The invention discloses a shrimp hepatoenteral Nosema LAMP detection kit, including tissue lysate and LAMP amplification reaction solution, the LAMP amplification reaction solution were divided as follows: LAMP primers 1.4mM, LAMP primers 0.2mM, 20mM Tris HC 10mM, potassium chloride, ammonium sulfate 15mM, Magnesium Sulfate 8mM 0.1%Triton X, 100, 0.6M 1.4mM betaine, dNTP, 2.5U/ L Bst DNA polymerase large fragment 1.25mM, calcein 25mM, MnCl2, water margin. The invention has strong specificity, high sensitivity, convenient operation, to overcome the existing detection methods cannot be applied directly in aquaculture disease monitoring in the problem, suitable for shrimp microsporidiosis hepatoenteral screening and prevention.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及水生动物病害检测
,特别涉及一种虾肝肠微孢子虫LAMP检测试剂盒。
技术介绍
虾肝肠微孢子虫(Enterocytozoonhepatopenaei,EHP)病是由一种微孢子虫(microsporidia)寄生引起的,根据2009年在泰国斑节对虾(Penaeusmonodon)上表现出来的症状而命名,主要存在于虾肝胰腺(HP)中,2014年以来EHP疫情正在中国、印尼、印度、马来西亚和泰国等地广泛发生,因此EHP是养殖虾病害中的一个新兴问题,已给全球养殖虾产业造成极大的危害,迫切需要控制。研究已发现EHP能够感染南美白对虾(Penaeusvannamei)、罗氏沼虾(Macrobrachiumrosenbergii)、日本沼虾、斑节对虾等,而且既可以垂直传播也可以水平传播,虾与虾之间的直接传播方式可能是经口传播;EHP主要感染虾的肠道表皮,进而感染肝胰腺,引起对虾肠道吸收功能下降,严重的出现肠炎和肝胰腺萎缩,导致虾在养殖过程中出现生长速度缓慢,个体差异大、参差不齐的现象,但并不会立即死亡,相反虾肠道饱满,食欲正常,所以从表面上看起来,虾并没有明显疾病症状,仅偶尔伴随有白便或者在应激条件下才出现大量死亡;由于患病对虾也一直吃饲料,所以养殖投入高,结果收获甚微,给养殖业造成巨大的经济损失。EHP是一种很小的孢子虫,比一般的微孢子虫小很多,比一般的细菌都小,又不形成肉眼可见的胞囊,没有经验很难辨别。其在肝胰腺细胞质中由早期原生质阶段发育成成熟的孢子,胞质中的多核原生质体阶段在原生质体表面存在大量的小泡,在早期原生质发育阶段以质核二分裂方式形成 ...
【技术保护点】
一种虾肝肠微孢子虫LAMP检测试剂盒,其特征在于,包括组织裂解液及LAMP扩增反应液,所述LAMP扩增反应液各组分如下:LAMP内引物各1.4mM,LAMP外引物各0.2mM,20mM Tris‑HC,10mM氯化钾,15mM硫酸铵,8mM硫酸镁,0.1%Triton X‑100,0.6M甜菜碱,1.4mM dNTP,2.5U/μL Bst DNA聚合酶大片段,1.25mM钙黄绿素,25mM MnCl2,水余量。
【技术特征摘要】
1.一种虾肝肠微孢子虫LAMP检测试剂盒,其特征在于,包括组织裂解液及LAMP扩增反应液,所述LAMP扩增反应液各组分如下:LAMP内引物各1.4mM,LAMP外引物各0.2mM,20mMTris-HC,10mM氯化钾,15mM硫酸铵,8mM硫酸镁,0.1%TritonX-100,0.6M甜菜碱,1.4mMdNTP,2.5U/μLBstDNA聚合酶大片段,1.25mM钙黄绿素,25mMMnCl2,水余量。2.根据权利要求1所述的一种虾肝肠微孢子虫LAMP检测试剂盒,其特征在于,所述LAMP外引物为引物对,具体如下:引物EHP-F3:5’-GGGATCAAGGACGAAGGCT-3’,引物EHP-B3:5’-CAGCACAATCCACTCCTGG-3’。3.根据权利要求1所述的一种虾肝肠微孢子虫LAMP检测试剂盒,其特征在于,所述LAMP内引物为引物对,具体如下:引物EHP-FIP:5’-AAGCATCGCTCTCGCAACACCACACCGCTGTAGTTCTAGCA-3’,引物...
【专利技术属性】
技术研发人员:林锋,刘莉,曹铮,卢淑娟,
申请(专利权)人:浙江省淡水水产研究所,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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