本发明专利技术涉及冬凌草叶水提物及其制备方法，是将干冬凌草叶自来水洗净之后，按1∶20-28(g∶ml)的比例加双蒸水于60-100℃，搅拌提取10-60分钟后，将过滤得到的清液于40℃减压浓缩，得到冬凌草叶水提物干粉。本发明专利技术还提供其分析方法，进一步涉及在去卵巢雌性小鼠模型上评价该水提物作为抗骨质疏松剂的应用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及冬凌草叶水提物及其制备方法，涉及该水提物的HPLC- 二极管阵列/(-)ESI-MS-MS指纹图谱，进一步涉及在去卵巢雌性小鼠模型上评价该水提物作为抗骨质疏松剂的应用。本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
骨质疏松是一种多原因代谢性骨病，以骨质弥漫性减少为特征。50岁以上的绝经妇女有50 %以上在生活的某个时期经历有骨质疏松引起的骨折。在骨质疏松引起骨折的妇女中，50%以上要花很长时间康复，这就避免不了发生一些后遗症包括死亡。据估计，遭遇骨折的妇女至少有20%会死亡。对北京和上海的初步调查表明，60岁以上女性骨质疏松症患病率为40-50%。骨质疏松正日益成为国际公认的健康问题。在当前常见疾病中，骨质疏松位于前十位。·早在1941年，Albright发现骨质疏松症常见于绝经后妇女，提出雌激素缺乏是绝经后骨质疏松的主要病因。妇女绝经的平均年龄是51岁。这就意味着妇女1/3以上的时间将在绝经期后度过，也就是妇女要在雌激素缺乏的环境下生活30年以上。如果没有激素替代治疗(HRT)，这些妇女不仅将处于无劳动能力的状态，而且也将经历一些机体上因骨质疏松引起的病症，如心血管疾病等，甚至是致死性。一位妇女一生得骨质疏松症性骨折的几率是11-18%，其中每6位就有一位会因骨质疏松症的并发症而死亡。雌激素替代疗法(ERT)能够减轻妇女绝经期的症状，能够减少心血管疾病的风险，能够阻止骨丢失。使用雌激素进行治疗能够明显地抑制骨质缺损和骨代谢，明显地增大骨骼中矿物质的密度(BMD)，绝经早期的妇女使用雌激素进行治疗时，雌激素可使脊椎骨中矿物质的密度增高3-4%。那些使用激素(雌激素/孕激素)进行替代疗法(HRT)的患者或者在最近的5 9年内进行至少为期5年的HRT治疗的患者，其骨折的危险率降低了50%以上。尽管雌激素是现今为止治疗绝经后妇女骨质疏松的最有效的药物，但长期使用激素替代治疗或雌激素替代治疗，不可避免地会引起一些并发症，如使骨形成表面显著下降，引起子宫内膜增生或肿瘤，引起阴道出血，使乳房变软，增加乳腺癌的危险性，引起高血压或使原有高血压恶化，可明显增加静脉血栓栓塞性疾病的危险性等。雌激素的使用期通常不超过3年。冬凌草(DLC),是唇形科香茶菜属植物碎米極Rabdosia rubescens (Hemsl. ) Hara的全草。冬凌草为多年生草本植物，广泛分布于我国黄河长江流域，主产于河南济源太行山、王屋山区一带。因具有清热解毒、清咽利喉和消肿止痛功能，民间常年将冬凌草当作茶叶饮用。在过去的30多年里，冬凌草的化学成分及药理作用研究主要集中在脂溶性部分，代表性成分为冬凌草甲素和冬凌草乙素，与冬凌草叶的水提物相去甚远。迄今为止只知道少数几个冬凌草水提取液的活性成分只有a-D-呋喃果糖、阿魏酸、丹参素甲正丁酯、3，4- 二羟基苯乳酸、延命素-l-β -D-吡喃葡萄糖苷、咖啡酸、水杨酸、迷迭香酸和迷迭香酸甲酯等少数几个化合物，与冬凌草叶的水提物同样相去甚远。通过长期的抗骨质疏松药物研究积累，专利技术人锁定酚酸为抗骨质疏松结构类型。通过生源分析专利技术人预测到冬凌草叶中含丰富的酚酸。按照这些认识，专利技术人提出本专利技术，用HPLC 二极管阵列/(-) ESI-MS-MS指纹图谱揭示冬凌草叶水提物的化学成分、用去除卵巢的雌性小鼠揭示冬凌草叶水提物的抗骨质疏松作用。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种制备冬凌草叶水提物的方法。具体的，包括如下技术方案将干冬凌草叶自来水洗净之后，按每克20-28晕升的比例加双蒸水于60-100°C，搅拌提取10-60分钟后，将过滤得到的清液于40°C减压浓缩，得到冬凌草叶水提物干粉。其中，干冬凌草叶与双蒸水的比例优选I : 24(g ml)。·其中，提取温度优选80°C。其中，搅拌提取时间优选30分钟。根据本专利技术提供的制备方法得到的冬凌草叶水提物，为淡黄色固体。其中，酚酸的含量为82. 81%。其中，所含有的酚酸包括单咖啡酰酒石酸，丹参素，丹参素咖啡酰酒石酸，2-绿原酸-3-对羟基桂皮酸酒石酸酯，单阿魏酰酒石酸，绿原酸，咖啡酰苹果酸，二咖啡酰酒石酸，迷迭香酰丹参素酒石酸酯，yuannaneic acid E,紫草酸,咖啡酸,咖啡酰对轻基桂皮酰酒石酸，双键被还原的产物氢化紫草酸，2-丹参素-3-乙酰莽草酸酒石酸酯，丹参素咖啡酰酒石酸，2-(丙二酰奎尼酸单酯)-3-丹参素酒石酸奎尼酸单酯，水化丹酚酸B，丹参素酰丹参素酰迷迭香酸酯，丹酚酸B和迷迭香酸。另外，本专利技术的第二个目的是提供冬凌草叶水提物的分析方法，具体是指建立其HPLC/(-)ESI-MS-MS分析方法，获取冬凌草叶水提物的指纹图谱以便控制冬凌草叶水提物的质量。进一步，本专利技术的第三个目的是提供本专利技术冬凌草叶水提物的应用，是用去除卵巢雌性小鼠评价冬凌草叶水提物的抗骨质疏松作用，为预防绝经妇女的骨质疏松提供冬凌草叶水提物作为抗骨质疏松活性高无副作用的物质。附图说明图I冬凌草水提物高效液相色谱-二极管阵列3D图谱。图2冬凌草水提物在254nm( 二极管阵列)检测的HPLC- 二极管阵列指纹图谱。图3冬凌草叶水提物的(_) ESI-Q-TOF-MS指纹图谱。图4小鼠股骨关节头下方O. 2-0. 4mm处进行定量断断层扫描图。具体实施例方式为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。实施例I冬凌草叶水提物的制备21g干冬凌草叶自来水洗净之后加500ml双蒸水于80°C搅拌提取30分钟。过滤得到的清液于40°C减压浓缩，得到6. 3g冬凌草叶水提物，为淡黄色固体。研成粉末，供后面的研究使用。实施例2冬凌草叶水提物的HPLC- 二极管阵列指纹图谱HPLC ffaters 2695Separations Module ；Detector ffaters 2996 二极管阵列(PAD)；Kromasil C18 反相柱(5 μ m, 250mmX 4. 6mm);保护柱(5μ m, IOmmX 4. 6mm);流动相乙腈/水(含O. 05 %冰醋酸)； 流动相流速0.3ml/min ;进样量50μ1;洗脱方式梯度洗脱(具体梯度见表I)表I冬凌草水提物HPLC- 二极管阵列分析流动相梯度表本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种制备冬凌草叶水提物的方法，包括将干冬凌草叶自来水洗净之后，按每克20？28毫升的比例加双蒸水于60？100℃，搅拌提取10？60分钟后，将过滤得到的清液于40℃减压浓缩，得到冬凌草叶水提物干粉。
【技术特征摘要】
1.一种制备冬凌草叶水提物的方法，包括将干冬凌草叶自来水洗净之后，按每克20-28毫升的比例加双蒸水于60-100°C，搅拌提取10-60分钟后，将过滤得到的清液于40°C减压浓缩，得到冬凌草叶水提物干粉。2.根据权利要求I所述的方法，其中，干冬凌草叶与双蒸水的比例为I: 24(g ml)。3.根据权利要求I所述的方法，其中，提取温度为80°C。4.根据权利要求I所述的方法，其中，搅拌提取时间为30分钟。5.权利要求1-4任一方法制备得到的冬凌草叶水提物，其特征在于该冬凌草叶水提物干粉为淡黄色固体。6.根据权利要求5所述的冬凌草叶水提物，其中，所得冬凌草叶水提物中酚酸的含量为 ...
【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，彭莉，姚清河，
申请(专利权)人：彭莉，
类型：发明
国别省市：
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