一种冠状动脉疾病风险评估试剂盒及风险评估方法技术

本发明专利技术实施例公开了一种冠状动脉疾病风险评估试剂盒及风险评估方法，应用于疾病风险评估领域。本发明专利技术中，所述风险评估方法包括：抽取外周血作为样本；外周血RNA提取试剂盒提取外周血RNA；对所述外周血RNA进行反转录并构建cDNA文库；对所述cDNA文库进行高通量测序得到测序序列；基因比对；计算基因表达量；计算冠脉狭窄评分；评估是否有冠状动脉疾病的患病风险。本发明专利技术提供的状动脉疾病风险评估方法具有无创且准确率高的优点。

Coronary artery disease risk evaluation kit and risk assessment method

The embodiment of the invention discloses a coronary artery disease risk evaluation reagent kit and a risk assessment method. In the invention, including the risk assessment methods: blood samples were collected as samples; peripheral blood RNA extraction kit to extract peripheral blood RNA; reverse transcription and cDNA library construction of the peripheral blood RNA; the cDNA library for high throughput sequencing of DNA sequence; gene of calculation; gene expression; calculate the score of coronary artery stenosis; risk assessment whether the prevalence of coronary artery disease. The present invention provides a method for assessing the risk of arterial disease, which has the advantages of no invasion and high accuracy.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及疾病风险评估领域，尤其涉及一种冠状动脉疾病风险评估试剂盒及风险评估方法。
技术介绍
当今社会，冠心病(CAD)和心肌梗死(MI)引起的发病率和死亡率是全球主要的健康负担。目前，冠心病的临床因素有很多，如性别、年龄、胸痛类型、吸烟史、糖尿病等。此外，动脉粥样硬化的发生与炎症密切相关。一些炎症细胞与因子聚集在损伤的内皮周围，促使动脉粥样硬化的形成和易损斑块的破裂。由于血液循环，这些变化间接的表现在外周血中，定量测定外周血中相关基因的表达量可反映出冠心病的严重程度。现有技术中，临床上冠心病常用的检测方法有：心电图，超声心动图，负荷试验，CT冠状动脉造影，冠状动脉造影(CAG)等。心电图，超声心动图，负荷试验由于敏感性和特异性有限，因此，其阴性的检查结果并不能排除冠心病。所以冠状动脉造影(CAG)仍然是诊断冠心病的“金标准”，但由于技术相对复杂、有创、费用高，而且存在一定风险，致使很多患者难以接受，另外据统计，进行冠状动脉造影(CAG)的患者中只有不到1/3进行介入治疗，大部分的患者进行冠状动脉造影(CAG)只是为了确定诊断。而CT冠状动脉造影(CTA)拥有结果准确、创伤小、费用相对低廉的优点，已较好地用于临床。但是由于CT冠状动脉造影(CTA)的阴性预测值高，因此CT冠状动脉造影(CTA)的阴性诊断价值较大，而阳性诊断价值有限，特别是对于狭窄程度的判断，所以CT冠状动脉造影(CTA)主要用于筛选。近两年，高通量测序技术在生物
有重要突破，新一代的测序技术将传统的Sanger测序效率提高了数百倍，同时价格也大大下降。高通量测序技术的出现使得许多的极有前景的生物医药应用成为可能。而转录组是指特定组织或细胞在某一环境或生理条件下所转录表达的所有RNA的总和，通常感兴趣的是编码蛋白的mRNA，所以高通量测序技术与转录组学结合为研究基因表达及调控提供了重要的手段和方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中的一些冠状动脉疾病的风险评估使用的方法存在着费用高、风险大的问题，还有一些评估方法存在着虽然费用低，但是判断价值有限的问题，所以现有技术中的冠状动脉疾病风险评估方法不能够快速安全且费用低廉的评估患者冠状动脉栓塞的风险。有鉴于此，本专利技术提供一种冠状动脉疾病的风险评估方法，可包括：含RNA酶抑制剂的抗凝管抽取外周血作为样本；外周血RNA提取试剂盒提取所述样本中的外周血RNA；通过RNA反转录试剂盒对所述外周血RNA进行反转录并构建cDNA文库；对所述cDNA文库进行高通量测序得到测序序列；将所述测序序列与人类RNA基因组数据库进行序列比对得到唯一比对上目的基因的测定序列；通过100-(唯一比对上单一基因的测定序列数/唯一比对上目的基因的测定序列总数)*10000得到基因表达量公式；将每个基因代入所述基因表达量公式计算得到每个基因的基因表达量；通过将每个基因的基因表达量代入冠脉狭窄评分公式计算冠脉狭窄评分；判断所述冠脉狭窄评分与0的大小，若所述冠脉狭窄评分小于0，则没有冠状动脉疾病的患病风险。本专利技术还提供了一种冠状动脉疾病的风险评估试剂盒，可包括采血管、RNA提取试剂盒和RNA反转录试剂盒，所述采血管用于采取外周血样本，所述RNA提取试剂盒用于从所述采血管中采取的外周血样本中提取外外周血RNA，所述RNA反转录试剂盒用于对所述外周血RNA进行反转录并构建cDNA文库。从以上技术方案可以看出，本专利技术具有以下优点：本专利技术中，通过对外周血样本中的RNA进行高通测序，并比对基因，计算冠状狭窄评分，通过评分评估患者冠状动脉栓塞的风险。该方法无需对患者进行创伤性的操作，拥有无创的优点。相比于CT冠脉造影，本专利技术提供的方法具有准确、无创的优势，相比于心电图和心脏负荷试验的准确率也大大提高。因此，本专利技术通过检测患者体内RNA水平的变化，快速安全的评估了患者冠状动脉栓塞的风险，具有良好的临床意义和实用价值。附图说明图1为本专利技术的一种冠状动脉疾病的风险评估方法流程图；图2为本专利技术的一种冠状动脉疾病的风险评估试剂盒结构图。具体实施方式本专利技术实施例提供了一种冠状动脉疾病的风险评估方法，能够解决现有技术中的一些冠状动脉疾病的风险评估使用的方法存在着费用高、风险大的问题，还有一些评估方法存在着虽然费用低，但是判断价值有限的问题。为了使本
的人员更好地理解本专利技术方案，下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。请参阅图1，为本专利技术提供的一种冠状动脉疾病的风险评估方法流程图，由图1可以看出，所述方法包括：S101、含RNA酶抑制剂的抗凝管抽取外周血作为样本；S102、外周血RNA提取试剂盒提取所述样本中的外周血RNA；S103、通过RNA反转录试剂盒对所述外周血RNA进行反转录并构建cDNA文库；S104、对所述cDNA文库进行高通量测序得到测序序列；S105、将所述测序序列与人类RNA基因组数据库进行序列比对得到唯一比对上目的基因的测定序列；S106、通过100-(唯一比对上单一基因的测定序列数/唯一比对上目的基因的测定序列总数)*10000得到基因表达量公式；S107、将每个基因代入所述基因表达量公式计算得到每个基因的基因表达量；S108、通过将每个基因的基因表达量代入冠脉狭窄评分公式计算冠脉狭窄评分；S109、判断所述冠脉狭窄评分与0的大小，若所述冠脉狭窄评分小于0，则没有冠状动脉疾病的患病风险。具体的，本专利技术提供的方法使用通过含有RNA酶抑制剂的抗凝管抽取患者的外周血。在得到患者外周血后，可以配套使用外周血RNA提取试剂盒进行RNA提取，得到所述样本中的外周血RNA。使用市售的RNA反转录试剂盒将RNA进行反转录，并构建获得cDNA文库。通过高通量测序平台对构建的cDNA文库进行测序得到测序序列，然后将所述测序序列与相关的数据库进行序列比对得到唯一比对上目的基因的测定序列。最后计算冠脉狭窄评分，通过判断冠脉狭窄评分与0的大小来评估患者冠状动脉栓塞的风险。本实施例提供的一种冠状动脉疾病的风险评估方法通过对外周血样本中的RNA进行高通测序，并比对基因，计算冠状狭窄评分，通过评分评估患者冠状动脉栓塞的风险。该方法无需对患者进行创伤性的操作，拥有无创的优点。相比于CT冠脉造影，本专利技术提供的方法具有准确、无创的优势，相比于心电图和心脏负荷试验的准确率也大大提高。因此，本专利技术通过检测患者体内RNA水平的变化，快速安全的评估了患者冠状动脉栓塞的风险，具有良好的临床意义和实用价值。为了便于对本专利技术提供的一种心电检测装置的有益效果有一个更直观的理解，本专利技术还提供了实施例2，结合图1一种冠状动脉疾病的风险评估方法流程进行详细描述。S101、含RNA酶抑制剂的抗凝管抽取外周血作为样本；具体的，通过含RNA酶抑制剂的抗凝管抽取患者外周血，可于室温(16-25℃)保存5天，2-8℃保存7天。需要说明的是，也可以使用普通抗凝管抽无患者外周血，这种方式获得的外周本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种冠状动脉疾病的风险评估方法，其特征在于，所述方法包括：含RNA酶抑制剂的抗凝管抽取外周血作为样本；外周血RNA提取试剂盒提取所述样本中的外周血RNA；通过RNA反转录试剂盒对所述外周血RNA进行反转录并构建cDNA文库；对所述cDNA文库进行高通量测序得到测序序列；将所述测序序列与人类RNA基因组数据库进行序列比对得到唯一比对上目的基因的测定序列；通过100‑(唯一比对上单一基因的测定序列数/唯一比对上目的基因的测定序列总数)*10000得到基因表达量公式；将每个基因代入所述基因表达量公式计算得到每个基因的基因表达量；通过将每个基因的基因表达量代入冠脉狭窄评分公式计算冠脉狭窄评分；判断所述冠脉狭窄评分与0的大小，若所述冠脉狭窄评分小于0，则没有冠状动脉疾病的患病风险。

【技术特征摘要】
1.一种冠状动脉疾病的风险评估方法，其特征在于，所述方法包括：含RNA酶抑制剂的抗凝管抽取外周血作为样本；外周血RNA提取试剂盒提取所述样本中的外周血RNA；通过RNA反转录试剂盒对所述外周血RNA进行反转录并构建cDNA文库；对所述cDNA文库进行高通量测序得到测序序列；将所述测序序列与人类RNA基因组数据库进行序列比对得到唯一比对上目的基因的测定序列；通过100-(唯一比对上单一基因的测定序列数/唯一比对上目的基因的测定序列总数)*10000得到基因表达量公式；将每个基因代入所述基因表达量公式计算得到每个基因的基因表达量；通过将每个基因的基因表达量代入冠脉狭窄评分公式计算冠脉狭窄评分；判断所述冠脉狭窄评分与0的大小，若所述冠脉狭窄评分小于0，则没有冠状动脉疾病的患病风险。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述构建cDNA文库包括：对所述外周血RNA反转录后得到的cDNA扩增富集得到全长cDNA；将所述全长cDNA破碎成片段；对所述片段进行筛选得到200bp范围的cDNA片段；对所述200bp范围的cDNA片段进行平末端修复并加接头，然后进行PCR扩增，得到所述cDNA文库。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述人类RNA基因组数据库包括repeatmarker数据库、Genbank数据库、Rfam(10.1)数据库、UCSC数据库和piRNA数据库中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述唯一比对上目的基因的测定序列包括AF28、AQP9、CASP5、CD3D、CD79B、CLEC4E、HNRNPF、
\tIL18RAP、IL8RB、KCNE3、KLRC4、NCF4、RPL28、S100A12、S100A8、SLAMF7、SPIB、TFCP2、TLR4、TMC8、TNFAIP6、TNFRSF10C。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述冠脉狭窄评分公式包括：1)定义Norm1＝RPL28＝22.13；2)定义Norm2＝(0.5*HNRPF+0.5*...

【专利技术属性】
技术研发人员：周高英，高鹏，张淑丽，
申请(专利权)人：北京乐普基因科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11