本发明专利技术公开了一种从冬凌草中提取冬凌草甲素的制备方法，采用９５％乙醇为提取溶剂，加温回流提取时间３０－５０分钟，再用不同比例的乙酸乙脂：石油醚、石油醚：汽油混合溶剂萃取得到含冬凌草甲素的浸膏；用柱层析硅胶拌混装短程柱分离、纯化。本发明专利技术工艺简便可行，是适于规模化生产的一种分离纯化冬凌草甲素的新方法，可实现快速提取、分离、纯化、降低了生产成本，所得冬凌草甲素纯度在９５％以上。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物微量有效成分的提取、纯化方法，更具体的设计了一种冬凌草甲素的分离与纯化方法。
技术介绍
冬凌草又名冰凌草。冬凌草在民间用于消炎、抗菌、镇痛和治疗食管癌、胃癌、肝癌，还可抑制食管上皮的增生。目前已进入市场销售的冬凌草口含片，是采用传统的中药加工方式制成的，其不足之处是缺乏较严格的质量控制标准，疗效不可靠，对冬凌草中的有效成分没有进行提取分离和纯化。而且由于冬凌草甲素、乙素均属于二萜类化合物，难溶于水，所以在胃肠环境中一般剂型几乎很难发挥其药理作用。因此，冬凌草甲素新制剂的开发和新制剂的临床适应症的开发研究将成为医药领域关注的热点。冬凌草甲素的提取工艺主要通过提取、脱色、层析、重结晶等工艺，各种制备方法均有文献报道。其提取工艺流程通常先采用溶液提取法进行粗提，再用活性炭脱色，继而浓缩后直接装柱分离。在溶液提取时，文献报道的时间均在3小时以上，在获得含冬凌草甲素10-12％的膏状物时直接装胶上柱。由于此时冬凌草甲素的含量较低，从而，层析柱的负荷加大，生产成本也随之增高，因此，不适于产业规模化的生产需要。为了获得高纯度的冬凌草甲素，我们的工艺在进行了大量试验的基础上做了如下创新。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，克服了目前冬凌草甲素提取工艺的缺点，具有提取含量高、纯度高的优点。本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的，包括以下步骤1)将冬凌草加入6-8倍的70-95％的乙醇溶液中，加温回流，提取温度70-80℃，过滤，回收乙醇，得到含有冬凌草甲素的浸膏； 2)所得浸膏状物，先后用乙酸乙脂∶石油醚、石油醚∶汽油的混合溶剂分别进行萃取，得到含有36-40％冬凌草甲素的浸膏；3)以上步骤得到的浸膏以1∶1-1.5比例与100-200目的柱层析硅胶拌混均匀，将其置于阴凉通风处干燥；4)取比例为1∶6-1∶8或3-4倍的柱体积的新鲜硅胶装于柱底，拌混硅胶装于其上；以一定比例(1∶1.5)的石油醚∶丙酮为洗脱液，以每分钟30-70ml/min进行梯度洗脱，并且洗脱浓度以10％的速度增长；5)收集含冬凌草甲素的馏份，收集到的馏份通过旋转蒸发仪将溶液中的石油醚、丙酮蒸出，得到含有冬凌草甲素的浓缩液；6)将浓缩液置于结晶罐中静置6-8小时使其结晶，离心使冬凌草甲素晶体与母液分离；7)用甲醇液进行重结晶2-3小时，最好6-8甲醇液重结晶，可得到纯度为95％以上的的冬凌草甲素。所述的从冬凌草中提取冬凌草甲素的制备方法，所述乙醇溶液中浸泡、加温、回流为20-50分钟，乙醇溶液为95％的乙醇溶液；得到含有10％-12％冬凌草甲素的浸膏；所述的从冬凌草中提取冬凌草甲素的制备方法，所述用不同比例的乙酸乙脂∶石油醚(1.5∶1)、石油醚∶汽油(1∶1)混合溶剂萃取，每次2-3小时，从而获得含35％-40％冬凌草甲素的膏状物；所述的从冬凌草中提取冬凌草甲素的制备方法，所用柱层析分离柱的径高比为1∶3-1∶5。所述的从冬凌草中提取冬凌草甲素的制备方法，所述用甲醇进行重结晶，时间为2-3小时。本专利技术原料均可以由市场获得。本专利技术制备方法具有以下优点1、本专利技术中采用乙醇短时间的浸泡，然后进行混合溶液萃取，并通过短程柱层析后再进行结晶、重结晶，从而获得95％以上纯度的冬凌草甲素。2、将冬凌草用6-8倍的95％的乙醇溶液(最好是6倍量的乙醇溶液)，提取时间经过5min-72h的实验，通过HPLC来监测，从而确定了30-50分钟为最佳提取时间。通过该步的筛选试验，一是大量缩短了提取时间；二是降低了溶剂的耗费；三是降低了非目标物在提取液中的浓度和含量，从而减少了后续柱层析的分离、纯化负担，降低了生产成本。3、工艺中，使用径高比为1∶3～1∶5的玻璃柱，为防止硅胶板结，以10％-15％的速度增长。在洗脱液浓度达到50％时，收集到的是含有较多冬凌草甲素的馏份，通过旋转蒸发仪蒸出解吸液中的石油醚、丙酮，得到含冬凌草甲素的浓缩液。4、本专利技术工艺简便可行，是适于规模化生产的一种分离纯化冬凌草甲素的新方法，可实现快速提取、分离、纯化、降低了生产成本。具体实施例方式实施例1冬凌草甲素的制备方法取冬凌草GAP标准的原料30kg，粉碎至40-80目，加入相当于药材6倍量的的95％沸腾的乙醇溶液中提取30分钟，得到含有10.5％冬凌草甲素的冬凌草浸膏1kg。用乙酸乙脂与石油醚(2∶1)的混合溶剂解吸2小时，再用石油醚与汽油(1∶1.5)的混合溶剂进行解吸3小时，回收解吸液。将回收的解吸液加入旋转蒸发仪，将其中的石油醚、汽油蒸出。用乙酸乙酯处理后获得含41.2％冬凌草甲素的膏状物，用2倍的乙醇处理，置阴凉处。以上的步骤重复四次(共计120kg草)，待4次的膏状物合并后，将其与100-200目的硅胶以1∶1.5拌混、阴干。取3倍新鲜硅胶拌混装柱。用各50％的石油醚∶丙酮为洗脱液，以30-70ml/min的流速进行梯度洗脱。收集洗脱液，通过旋转蒸发仪将洗脱液中的石油醚、丙酮蒸出。将蒸出石油醚、丙酮后的洗脱液置于结晶罐中静置6小时，使冬凌草从母液中完全分离，进行离心。得到的冬凌草甲素结晶用8倍的甲醇溶解，进行重结晶，挥干溶剂，在50℃下进行真空干燥2小时得到96.2％的冬凌草甲素0.32kg。实施例2冬凌草甲素的制备方法购得GAP冬凌草药材100kg，粉碎至40-80目，加入6倍量的95％乙醇溶液，提取30min得到含有10.8％的冬凌草浸膏约3.1kg。用乙酸乙脂与石油醚(1.5∶1)的混合溶剂解吸2小时，再用石油醚与汽油(1∶1)的混合溶剂进行二次解吸2小时，回收解吸液。将回收的解吸液加入旋转蒸发仪，将其中的石油醚、汽油蒸出。用乙酸乙脂处理后获得含36.3％冬凌草甲素的膏状物，用2倍的乙醇处理，置阴凉处。将上述所得膏状物与100-200目的硅胶以1∶1.5拌混、阴干。取3倍新鲜硅胶拌混装柱。所用柱层析分离柱的径高比为1∶3。用各50％的丙酮，石油醚为洗脱液，以30-70ml/min的流速进行梯度洗脱，洗脱浓度以10％的速度增长。。收集洗脱液，通过旋转蒸发仪将洗脱液中的丙酮、石油醚蒸出。将蒸发掉丙酮、石油醚的洗脱液置于结晶罐中静置6小时，使冬凌草甲素从母液中完全分离，进行离心。得到的冬凌草甲素结晶用6倍的甲醇溶解，进行重结晶，挥干溶剂，在50℃下进行真空干燥2小时得到95.6％的冬凌草甲素共计0.28kg。实施例3冬凌草甲素的制备方法购得GAP冬凌草药材100kg，粉碎至40-80目，加入8倍量的70％乙醇溶液，提取50min得到12％冬凌草浸膏。用乙酸乙脂与石油醚(1.5∶1)的混合溶剂解吸3小时，再用石油醚与汽油(1∶1)的混合溶剂进行二次解吸3小时，回收解吸液。将回收的解吸液加入旋转蒸发仪，将其中的石油醚、汽油蒸出。用乙酸乙脂处理后进一步获得含40％冬凌草甲素的膏状物，用2倍的乙醇处理，置阴凉处。将上述所得膏状物与100-200目的硅胶以1∶1拌混、阴干。取3倍新鲜硅胶拌混装柱。所用柱层析分离柱的径高比为1∶5。用各50％的丙酮，石油醚为洗脱液，以30-70ml/min的流速进行梯度洗脱，洗脱浓度以15％的速度增长。收集洗脱液，通过旋转蒸发仪将洗脱液中的丙酮、石油醚蒸出。将蒸发掉丙酮、石油醚的洗脱液置于结晶罐中静置6小时，使冬凌草甲素从母液中完全分离本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从冬凌草中提取冬凌草甲素的制备方法，包括以下步骤： １）将冬凌草加入６－８倍的７０－９５％的乙醇溶液中，加温回流，提取温度７０－８０℃，过滤，回收乙醇，得到含有冬凌草甲素的浸膏； ２）所得浸膏状物，先后用乙酸乙脂∶石油醚、石油醚∶汽油的混合溶剂分别进行萃取，得到含有冬凌草甲素的浸膏； ３）以上步骤得到的浸膏以１∶１－１．５比例与１００－２００目的柱层析硅胶拌混均匀，将其置于阴凉通风处干燥； ４）取比例为３－４倍的的新鲜硅胶装于柱底，拌混硅胶装于其上；以一定比例（１∶１．５）的石油醚∶丙酮为洗脱液，以每分钟３０－７０ｍｌ／ｍｉｎ进行梯度洗脱，并且洗脱浓度以１０％－１５％的速度增长； ５）收集含冬凌草甲素的馏份，收集到的馏份通过旋转蒸发仪将溶液中的石油醚、丙酮蒸出，得到含有冬凌草甲素的浓缩液； ６）将浓缩液置于结晶罐中静置６－８小时使其结晶，离心使冬凌草甲素晶体与母液分离； ７）用甲醇液进行重结晶２－３小时，可得到纯度为９５％以上的冬凌草甲素。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈俊辉，常贵生，王少彬，常菁，朱晨霞，
申请(专利权)人：陈俊辉，常贵生，王少彬，朱晨霞，常菁，
类型：发明
国别省市：44[中国|广东]
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