一种制备纯的钠盐形式的单唾液酸神经节苷脂ＧＭ１的方法。提供了一种分离和纯化单唾液酸神经节苷脂ＧＭ１的方法，包括：（ａ）使用含有钾或铯离子的洗脱液通过离子交换柱色谱从含有单唾液酸神经节苷脂ＧＭ１作为主要神经节苷脂组分的脂质混合物中分离出ＧＭ１，（ｂ）从洗脱溶液中回收溶质，（ｃ）回收溶质的水相溶液进行渗滤，以及（ｄ）在加入１Ｍ ＮａＣｌ之后进行第二次渗滤，并回收ＧＭ１。获得的ＧＭ１的纯度水平高于９９．０％。
【技术实现步骤摘要】
获得医用^唾^M神经节苷脂GM1的方法本专利技术涉及单唾^^神经节苷脂GM1，更确切地，涉A^得和纯4傳唾液 酸神经节苷脂GM1的方法.
技术介绍
神经节苷脂是一类鞘糖脂，具有一个或多个唾'^Wi基，被大量发现于人 类和动物的大脑、神^BL织中。已知单唾^M神经节苷脂GM1可用于很多药学 应用中，特别是在中才E^周围神经系统病症的修复和治疗中。按照美国专利US 4 849 413，从牛或猪的 组织中方^ _取冲经节苷 脂。为了适合于制药学的应用，单唾^M神经节苷脂GM1 ^必须被一离并纯 化。为了提高单唾' _神经节苷脂GM1的产率，已知用化学、酶的方法来处理 提取的脂质^^，以姊它神经节苷脂组^^^4唾';^^神经节苷脂GM1。 这些方法包括用弱酸水解，例如CN 1353112中所记载的，或利用唾^^酶进行 酶水解，例如在US 5296360中所记栽的。在EP0150 712中记载了^JJ氯仿甲醇^MU;匕为60: 30: 4. 5的^M^t， 通过棑阻色镨法对所述强化GM1的脂质^^物的进一步纯化。EP 0 489 352记 载了通过用a-环糊精对脂质';^^溶 :#^滤，之后用乙醇溶剂萃取而对 GM1进行萃取，对GM1强^!旨质^^物的纯化。据aii可以获得ityt为95%的 GM1。这些方法先前已经,皮证实在GM1的純度和产率、以及涉及到费用、效率和 应用于工业赠的有效'I^Ji,存在缺陷。对于制药学应用，需要生产出高舰的神经节苷脂GM1。相应地，>^#着 对获得高純度神经节苷脂GM1的迫切需求。本申请的专利技术者惊奇^JL，通it&于离子交换色语法的方法，可以将神 经节苷脂GM1从^f申经节苷脂质中有^i^分离出来。基于本专利技术，已逸发现^^含有钾或铯离子的' ^€过离子交换柱色谱 从含有单唾液酸神经节苷脂GM1作为主要神经节苷脂组分的脂质混合物中将4GM1分离出来的方法，可以制备出高^tl的神经节苷脂GM1。基于本专利技术，提供了一种才M^U'漆求1所述的神经节苷脂GM1的分离和 纯化方法。基于本专利技术的^^胁实施方式，提供了一种含有下逸悉的步骤的方法 (a MM含有钾或铯离子的洗脱M过离子交换柱色i普从含有单喻;iJt^神 经节苷脂GM1作为主要神经节苷脂组分的脂质;S^中分离出GM1，(b) 从' 6^中回^i^，(c) 对回收的^的7j^目ig^ii行渗滤，(d) 加入钠盐，并对所得^i行渗滤，并(e) 回收GM1。优选，本专利技术的方法允许高純度单神经节苷脂GM1的制备。才財居本专利技术， 单唾'^M神经节苷脂GM1可以以高于98%的^>1，甚至高于99.0%，甚至99.90/。的^t^皮制备出来。进而，本专利技术的方法有利^WM简单步骤，是划算的，JLit合于工业, 的应用。显现。详细说明本专利技术提供了-"^单神经节苷脂GMl纯化的方法，其中GM1是4M含有钾 或铯离子的^^i过离子交换柱色i普从含有单唾'^^神经节香脂GM1作为主 要神经节苷脂组賴脂质^^中分离出来的。在一个优选的实施方式中，提供了 一种制备高纯度单唾液酸神经节苷月旨 GM1的方法，包^#骤(a MM含有钾或铯离子的、3UWit过离子交换柱色镨从含有单唾^^神 经节苷脂GM1作为主要神经节苷脂组分的脂质^^中分离出GM1，(b) 从步骤(c)的^^t中回il4^:质，(c) 对步骤(d)回收的溶质的7M目^it行渗滤，从而去除残留的^f或她(d) 加入钠离子，M以适宜的钠盐的形式，以置换出与GM1结合的钾或 铯离子，并对7M目ii^ii行渗滤，以除去残留钠盐，并且(e)回收钠盐形式的GM1。月旨质;^^可以由牛、绵羊、马、猪^纟1^只的脂质*14€物制备。 有利地，含有单唾^^神经节苷脂GM1作为主要神经节苷脂组分的脂质混 杨可以由含有至少30%、 ^f^E少50%,更^Li^少70%的神经节苷脂^^ 物的脂质提取物制4#到。脂质提取的剩余物通常由确脑苷脂、脑普脂、脂肪 酸和蛋白质《M,M为约50000道尔顿的膜进4亍渗滤，从而4^Ut盐。对于渗滤，可以^JD ^^r传统的透析膜。^i^过滤盒，例如可以使用SART0C0N (赛多利斯)聚砜 ^±>虑盒类型，比如具有约50000道尔顿分离点(cut-off)的。脂质提MH^经受7jc解处理以将^i要神经节苷脂组分例如GTlb、 GTla以及GDlb转变成GMl以提高GM1的含量。水解可以使用传统方法进行。水解可以有利地/^jf]文献中已知的用于神经 节苷脂的被称为酸水解或酶7]c解的两种常^Mc解方法中的任何一种进行。酸水解可以例如^^稀itiA^例:M^盐酸、石if过滤盒，例如 SART0C0N (Sartorius )聚m^:型，伏it具有50000道尔顿的分离点(cut-off) 的it^虑盒。船il^^可以被干燥以回收粉末形式的GM1。干燥可以以員方法进行。 有利地，干燥可以通过喷雾干g真空干燥进行，^ 、本专利技术获得的GM1具有98 %或更高^1的级别,通常为约99. 0到99. 9 % 。 ^M本专利技术的方法获得的GM1包含岩藻糖酰-GMl杂质少于0.1 %。本专利技术的方法方^^能够从^^唾 _神经节苷脂类中有效分离GM1。 特别是，本专利技术的方法允许^藻糖酰"^M1杂质中将GM1分离出来。有利地，本专利技术的方法允许^^产率和高7jC平^l的单唾'^^神经节苷脂 GM1的制备。才財居本专利技术方法纯化的GM1可以用于人类和动物受治疗者的处理，特别是， 才娥本专利技术的纯化GM1被设想用于人类或哺乳动物的治疗，特别是中才沐夕卜围 神经系统病症和疾病，包括脑中风，帕金森病、脊髄损伤、阿耳茨海默氏病、 m链动障碍、M缩侧索硬化、周围神经病变和自主神经性病变。本专利技术可进一步通过下述实施例进行阐it实施例实施例1含有单唾^^神经节苷脂GM1作为主要神经节苷脂类的脂质〉V給物的制备以约25g/1的浓度#^有具有70 % M的神经节苷脂濕^的脂质提, 溶解于纯化水中。1^溶液通过具有50 000道尔顿分离点(cut~off )的 SART0C0胸聚^Mtifl盒渗滤'船通ii^加50mM的醋酸緩沖液和4mM的氯化钩将200 1的溶液平衡到 pH5.5。加入30000 U的霍《U^菌唾'^SI，并将il^口热到37"C保持12小时 以完成^i要神经节苷脂类(GTlb、 GDla、 GDlb)到GM1的转化。所得的溶 液具有14-15g/l的GMl狄。在酶7]<#^， i^bit过具有50 000道尔顿的分离点(cut-off)的it^虑 盒渗滤。随后将1M NaCl加入滞留物中，使M经历第4渗滤。在第4渗 滤之后，通过不经伶阿水置换的渗透物流动，滞留物被浓缩到GM1浓度为 100g/l。然后，^Mt真空下千燥，获得大约3200g的，具有通过HPLC测量浓 >^7 85 %的粉末。得自含有单唾'^M神经节苷脂GM1作为主要神经节苷脂类的脂质^^物的 GM1的纯化^^1前述步^^得的粉末制备^JL^ 10g/l的甲醇溶液，溶液5f顿过0. 22 jam的Sartopore滤芯(由Sartorius AG制造)，船，对每个循环，在含有20 1在曱醇中平l^1 Fra本文档来自技高网...
【技术保护点】
单唾液酸神经节苷脂ＧＭ１的分离和纯化的方法，包括步骤： （ａ）使用含有钾或铯离子的洗脱液通过离子交换柱色谱从含有单唾液酸神经节苷脂ＧＭ１作为主要神经节苷脂组分的脂质混合物中分离出ＧＭ１， （ｂ）从洗脱溶液中回收溶质， （ｃ）对步骤（ｂ）回收的溶质的水相溶液进行渗滤， （ｄ）加入钠盐，并对所得的水相溶液进行渗滤， （ｅ）以钠盐的形式回收ＧＭ１。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：S卡里诺，RP邦特，
申请(专利权)人：梅迪多姆实验室股份有限公司，
类型：发明
国别省市：CH[瑞士]
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