本发明专利技术属中药制药技术领域，涉及中药有效部位龙胆环烯醚萜总苷。本发明专利技术通过碱沉工艺制得主要含龙胆苦苷及獐牙菜苷、獐牙菜苦苷的龙胆环烯醚萜总苷；经动物实验结果显示，所述的龙胆环烯醚萜总苷能明显抑制乙型病毒性肝炎谷丙转氨酶和谷草转氨酶的升高，且具有明显量效关系，对实验鼠肝损伤具有明显的保护作用，其效果明显优于单一成分龙胆苦苷及阳性对照药物联苯双酯，本龙胆环烯醚萜总苷毒性明显低于非碱沉工艺制备的龙胆环烯醚萜总苷及龙胆苦苷单体。该龙胆环烯醚萜总苷可作为活性成分制备治疗肝损伤药物，并进一步制成片剂、胶囊、纳米粒、脂质体、注射剂、透皮贴剂用于临床。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属中药制药
，涉及中药有效部位龙胆环烯醚萜总苷，具体涉及通过碱沉工艺制备的龙胆环烯醚萜总苷及其在制备治疗肝损伤药物中的用途。
技术介绍
研究报道了常见的肝损伤的原因有病毒性肝炎、化学药物中毒、酒精性肝病、肝郁血等。肝病时，肝细胞的损害是肝脏病理改变的关键，因此，通过保护肝细胞，减轻肝细胞的损伤抑制肝脏病变的进展，通过肝细胞的再生对病变肝脏进行修复，是肝损伤治疗的重点。临床治疗方案主要包括：通过药物直接消除病因(如抑制肝炎病毒)、调整免疫功能(减轻免疫性肝损伤，加强免疫保护)、抗炎以及减轻肝脏负荷等；其中抗病毒类化学药物占据着重要地位，主要包括两大类：直接抗病毒药和免疫增强剂有：(1)直接抗病毒药如拉米夫啶(贺普丁)、恩替卡韦等核苷类似物是临床主要应用的药物；“贺普丁”(葛兰素史克公司)是核苷类似物的代表，虽然其疗效确切，但实践显示其并不能清除乙肝病毒，停药后复发率高，长期应用可导致乙肝病毒变异，患者出现肝功能及病毒学指标的反复，甚至可能发生肝功能衰竭，是此类药物的致命缺陷；免疫增强剂包括：α干扰素和胸腺肽等；干扰素的优点是在抗病毒的同时还可以提高人体自身的免疫力，作用较持久，停药以后不会出现病毒变异，但其缺点是抗病毒作用较弱，而毒副作用较多，除了可能引起流感样症候群之外，还可引起白细胞、血小板减少，且有脱发、抑郁等情况发生，同时，其价格较高，一般患者难以承受。中国中医研究院的有关“中医药的优势领域”研究课题表明，中药在防治肝病方面优势明显，与化学药物相比主要集中在抗病毒不同，多数中药产品在保肝护肝、抗病毒、增强免疫、抗炎等方面发挥综合疗效，对HBsAg等指标的阴转率与干扰素相近(约10％～30％)，并能有效地改善症状体征，副作用少、医疗费用较低且使用方便，因此中医药疗法仍然是目前治疗乙肝患者及无症状病毒携带者的主要方法之一。目前，被SFDA批准上市的中药肝病治疗药物主要产品包括五仁醇、联苯双酯、甘草酸锌、水飞蓟宾等单一成分，除此之外还有不下数百种复方。虽然中药在肝炎的症状
减轻及治疗中起到了积极作用，但由于其中多数只能通过单一抑制谷丙氨基转移酶的升高来治疗乙型肝炎。但在乙型肝炎的临床诊断中，最重要的指标包括谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST或GOT)两项，因此单一针对其中ALT进行治疗难以获得真正满意的疗效，这也是目前中药治疗乙型肝炎多处于辅助用药地位的重要原因之一。与本专利技术相关的现有技术有；1，龙胆苦苷在制备抑制乙型肝病毒炎药物中的应用(授权公告号CN 1259054C)，2，含龙胆总甙中药制剂在制备治疗重症肝炎药物中的应用(授权公告号CN 1202839C)等；此外中药复方仍然存在组方复杂、有效成分不明、作用机理不清、质量控制不严、剂型落后等问题，整体而言，影响了治疗肝病中药制剂的发展和推广应用。其中以龙胆泄肝汤为代表的方剂在临床已经具有多年应用于乙肝治疗的基础，但其真正有效的物质基础、作用机理、作用方式以及成分配比都没有十分明确。因此本申请的专利技术人应用现代科学技术对龙胆进行不同有效部位，不同配比的提取、分离、纯化同时开展药理及毒理学研究的基础上，拟提供一种有效治疗肝损伤的中药制剂，尤其是提供龙胆环烯醚萜总苷在制备治疗肝损伤药物中的用途。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的缺陷，提供中药有效部位龙胆环烯醚萜总苷及其在制药中的新的用途，尤其涉及通过碱沉工艺制备的龙胆环烯醚萜总苷及其在制备治疗肝损伤药物中的用途。本专利技术公开了一种碱沉工艺制备的龙胆环烯醚萜总苷及其在制备治疗肝损伤药物中的用途；龙胆环烯醚萜总苷能明显抑制谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST或GOT)升高。本专利技术所述的龙胆环烯醚萜总苷是从我国传统龙胆、秦艽中提取精制的有效部位，其制备方法主要是提取后通过采用大孔吸附树脂精制得到主要含龙胆苦苷及一定比例的獐牙菜苷、獐牙菜苦苷等裂环环烯醚萜苷类化合物的有效部位。具体而言，本专利技术提供了龙胆环烯醚萜总苷，其中龙胆苦苷含量在50％-80％之间，獐牙菜苦苷含量在0.67％-10％之间，其中优选獐牙菜苦苷含量1-6％，獐牙菜苷含量在0.48-8％之间，优选獐牙菜苷含量1-4％。本专利技术的龙胆环烯醚萜总苷通过通过碱沉工艺按下述方法制备：取龙胆药材去杂质，制成小段，然后加入6倍-12倍70％乙醇溶媒提取3次，每次1h，合并提取液，减压回收乙醇至密度1.1-1.2g/ml，得浓缩液；向浓缩液中加入95％
乙醇调节至乙醇浓度80％，静置醇沉；取醇沉上清液回收乙醇至密度1.1-1.2g/ml，得浓缩液，过滤；向滤液中加入NaOH，调节pH至7.0-9.0进行碱沉工艺处理，离心去除沉淀；上清液上大孔吸附树脂，用2BV体积水洗脱，弃去水洗液，然后用20％乙醇洗脱，收集洗脱液至无色、合并，减压浓缩至相对密度1.1-1.2，50-60℃减压干燥48h，粉碎，制成干粉，即得。本专利技术中，碱沉工艺条件pH值优选为8.0；本专利技术中，在加入碱过程中优选快速搅拌方式，防止局部pH过高引起有效成分损失；本专利技术中，pH调节剂选自NaOH、NaHCO3、Na2CO3、KOH、KHCO3或K2CO3等可药用的碱；本专利技术中，所述的大孔吸附树脂优选HPD300。本专利技术对通过碱沉工艺制得的龙胆环烯醚萜总苷中间体指标成分进行了稳定性考察，结果如表1所示。表.1十批龙胆环烯醚萜总苷中间体指标成分稳定性考察本专利技术将上述方法制得的龙胆环烯醚萜总苷进行了动物实验，结果显示，所述的龙胆环烯醚萜总苷能明显抑制乙型病毒性肝炎谷丙转氨酶和谷草转氨酶的升高，且具有明
显量效关系，对实验大鼠及小鼠肝损伤均具有明显的保护作用，本专利技术的一个实施例中结果显示，所述的龙胆环烯醚萜总苷在降低四氯化碳致小鼠急性肝损伤、D-半乳糖致大鼠慢性肝损伤所致ALT、AST水平升高方面明显优于单一成分龙胆苦苷及阳性对照药物联苯双酯，本专利技术方法制备的龙胆环烯醚萜总苷毒性明显低于非碱沉工艺制备的龙胆环烯醚萜总苷及龙胆苦苷单体。本专利技术的龙胆环烯醚萜总苷可作为活性成分制备治疗肝损伤药物，并进一步加入药物辅料制成片剂、胶囊、纳米粒、脂质体、注射剂、透皮贴剂等任何一种临床常用的剂型。附图说明图1是十批龙胆环烯醚萜总苷中间体指纹图谱。图2是不同工艺提取精制的中药材龙胆有效部位指纹图谱，其中，A：碱沉工艺得到的提取物指纹图谱，B：非碱沉工艺得到的提取物的指纹图谱。图3是实施例1的实验动物肝脏病理切片，其中，A：模型对照组肝脏，肝小叶中央性肝细胞凝固性坏死。；B：龙胆环烯醚萜总苷低剂量组肝脏，肝小叶中央肝细胞气球样变；C：龙胆环烯醚萜总苷中剂量组肝脏，肝细胞弥漫性肿胀，部分细胞出现气球样变；D：(放大倍数：100×)龙胆环烯醚萜总苷高剂量组肝脏，肝细胞弥漫性肿胀，部分细胞出现气球样变。图4是实施例2的实验动物肝脏病理切片，其中，A：模型对照组肝脏，肝小叶中央性肝细胞凝固性坏死；B：低剂量组，部分细胞出现气球样变；C：中剂量组肝细胞弥漫性肿胀；D：高剂量组，肝细胞弥漫性肿胀。图5实施例3的实验动物肝脏病理切片，其中，A：模型对照组肝脏，肝细胞中度脂肪变，肝脏内局灶坏死灶，慢性炎细胞浸润，嗜酸性小体形成；B：低剂量组，肝小叶中央性肝细胞凝固性本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种龙胆环烯醚萜总苷，其特征在于，其中龙胆苦苷含量为50％‑80％，獐牙菜苦苷含量为0.67％‑10％，獐牙菜苷含量为0.48‑8％；所述的龙胆环烯醚萜总苷通过碱沉工艺按下述方法制备：取龙胆药材去杂质，制段后加入6‑12倍70％乙醇溶媒提取3次，每次1h，合并提取液，减压回收乙醇至密度1.1‑1.2g/ml，得浓缩液；向浓缩液中加入95％乙醇调节至乙醇浓度80％，静置醇沉；取醇沉上清液回收乙醇至密度1.1‑1.2g/ml，得浓缩液，过滤；向滤液中加入NaOH，调节pH至7.0‑9.0进行碱沉工艺处理，离心去除沉淀，上清液上大孔吸附树脂，用2BV体积水洗脱，弃去水洗液，然后用20％乙醇洗脱，收集洗脱液至无色、合并，减压浓缩至相对密度1.1‑1.2，50‑60℃，减压干燥48h，粉碎，制成干粉，即得。
【技术特征摘要】
1.一种龙胆环烯醚萜总苷，其特征在于，其中龙胆苦苷含量为50％-80％，獐牙菜苦苷含量为0.67％-10％，獐牙菜苷含量为0.48-8％；所述的龙胆环烯醚萜总苷通过碱沉工艺按下述方法制备：取龙胆药材去杂质，制段后加入6-12倍70％乙醇溶媒提取3次，每次1h，合并提取液，减压回收乙醇至密度1.1-1.2g/ml，得浓缩液；向浓缩液中加入95％乙醇调节至乙醇浓度80％，静置醇沉；取醇沉上清液回收乙醇至密度1.1-1.2g/ml，得浓缩液，过滤；向滤液中加入NaOH，调节pH至7.0-9.0进行碱沉工艺处理，离心去除沉淀，上清液上大孔吸附树脂，用2BV体积水洗脱，弃去水洗液，然后用20％乙醇洗脱，收集洗脱液至无色、合并，减压浓缩至相对密度1.1-1.2，50-60℃，减压干燥48h，粉碎，制成干粉，即得。2.按...
【专利技术属性】
技术研发人员：王建新，秦晶，张琴，陈国峰，施雯，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海;31
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