基于副流感病毒5的疫苗制造技术

本发明专利技术提供基于病毒表达载体的安全、稳定、有效、以及有成本效益的疫苗，这些病毒表达载体包含一种副流感病毒5(PIV5)基因组，该基因组包含表达一种异源多肽的一种异源核苷酸序列。在一些实施例中，与该PIV5基因组的血凝素-神经氨酸酶(HN)基因与大RNA聚合酶蛋白(L)基因之间相比，该异源核苷酸序列更靠近该PIV5基因组的前导序列插入。在一些实施例中，该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的小疏水蛋白(SH)基因与血凝素-神经氨酸酶(HN)基因之间。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】基于副流感病毒5的疫苗 继续申请数据 本申请要求2012年1月24日提交的美国临时申请序号61/590, 070、2012年1月 24日提交的美国临时申请序号61/590, 056、以及2012年8月16日提交的61/683, 810的 权益，这些申请各自通过引用以其全部内容结合在此。 政府资助 本专利技术是根据由美国国立卫生研究院（National Institutes of Health)授予的 批准号R01AI070847和R56AI081816在政府支持下进行。政府在本专利技术中享有某些权利。 背景 灭活的流感疫苗自20世纪40年代以来已经可获得，并且针对匹配的流感病毒毒 株是60%至80%有效的，但针对抗原漂移变体是不太有效的并且针对不同的亚型是无效 的。因此，需要每年疫苗接种以预防来自新的毒株或亚型的感染。当前的季节性流感疫苗 由两种甲型流感病毒（H1N1和H3N2)和一种或两种乙型流感病毒组成。此外，疫苗接种覆 盖率和生产仍然是世界范围内的问题。当前许可的流感病毒疫苗是在鸡蛋中生产，从而要 求数百万个蛋的可获得性和疫苗株的鉴别与疫苗的可用性之间的大量的时间。另外，这种 疫苗接种策略不提供针对出人意料的毒株、爆发或大流行病的保护。需要新的疫苗接种策 略以用于预防和控制流感病毒感染。 专利技术概述 本专利技术包括一种病毒表达载体，该病毒表达载体包含一种副流感病毒5 (PIV5)基 因组，该基因组包含表达一种异源多肽的一个异源核苷酸序列，其中该异源核苷酸序列不 是插入在该PIV5基因组的血凝素-神经氨酸酶（HN)基因与大RNA聚合酶蛋白（L)基因之 间。 在一些实施例中，与该PIV5基因组的血凝素-神经氨酸酶（HN)基因与大RNA聚 合酶蛋白（L)基因之间相比，该异源核苷酸序列更靠近该PIV5基因组的前导序列插入。 在一些实施例中，该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的小疏水蛋白（SH)基 因与血凝素-神经氨酸酶（HN)基因之间。 在一些实施例中，该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的F基因与SH基因之 间。 在一些实施例中，该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的VP基因与基质蛋白 (M)基因之间。 在一些实施例中，该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的Μ基因与F基因之 间。 在一些实施例中，该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的核壳蛋白（ΝΡ)基因 与V/P基因之间。 在一些实施例中，该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的前导序列与核壳蛋 白（ΝΡ)基因之间。 在一些实施例中，PIV5的一部分F或ΗΝ基因已经被该异源核苷酸序列替代。 在一些实施例中，该异源核苷酸序列替代该SH基因核苷酸序列。 在一些实施例中，该异源核苷酸序列插入该SH基因核苷酸序列内、该NP基因核苷 酸序列内、该V/P基因核苷酸序列内、该Μ基因核苷酸序列内、该F基因核苷酸序列内、该HN 基因核苷酸序列内、和/或该L基因核苷酸序列内。 在一些实施例中，该PIV5基因组进一步包含一个或多个突变。在一些实施例中， 突变包括V/P基因的突变、V蛋白和Ρ蛋白的共享Ν-末端的突变、V蛋白和Ρ蛋白的共享 Ν-末端的残基26、32、33、50、102、和/或157的突变、缺乏V蛋白的C-末端的突变、缺乏小 疏水（SH)蛋白的突变、融合（F)蛋白的突变、磷蛋白⑵的突变、大RNA聚合酶（L)蛋白的 突变、并入来自犬副流感病毒的残基的突变、诱导细胞凋亡的突变、或其组合。在一些实施 例中，突变包括PIV5VAC、PIV5ASH、PIV5-P-S308G、或其组合。在一些实施例中，该PIV5 基因组进一步包含一个或多个突变。 在一些实施例中，该异源多肽是源自人免疫缺陷病毒（HIV)、副流感病毒1、副流 感病毒2、副流感病毒3、副流感病毒4、人呼吸道合胞病毒、牛呼吸道合胞病毒、人偏肺病 毒、禽流感、犬流感、禽偏肺病毒、尼帕（Nipah)病毒、亨德拉（Hendra)病毒、狂犬病病毒、埃 博拉（Ebola)病毒、猪环状病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪流感病毒、新城疫病毒（New Castle disease virus)、流行性腿腺炎病毒、麻疫病毒、犬癌热病毒（distemper virus)、 猫白血病病毒、人杯状病毒、兽医杯状病毒、人诺如病毒、兽医诺如病毒、牛癌病毒、结核分 枝杆菌、和/或人或动物中的一种新兴流感病毒。在一些实施例中，该异源多肽是源自一种 细菌或一种寄生虫。 本专利技术包括一种病毒表达载体，该病毒表达载体包含一种副流感病毒5 (PIV5)基 因组，该基因组包含表达一种异源多肽的一个异源核苷酸序列，其中该异源核苷酸序列插 入在该PIV5基因组的血凝素-神经氨酸酶（HN)与大RNA聚合酶蛋白（L)基因之间，并且 其中该PIV5基因组进一步包含一个或多个突变。在一些实施例中，突变包括V/P基因的突 变、V蛋白和P蛋白的共享N-末端的突变、V蛋白和P蛋白的共享N-末端的残基26、32、33、 50、102、和/或157的突变、缺乏V蛋白的C-末端的突变、缺乏小疏水（SH)蛋白的突变、融 合（F)蛋白的突变、磷蛋白（P)的突变、大RNA聚合酶（L)蛋白的突变、并入来自犬副流感病 毒的残基的突变、诱导细胞凋亡的突变、或其组合。在一些实施例中，该突变包括PIV5V Λ C、 PIV5 Λ SH、PIV5-P-S308G、或其组合。 在一些实施例中，该异源多肽是源自人免疫缺陷病毒（HIV)、副流感病毒1、副流 感病毒2、副流感病毒3、副流感病毒4、人呼吸道合胞病毒、牛呼吸道合胞病毒、人偏肺病 毒、禽流感、犬流感、禽偏肺病毒、尼帕病毒、亨德拉病毒、狂犬病病毒、埃博拉病毒、猪环状 病毒、猪生殖与呼吸综合征病毒、猪流感病毒、新城疫病毒、流行性腮腺炎病毒、麻疹病毒、 犬瘟热病毒、猫白血病病毒、人杯状病毒、兽医杯状病毒、人诺如病毒、兽医诺如病毒、牛瘟 病毒、结核分枝杆菌、和/或人或动物中的一种新兴流感病毒。在一些实施例中，该异源多 肽是源自一种细菌或一种寄生虫。 本专利技术包括一种病毒表达载体，该病毒表达载体包含一种副流感病毒5 (PIV5)基 因组，该基因组包含表达一种异源多肽的一个异源核苷酸序列，其中该异源多肽包含一种 流感核壳蛋白（NP)。在一些实施例中，该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的血凝 素-神经氨酸酶（HN)基因与大RNA聚合酶蛋白（L)基因之间。在一些实施例中，与该PIV5 基因组的血凝素-神经氨酸酶（HN)基因与大RNA聚合酶蛋白（L)基因之间相比，该异源核 苷酸序列更靠近该PIV5基因组的前导序列插入；插入该PIV5基因组的核壳蛋白（NP)基因 的上游；紧接该PIV5基因组的前导序列的下游插入；插入在该PIV5基因组的小疏水蛋白 (SH)基因与血凝素-神经氨酸酶（HN)基因之间；插入在该PIV5基因组的F基因与SH基因 之间；插入在该PIV5基因组的VP基因与基质蛋白（M)基因之间；插入在该PIV5基因组的 Μ基因与F基因之间；插入在该PIV5基因组的核壳蛋白（NP)基因与V/P基因之间；插入在 该PIV5基因组的前导序列与核壳蛋白（ΝΡ)基因之间；其中PIV5的一部分F或ΗΝ基因已 经被该异源核苷酸序列替代；替代该SH基因核苷酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种病毒表达载体，该病毒表达载体包含一种副流感病毒5(PIV5)基因组，该基因组包含表达一种异源多肽的一种异源核苷酸序列，其中该异源核苷酸序列不是插入在该PIV5基因组的血凝素‑神经氨酸酶(HN)基因与大RNA聚合酶蛋白(L)基因之间。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.01.24 US 61/590070;2012.01.24 US 61/590056;201. 一种病毒表达载体，该病毒表达载体包含一种副流感病毒5 (PIV5)基因组，该基因 组包含表达一种异源多肽的一种异源核苷酸序列，其中该异源核苷酸序列不是插入在该 PIV5基因组的血凝素-神经氨酸酶（HN)基因与大RNA聚合酶蛋白（L)基因之间。2. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中与该PIV5基因组的血凝素-神经氨酸酶 (HN)基因与大RNA聚合酶蛋白（L)基因之间相比，该异源核苷酸序列更靠近该PIV5基因组 的前导序列插入。3. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的 小疏水蛋白（SH)基因与血凝素-神经氨酸酶（HN)基因之间。4. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的 F基因与SH基因之间。5. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的 VP基因与基质蛋白（M)基因之间。6. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的 Μ基因与F基因之间。7. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的 核壳蛋白（ΝΡ)基因与V/P基因之间。8. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组的 前导序列与核壳蛋白（ΝΡ)基因之间。9. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中PIV5的一部分F或ΗΝ基因已经被该异源 核苷酸序列替代。10. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中该异源核苷酸序列替代该SH基因核苷酸 序列。11. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中该异源核苷酸序列插入该SH基因核苷酸 序列内、该ΝΡ基因核苷酸序列内、该V/P基因核苷酸序列内、该Μ基因核苷酸序列内、该F 基因核苷酸序列内、该ΗΝ基因核苷酸序列内、和/或该L基因核苷酸序列内。12. 如权利要求1所述的病毒表达载体，其中该PIV5基因组进一步包含一个或多个突 变。13. 如权利要求14所述的病毒表达载体，其中突变包括V/P基因的突变、V蛋白和Ρ蛋 白的共享Ν-末端的突变、V蛋白和Ρ蛋白的共享Ν-末端的残基26、32、33、50、102、和/或 157的突变、缺乏V蛋白的C-末端的突变、缺乏小疏水（SH)蛋白的突变、融合（F)蛋白的突 变、磷蛋白（Ρ)的突变、大RNA聚合酶（L)蛋白的突变、并入来自犬副流感病毒的残基的突 变、诱导细胞凋亡的突变、或其组合。14. 如权利要求14所述的病毒表达载体，其中该突变包括PIV5VAC、PIV5ASH、 PIV5-P-S308G、或其组合。15. 如权利要求2至12中任一项所述的病毒表达载体，其中该PIV5基因组进一步包含 一个或多个突变。16. 如权利要求15所述的病毒表达载体，其中突变包括V/P基因的突变、V蛋白和Ρ蛋 白的共享Ν-末端的突变、V蛋白和Ρ蛋白的共享Ν-末端的残基26、32、33、50、102、和/或 157的突变、缺乏V蛋白的C-末端的突变、缺乏小疏水（SH)蛋白的突变、融合（F)蛋白的突 变、磷蛋白（P)的突变、大RNA聚合酶（L)蛋白的突变、并入来自犬副流感病毒的残基的突 变、诱导细胞凋亡的突变、或其组合。17. 如权利要求16所述的病毒表达载体，其中该突变包括PIV5V Λ C、PIV5 Λ SH、 PIV5-P-S308G、或其组合。18. -种病毒表达载体，该病毒表达载体包含一种副流感病毒5 (PIV5)基因组，该基 因组包含表达一种异源多肽的一种异源核苷酸序列，其中该异源核苷酸序列插入在该PIV5 基因组的血凝素-神经氨酸酶（ΗΝ)与大RNA聚合酶蛋白（L)基因之间，并且其中该PIV5 基因组进一步包含一个或多个突变。19. 如权利要求18所述的病毒表达载体，其中突变包括V/P基因的突变、V蛋白和Ρ蛋 白的共享Ν-末端的突变、V蛋白和Ρ蛋白的共享Ν-末端的残基26、32、33、50、102、和/或 157的突变、缺乏V蛋白的C-末端的突变、缺乏小疏水（SH)蛋白的突变、融合（F)蛋白的突 变、磷蛋白（Ρ)的突变、大RNA聚合酶（L)蛋白的突变、并入来自犬副流感病毒的残基的突 变、诱导细胞凋亡的突变、或其组合。20. 如权利要求18所述的病毒表达载体，其中该突变包括PIV5V Λ C、PIV5 Λ SH、 PIV5-P-S308G、或其组合。21. -种病毒表达载体，该病毒表达载体包含一种副流感病毒5 (PIV5)基因组，该基因 组包含表达一种异源多肽的一种异源核苷酸序列，其中该异源多肽包含一种流感核壳蛋白 (ΝΡ)。22. 如权利要求21所述的病毒表达载体，其中该异源核苷酸序列插入在该PIV5基因组 的血凝素-神经氨酸酶（ΗΝ)基因与大RNA聚合...

【专利技术属性】
技术研发人员：何飙，
申请(专利权)人：乔治亚大学研究基金公司，
类型：发明
国别省市：美国;US