本发明专利技术涉及一种从白花蛇舌草中提取、分离纯度为９０％以上的环烯醚萜类化合物单体的方法，所述的白花蛇舌草中环烯醚萜类化合物单体是Ｅ－６－Ｏ－香豆酰鸡屎藤次苷甲酯。该方法包含如下步骤：（１）将粉碎的白花蛇舌草放到第一醇水溶液中加热回流提取，滤过，浓缩得浸膏（Ⅰ），加水溶解，滤过，浓缩得浸膏（Ⅱ）；（２）浸膏（Ⅱ）用第二醇水溶液溶解，大孔树脂柱分离，用第三醇水溶液洗脱，洗脱液浓缩，得到初品；（３）初品用第四醇水溶液溶解后用Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ－２０柱层析，用第五醇水溶液梯度洗脱，浓缩，结晶，即得产物Ｅ－６－Ｏ－香豆酰鸡屎藤次苷甲酯。该方法所用柱材料及溶剂可反复利用，不污染环境，成本较低，得率较高，易于掌握，不仅适合于实验室小规模提取分离，也适合于工业化提取分离生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物化学领域，具体地说涉及从白花蛇舌草中提取、分离纯度在90%以上的环烯醚萜类化合物单体，即E-6-0-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯的方法。
技术介绍
白花蛇舌草(^eoy"^ W/Yksa)为茜草科耳草属植物白花蛇 舌草的全草，主产分布于广东、广西、福建等地，其化学成分主要为E-6-0-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯等环烯醚萜类、齐墩果酸等三萜类和芦丁等黄酮 类。白花蛇舌草以全草入药，具有清热解毒、利尿消肿、活血止痛的功能， 广泛用于治疗扁桃体炎、咽喉炎、尿路感染、盆腔炎、阑尾炎、肝炎、菌 痢、毒蛇咬伤和肿瘤。但是白花蛇舌草及其制成的各种药品在质量控制方 面研究较少；白花蛇舌草药材及其制剂多用定量齐墩果酸作为质量控制的 指标；白花蛇舌草注射液用总黄酮(芦丁计)的含量作为质量控制的指标。 到目前为止没有报道以白花蛇舌草中含量最高的环烯醚萜类化合物E-6-0-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯作为白花蛇舌草中环烯醚萜类化合物的质量控制的 指标。关于E-6-0-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯制备方法的报道有0.5 Kg白花蛇 舌草用甲醇提取、提取液浓縮后加水溶解，先后用氯仿、正丁醇萃取，正 丁醇萃取物上硅胶柱层析两次，再上活性碳柱，得到0.97 g E-6-0-香豆 酰鸡屎藤次苷甲酯，得率为O. 194% (Y.Nishihama et al., P/朋to MW.， 1981， Vol43，28-33);另一种方法是吴孔松用409&乙醇提取6Kg白花蛇舌草、提取液浓縮后加水溶解，分别经大孔树脂柱，聚酰胺柱，S印hadex LH-20 柱层析，聚酰胺柱，硅胶柱层析，S印hadexLH-20柱层析分离，得到O. 48 g E-6-0-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯，得率为0.008% (吴孔松，中国药学杂志2005 年6月第40巻第11期)。以上分离方法，均应用三步以上柱层析，且采用大量不易回收利用的 有机溶剂，方法繁锁，成本高，产品得率低。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种简单可行，成本较低，得率较高且适合工业化 从白花蛇舌草中提取、分离纯度在90%以上的环烯醚路类化合物单体，即 E-6-0-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯的方法。本专利技术所述的白花蛇舌草中环烯醚萜类化合物单体是指E-6-0-香豆酰 鸡屎藤次苷甲酉旨(C26H30O13， 6画0-p-coumaroyl scandoside methyl ester)，其 结构式如下本专利技术所述的一种从白花蛇舌草中提取、分离得纯度为90%以上的环 烯醚萜类化合物单体，即E-6-0-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯的方法，该方法包 含如下步骤(1)将粉碎的白花蛇舌草放到第一醇水溶液中加热回流提取，滤过， 浓縮得浸膏(I )，加适量水溶解，滤过，浓縮得浸膏(II);(2) 步骤(1)浓縮后的浸膏(II)加入第二醇水溶液中溶解，大孔树脂桂分离，用第三醇水溶液洗脱，冼脱液浓縮，得到初品；(3) 步骤(2)所得到的初品以第四醇水溶液溶解后，用S印hadex LH-20 柱层析，用第五醇水溶液梯度洗脱，浓縮，结晶。本专利技术所述方法中，步骤(1)中所述第一醇水溶液中醇的体积浓度为 30% 95%，白花蛇舌草与提取用第一醇水溶液的重量比为1: 1 10,优选 比例为l: 3 10。提取次数为1 5次，提取时间为0.5 4小时。所述浸 膏(I)的相对密度为1.1 1.3 (60°C)，浸膏(II)的相对密度为l. l 1.3 (60°C)。本专利技术步骤(2)中所述大孔树脂柱中使用的大孔树脂可为苯乙烯类树 脂、甲基丙烯酸酯类树脂，优选为苯乙烯类树脂。步骤(2)所述第二醇水溶液中醇的体积浓度为0% 40%;浸膏(II) 与第二醇水溶液的重量比为h 1 20;优选为1: 2 10;浸膏(II )与 大孔树脂的重量比为1: 1 6;步骤(2)中醇水溶液洗脱可采用梯度洗脱 方式，选脱用的第三醇水溶液中醇的体积浓度为20 100%。在本专利技术步骤(3)中溶解初品用的第四醇水溶液中醇的体积浓度为20% 100%;初品与第四醇水溶液的重量比为1: 1 8，优选为1: 2 4; 所述的第五醇水溶液中醇的体积浓度为20% 100%。结晶用第六醇水溶液， 第六醇水溶液中醇的体积浓度为20%~95%。上述第一醇水溶液，第二醇水溶液，第三醇水溶液，第四醇水溶液，第 五醇水溶液，第六醇水溶液中所用的醇为甲醇或乙醇。经本专利技术所述的方法提取、分离得到的五-6-0-香豆酰鸡屎藤次苷甲酯， 实验证实对肝癌SMMC-7721细胞有抑制效应。经本专利技术所述的方法提取、分离得到的纯度90%以上￡-6-0-香豆酰鸡屎6藤次苷甲酯可作为白花蛇舌草药材及饮片质量标准研究的对照品。采用本专利技术所述的方法不仅可在实验室小规模制备，而且可工业化大量分离得到f-6-0-莕豆酰鸡屎藤次苷甲酯化合物，其含量在90。/。以上。该方 法所用柱材料及溶剂可反复利用，不污染环境，成本较低，得率较高，易 于控制和操作，适合工业化生产。 具体实施例方式结合下面实施例，对本专利技术做进一步地说明，但不限制本专利技术。 实施例1粉碎的白花蛇舌草l Kg,用乙醇的体积浓度为95%的乙醇水溶液加热 回流提取2次，每次提取2小时，所述的白花蛇舌草与乙醇水溶液的重量 比为1: 1.5，滤过，浓縮得浸膏(I )(相对密度1. 197，60°C)，加水溶解， 滤过，滤液减压浓縮得浸膏(II)(相对密度1.156，60°C)。浸膏(II)用 乙醇的体积浓度为20%的乙醇水溶液溶解，浸膏(II)与乙醇水溶液重量 比为l: 5;上MCI gel CHP 20P (苯乙烯类)大孔树脂柱层析，浸膏(II) 和大孔树脂MCIgelCHP20P的重量比为1: 1;以20%、 30%、 40%、 50%、 60%乙醇梯度洗脱，薄层层析跟踪检测，在50%乙醇洗脱部位有一较大斑 点，收集该斑点浓縮后，用甲醇的体积浓度为20%甲醇水溶液溶解，浓縮 后得初品。初品用甲醇的体积浓度为40%的甲醇水溶液溶解，初品与甲醇 水溶液的重量比为h 1.5;溶解后上Sephadex LH-20柱分离，先用甲醇的 体积浓度为20%甲醇水溶液1000毫升洗脱，再用甲醇1000毫升洗脱。甲 醇洗脱液浓縮后，以体积浓度为20%甲醇水溶液结晶，即得产物E-6-0-香 豆酰鸡屎藤次苷甲酯，纯度为99.4%,得率0.35%。 薄层层析条件硅胶G薄层板；展开剂氯仿-甲醇-水(v:v:v) =25:5:0.5; 显色吹干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105'C烘至斑点清晰 HPLC纯度分析色谱柱ZorbaxXDB-C8，5p， 4.6 X 150mm流动相体积比为10-90% MeOH/H20, 15分钟流速lmL/min;检测温度3(TC;检测器UV254nm结果保留时间10.049 min，含量99.4%产物结构鉴定NMR (300 MHz， CD3OD， 3): 7.28 (1H， d， 16.2 Hz， H-a)， 7.16 (1H， d， 1.2 Hz, H-3), 7.12 (2H， d， 8.7 Hz， H-2"， 6")， 6.46 (2H， d， 8.7 Hz， H-3"， 5")， 5.99 (1H， d， 16.2 Hz, H-卩)，5.50本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从白花蛇舌草提取、分离环烯醚萜类化合物单体，即Ｅ－６－Ｏ－香豆酰鸡屎藤次苷甲酯的方法，其特征在于该方法包含如下步骤：（１）将粉碎的白花蛇舌草放到第一醇水溶液中加热回流提取，滤过，浓缩得浸膏（Ⅰ），加水溶解，滤过，浓缩得浸膏（Ⅱ）；所述第一醇水溶液中醇的体积浓度为３０～９５％，白花蛇舌草与第一醇水溶液的重量比为１∶１～１０；（２）浸膏（Ⅱ）加入第二醇水溶液中溶解，大孔树脂柱分离，用第三醇水溶液梯度洗脱，洗脱液浓缩，得到初品，所述第二醇水溶液中醇的体积浓度为０～４０％，浸膏（Ⅱ）与第二醇水溶液的重量比为１∶１～２０；（３）初品用第四醇水溶液溶解后，用ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０柱层析，用第五醇水溶液梯度洗脱，浓缩，结晶，所述第四醇水溶液中醇的体积浓度为２０～１００％，初品与第四醇水溶液的重量比为１∶１～８。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙全忠，孙斌，陈伟，
申请(专利权)人：上海开拓者化学研究管理有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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