山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法，本发明专利技术通过高效液相色谱法的分离分析技术，通过建立测定3个环烯醚萜苷类和2个三萜酸类化学成分的方法，实现对山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制。该方法通过同时对山茱萸药材及其制剂与提取物中两类活性成分进行分析，与单一分析某一个或某一类化学成分比较，可全面、客观、有效评价山茱萸及其提取物与制剂的品质，并用于其质量控制，且该方法操作简便，稳定性好，易于推广。

【技术实现步骤摘要】
山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法及应用
本专利技术涉及一种中药材及其制剂的质量控制方法，具体涉及山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法。
技术介绍
山茱萸为山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.etZucc.的干燥成熟果肉，在中医临床应用广泛，具有补益肝肾，收涩固脱之功，常用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、遗尿尿频、崩漏带下、大汗虚脱、内热消渴等症。现代研究显示，山茱萸所含化学成分较为复杂，主要含有环烯醚萜苷类、三萜酸类、黄酮类、有机酸及其酯类、多糖类等。其中，环烯醚萜苷类化学成分具有降低血糖、增强免疫、利尿、降压、抗炎、神经保护等生物活性，三萜酸类化学成分具有增强免疫、保肝、降血糖、抗肿瘤等生物活性，二者均为山茱萸药材发挥传统功效的主要物质基础。目前文献报道有关山茱萸药材的质量控制方法多以环烯醚萜苷类或有机酸类化学成分作为主要评价指标，而《中国药典》2010年版仅收载以马钱苷单一成分作为山茱萸药材的含量测定指标，难以全面、客观地用于评价山茱萸药材及其提取物与制剂的品质。目前尚未见同时以环烯醚萜苷类和三萜酸类活性成分为质控指标的多指标测定方法用于全面有效控制山茱萸药材质量的报道。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，分别采用HPLC-UV、HPLC-ELSD方法建立用于测定山茱萸药材中莫诺苷、马钱苷、当药苷三种环烯醚萜苷类和齐墩果酸、熊果酸两种三萜酸类化学成分含量的质量控制方法，以期通过同时控制两类活性成分的含量达到对山茱萸药材及其提取物与制剂质量的有效控制，以实现山茱萸系列产品质量标准的提升，为客观评价山茱萸系列产品品质提供技术支撑，对控制山茱萸相关产品质量和保证疗效具有重要意义。技术方案：为了实现以上目的，本专利技术采取的技术方案为：一种山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法，包括以下步骤：(1)采用HPLC-UV法测定山茱萸药材及其提取物与制剂中莫诺苷、马钱苷、当药苷3种环烯醚萜苷类化学成分的含量；(2)采用HPLC-ELSD法测定山茱萸药材及其提取物与制剂中乌苏酸、齐墩果酸2种三萜酸类化学成分的含量；(3)分别以步骤(1)所测得环烯醚萜类成分总量、步骤(2)所测得三萜酸类成分总量，或者步骤(1)及步骤(2)所测定得环烯醚萜类和三萜酸类成分总量作为评价指标用于制定评价山茱萸药材及其提取物与制剂品质及进行质量控制的标准。作为优选方案，以上所述的山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法，步骤(1)所述的HPLC-UV测定的步骤为：(1)供试品溶液的制备取山茱萸药材或其提取物或制剂适量，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为40％～80％甲醇，密塞，称定重量，提取60～120min，再称定重量，加体积浓度40％～80％甲醇补足减失的重量，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜滤过后，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备取莫诺苷、马钱苷、当药苷对照品各适量，加体积浓度40％～80％甲醇制成分别含莫诺苷50μg·mL-1、马钱苷50μg·mL-1、当药苷20μg·mL-1的混合对照品溶液；(3)样品中环烯醚萜苷类活性组分的测定取步骤(1)制备得到的供试品溶液、步骤(2)制备得到的混合对照品溶液分别注入高效液相色谱仪进行测定，获得色谱图，按外标一点法分别计算莫诺苷、马钱苷、当药苷的质量浓度；以上所述的高效液相色谱测定的条件为：色谱柱：反相C18色谱柱；流动相：以乙腈为A相，体积浓度0.1％甲酸水溶液为B相，梯度洗脱；流速：0.8mL/min～1mL/min；检测波长：235～245nm。作为优选方案，以上所述的山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法，步骤(2)所述的HPLC-ELSD测定的步骤为：(1)供试品溶液的制备取山茱萸药材或其提取物或制剂适量，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为60％～100％甲醇或乙醇，密塞，称定重量，提取60～120min，再称定重量，加体积浓度为60％～100％甲醇或乙醇补足减失的重量，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜滤过后，取续滤液，即得。(2)对照品溶液的制备取齐墩果酸、乌苏酸对照品适量，加甲醇制成分别含齐墩果酸100μg·mL-1、乌苏酸200μg·mL-1的混合对照品溶液，即得；(3)样品中三萜酸类活性组分的测定取步骤(1)制备得到的样品溶液、步骤(2)制备得到的混合对照品溶液分别注入高效液相色谱仪进行测定，获得色谱图，按外标对数方程两点法分别计算齐墩果酸、乌苏酸的质量浓度；以上所述的高效液相色谱测定的条件为：色谱柱：反相C18色谱柱；流动相：体积比为17：83的0.5％乙酸胺水溶液和甲醇；流速：0.6～0.8mL/min；ELSD检测雾化器温度：80～100℃，载气流量：2.7～3.0L/min。作为优选方案，以上所述的山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法，步骤(3)所述的环烯醚萜类成分总量、三萜酸类成分总量、环烯醚萜类和三萜酸类成分总量可为算术总量，也可为加权后计算的总量。作为优选方案，以上所述的山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法，步骤(3)所述的用于制定评价样品品质及进行质量控制的标准可为5个成分(3个环烯醚萜类和2三萜酸类成分)的总量，也可为3个环烯醚萜类成分总量或2个三萜酸类成分总量共三个指标共同作为评价指标。作为更优选方案，以上所述的山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法，其特征在于，所述的环烯醚萜苷类活性组分测定流动相梯度洗脱程序为：0～20min，10％-17％乙腈，0.1％甲酸水溶液90％-83％。作为优选方案，以上所述的山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法，步骤(1)、步骤(2)所述的山茱萸提取物为山茱萸药材的水提取物或者乙醇提取物。本专利技术选取与山茱萸具有的补益肝肾、收涩固脱等传统功效密切相关，且含量相对较高、具有代表性的莫诺苷、马钱苷、当药苷和齐墩果酸、熊果酸共5种活性成分作为测定指标，可有效控制山茱萸药材的质量。本专利技术所测定的莫诺苷、马钱苷、当药苷3种环烯醚萜类化学成分，其λmax分别为240、238、246nm，为便于分析及方法的推广，故以235～245nm作为测定波长，并优选240nm作为测定波长。本专利技术通过不能流速的筛选，确定最佳的流速为1mL/min。本专利技术所测定的齐墩果酸和熊果酸2种三萜酸类活性成分因其紫外吸收为末端吸收，采用UV检测器时，基线干扰较大，故选用蒸发光散射检测器，以降低干扰。此外，齐墩果酸与熊果酸为同分异构体，其物化性质较为相似，在色谱分离过程中存在一定的难度。本专利技术通过大量实验筛选了不同流动相系统及色谱柱对其分离效果的影响。最终优选以甲醇-0.5％乙酸铵水溶液作为流动相系统具有很好的分离效果，且低流速、低柱温有利于目标化合物的有效分离。在该系统下本专利技术又通过大量实验筛选不同的色谱柱，筛选试验结果表明，以HypersilC18色谱柱具有最佳的分离效果。有益效果：本专利技术提供的山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法和现有技术相比具有以下优点：本专利技术根据山茱萸药材中活性成分和杂质成分的结构性质特点，通过大量实验筛选，建立的同时以环烯醚萜苷类和三萜酸类化学成分为指标，用于山茱萸药材及其提取物与制剂的品质评价及质量控制，较现行山本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用HPLC‑UV法测定山茱萸药材及其提取物与制剂中莫诺苷、马钱苷、当药苷3种环烯醚萜苷类化学成分的含量；(2)采用HPLC‑ELSD法测定山茱萸药材及其提取物与制剂中乌苏酸、齐墩果酸2种三萜酸类化学成分的含量；(3)分别以步骤(1)所测得环烯醚萜类成分总量、步骤(2)所测得三萜酸类成分总量，或者步骤(1)及步骤(2)所测定得到的环烯醚萜类和三萜酸类成分总量，作为评价指标用于制定评价山茱萸药材及其提取物与制剂品质及进行质量控制的标准。

【技术特征摘要】
1.一种山茱萸药材及其提取物与制剂的质量控制方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采用HPLC-UV法测定山茱萸药材及其提取物与制剂中莫诺苷、马钱苷、当药苷3种环烯醚萜苷类化学成分的含量；(2)采用HPLC-ELSD法测定山茱萸药材及其提取物与制剂中乌苏酸、齐墩果酸2种三萜酸类化学成分的含量；(3)分别以步骤(1)所测得环烯醚萜类成分总量、步骤(2)所测得三萜酸类成分总量，或者步骤(1)及步骤(2)所测定得到的环烯醚萜类和三萜酸类成分总量，作为评价指标用于制定评价山茱萸药材及其提取物与制剂品质及进行质量控制的标准；步骤(1)所述的HPLC-UV测定的步骤为：(1)供试品溶液的制备取山茱萸药材或其提取物或制剂适量，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积浓度为40％～80％甲醇，密塞，称定重量，提取60～120min，再称定重量，加体积浓度40％～80％甲醇补足减失的重量，摇匀，经0.45μm的微孔滤膜滤过后，取续滤液，即得供试品溶液；(2)对照品溶液的制备取莫诺苷、马钱苷、当药苷对照品各适量，加体积浓度40％～80％甲醇制成分别含莫诺苷50μg·mL-1、马钱苷50μg·mL-1、当药苷20μg·mL-1的混合对照品溶液；(3)样品中环烯醚萜苷类活性组分的测定取步骤(1)制备得到的供试品溶液、步骤(2)制备得到的混合对照品溶液分别注入高效液相色谱仪进行测定，获得色谱图，按外标一点法分别计算莫诺苷、马钱苷、当药苷的质量浓度；以上所述的高效液相色谱测定的条件为：色谱柱：反相C18色谱柱；流动相：以乙腈为A相，体积浓度0.1％甲酸水溶液为B相，梯度洗脱；梯度洗脱程序为：0～20min，10％-17％乙腈，0.1％甲酸水溶液90％-83％；流速：1mL/min；检测波长：240nm；步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭盛，段金廒，钱大玮，
申请(专利权)人：南京中医药大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32