膜的胶体类，例如明胶、酪蛋白或白蛋白；单糖或二糖，例如葡萄糖、 果糖、乳糖或蔗糖；或植物产品，例如磨光麸皮(wheatgritbran)或豆粉。此外，可以使用的添加剂有无机物质，例如碳酸钙、粘土、多种形式 的沉淀或矿物硅石和硅酸盐，以及动物来源的产品，例如蛋壳粉。而且也 可以使用其他添加剂如乳化剂、抗氧化剂或防腐剂。所用添加剂的量通常为相对于疏水蛋白固体重量的5-200%,优选为 20-200 %。本专利技术的方法可通过以下方案实施将喷射辅料与空气或惰性气体通过喷射一起引入喷雾装置中，该装置 优选喷淋塔。喷射辅本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备干燥的自由流动的稳定疏水蛋白制剂的方法，该方法通过在喷雾装置中喷雾和干燥疏水蛋白溶液来进行，如果情况适宜时包含添加剂。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：M舍恩赫尔，T福斯特，U里希特，T萨布科夫斯基，M考罗什，
申请(专利权)人：巴斯夫欧洲公司，
类型：发明
国别省市：DE[德国]