一种从毛叶香茶菜中制备冬凌草甲素的方法技术

本发明专利技术涉及一种从毛叶香茶菜中制备冬凌草甲素的方法，可有效解决高效、快速、重现度高的从毛叶香茶菜中提取冬凌草甲素的问题，其解决的技术方案是，1）上样溶液的制备；2）树脂预处理；3）粗冬凌草甲素的制备；4）冬凌草甲素的纯化；本发明专利技术以价格低廉的毛叶香茶菜为原料，采用凝胶树脂柱层析法进行纯化，建立了一种工艺简单，重现性好的高纯度冬凌草甲素的制备方法，方法简单，易操作，生产效率高，重现性好，制得冬凌草甲素质量好，纯度高，是冬凌草甲素制备上的一大创新。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医药领域，特别是一种从毛叶香茶菜中制备冬凌草甲素的方法。
技术介绍
毛叶香荼菜为唇形科香茶菜属植物毛叶香茶菜的干燥全草，民间称为四棱杆、山苏子、延命草。具有清热解毒、活血消肿之功效。长期以来，我国民间用作抗菌消炎草药，全草入药，治肝炎、咽炎、乳腺炎、闭经、跌打损伤、关节疼痛及蛇虫咬伤。为冬凌草的同科同属植物，在我国江苏、河南、山西、陕西均有分布。化学成分提示该植物中冬凌草甲素的含量远高于冬凌草中冬凌草甲素的含量。但如何从毛叶香茶菜中快速、高效的将冬凌草甲素制备出来，至今未见有公开报道。冬凌草甲素为冬凌草的主要活性物质，2015版《中国药典》中冬凌草药材及以冬凌草为主要原料的中成药冬凌草片的质量指标成分均为冬凌草甲素。冬凌草甲素具有明显的抗癌、消炎、抗菌和中枢神经等多种药理作用，临床试验证明该化合物具有独特而明显的抗癌效果，尤其对食管癌和贲门癌有特效，且无毒或弱毒，对人体重要脏器如骨髓、肝、肾等无明显损伤，目前作为一类药正在进行临床研究。有文献报道，以冬凌草为原料采用大孔吸附树脂法制备冬凌草甲素的方法，大孔吸附树脂虽然价格相对较便宜，但其选择性及定向富集能力均较差，因此，大孔吸附树脂多用于有效组分的制备。用于单体化合物的制备必然辅助以柱层析法、有机溶剂萃取法等多种方法。所以，制备工艺繁琐、重现性差、成品纯度及得率均较低。因此，研制出制备冬凌草甲素的方法势在必行。
技术实现思路
针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种从毛叶香茶菜中制备冬凌草甲素的方法，可有效解决高效、快速、重现度高的从毛叶香茶菜中提取冬凌草甲素的问题。本专利技术解决的技术方案是，该冬凌草甲素的分子结构式为：由以下步骤实现：1)上样溶液的制备：将毛叶香茶菜干燥药材，粉碎，过40-80目筛，每次加毛叶香茶菜重量的10-12倍质量浓度为50-95％的乙醇,加热回流提取3次，每次1-2h，合并3次提取液，减压回收至无醇味，加水分散，得水分散液，水分散液浓度相当于1-2g/mL生药，即得上样液(浓度相当于生药材1-2g/ml)；2)树脂预处理：方法是，将树脂用甲醇浸泡24h后，用体积浓度为15-20％的甲醇浸泡12h，每2h置换一次甲醇，湿法装柱，再用体积浓度为15-20％的甲醇洗脱2个柱体积，得预处理好的树脂；3)粗冬凌草甲素的制备：将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱，使树脂床径高比达1︰10-15，再将步骤1)中的上样液通过树脂柱，以自然流速进行动态吸附，吸附完后，树脂柱先用1-2倍柱体积15-20％甲醇水洗脱，再用2-4倍柱体积的体积浓度为30％的乙醇洗脱，收集体积浓度为30％乙醇的洗脱液，减压回收乙醇，得相对密度1.2-1.4的稠浸膏；4)冬凌草甲素的纯化：将稠浸膏加溶剂15-25ml溶解，在-20℃-30℃下静置24-72h，析出白色粉末状结晶，过滤，得白色结晶状粉末，上清液继续在-20℃-30℃下静置24-72h，析出白色粉末状结晶，过滤，得白色结晶状粉末，合并两次白色结晶状粉末，制得冬凌草甲素；所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈或丙酮的一种。本专利技术以价格低廉的毛叶香茶菜为原料，采用凝胶树脂柱层析法进行纯化，建立了一种工艺简单，重现性好的高纯度冬凌草甲素的制备方法，方法简单，易操作，生产效率高，重现性好，制得冬凌草甲素质量好，纯度高，是冬凌草甲素制备上的一大创新。附图说明图1为本专利技术的冬凌草甲素的分子结构图。图2为本专利技术冬凌草甲素的高效液相色谱图。具体实施方式以下结合附图和实施例对本专利技术的具体实施方式作进一步详细说明。实施例11)上样液的制备：毛叶香茶菜干燥药材1kg粉碎，过40目药典筛，每次加质量浓度为95％的乙醇10L，提取3次，每次1.5h，合并3次提取液，减压回收溶剂至无醇味，加水分散，减压回收溶剂至无醇味，加水分散，在3600r/min下离心30min，倾取上清液，不溶物加100ml体积浓度为15％的乙醇溶解，在3600r/min下离心30min，合并两次上清液制得上样液(浓度相当于生药材1g/ml)；2)树脂预处理：方法是，SephadexLH-20树脂用甲醇浸泡24h后，倾去甲醇液，用体积浓度为15％的甲醇浸泡12h，每2h置换一次溶剂，湿法装柱，用体积浓度为15％的甲醇洗脱2个柱体积，得预处理好的SephadexLH-20树脂；3)装柱与上样：将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱，于内径为5cm的层析柱，使树脂床径高比达1︰15，再将步骤1)中的上样液1000ml自然流速通过树脂柱吸附完全；4)分离纯化：树脂柱先用体积浓度为15％的甲醇洗脱1500ml，再用30％的甲醇洗脱4000ml，收集体积浓度为30％甲醇的洗脱液，减压回收溶剂，得相对密度为1.243的稠浸膏；5)重结晶：将上述稠浸膏用20ml甲醇溶解，在-20℃-35℃下静置24-72h，去除上清液，析出白色粉末状结晶，过滤，得白色结晶状粉末，上清液继续放置24-72h，析出白色粉末状结晶，过滤，得白色结晶状粉末，合并两次白色结晶状粉末，即得冬凌草甲素0.523g，采用HPLC法面积归一化法计算其纯度大于96.81％(纯度大于95％的冬凌草甲素又称冬凌草甲素单体化合物)。实施例21)上样液的制备：毛叶香茶菜干燥药材1kg，粉碎，过60目药典筛，每次加质量浓度为95％的乙醇12L，提取3次，每次2h，合并3次提取液，减压回收溶剂至无醇味，加水分散，减压回收溶剂至无醇味，加水分散，在3600r/min下离心30min，倾取上清液，不溶物加200ml体积浓度为20％的乙醇溶解，在3600r/min下离心30min，合并两次上清液制得上样液(浓度相当于生药材2g/ml)；2)树脂预处理：方法是，SephadexG树脂用甲醇浸泡24h，倾去甲醇液，用20％的甲醇浸泡12h，每2h置换一次溶剂，湿法装柱，用体积浓度为20％的甲醇洗脱2个柱体积，得预处理好的SephadexG树脂；3)装柱与上样：将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱，于内径为5cm的层析柱，使树脂床径高比达1︰15，再将步骤1)中的上样液500mL自然流速通过树脂柱，吸附完全；4)分离纯化：树脂柱先用体积浓度为20％的甲醇洗脱1000ml，再用30％的甲醇洗脱3000ml，收集体积浓度为30％甲醇的洗脱液，减压回收溶剂，得相对密度为1.321的稠浸膏；5)重结晶：将上述稠浸膏用乙醇溶解20ml，在-20℃-35℃下静置24本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从毛叶香茶菜中制备冬凌草甲素的方法，其特征在于，该冬凌草甲素的分子结构式为：由以下步骤实现：1)上样溶液的制备：将毛叶香茶菜干燥药材，粉碎，过40‑80目筛，每次加毛叶香茶菜重量的10‑12倍质量浓度为50‑95％的乙醇,加热回流提取3次，每次1‑2h，合并3次提取液，减压回收至无醇味，加水分散，得水分散液，水分散液浓度相当于1‑2g/mL生药，即得上样液；2)树脂预处理：方法是，将树脂用甲醇浸泡24h后，用体积浓度为15‑20％的甲醇浸泡12h，每2h置换一次甲醇，湿法装柱，再用体积浓度为15‑20％的甲醇洗脱2个柱体积，得预处理好的树脂；3)粗冬凌草甲素的制备：将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱，使树脂床径高比达1︰10‑15，再将步骤1)中的上样液通过树脂柱，以自然流速进行动态吸附，吸附完后，树脂柱先用1‑2倍柱体积15‑20％甲醇水洗脱，再用2‑4倍柱体积的体积浓度为30％的乙醇洗脱，收集体积浓度为30％乙醇的洗脱液，减压回收乙醇，得相对密度1.2‑1.4的稠浸膏；4)冬凌草甲素的纯化：将稠浸膏加溶剂15‑25ml溶解，在‑20℃‑30℃下静置24‑72h，析出白色粉末状结晶，过滤，得白色结晶状粉末，上清液继续在‑20℃‑30℃下静置24‑72h，析出白色粉末状结晶，过滤，得白色结晶状粉末，合并两次白色结晶状粉末，制得冬凌草甲素；所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈或丙酮的一种。...

【技术特征摘要】
1.一种从毛叶香茶菜中制备冬凌草甲素的方法，其特征在于，该冬凌草甲素的分子结
构式为：
由以下步骤实现：
1)上样溶液的制备：将毛叶香茶菜干燥药材，粉碎，过40-80目筛，每次加毛叶香茶菜重
量的10-12倍质量浓度为50-95％的乙醇,加热回流提取3次，每次1-2h，合并3次提取液，减
压回收至无醇味，加水分散，得水分散液，水分散液浓度相当于1-2g/mL生药，即得上样液；
2)树脂预处理：方法是，将树脂用甲醇浸泡24h后，用体积浓度为15-20％的甲醇浸泡
12h，每2h置换一次甲醇，湿法装柱，再用体积浓度为15-20％的甲醇洗脱2个柱体积，得预处
理好的树脂；
3)粗冬凌草甲素的制备：将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱，使树脂床径高比达1︰10-
15，再将步骤1)中的上样液通过树脂柱，以自然流速进行动态吸附，吸附完后，树脂柱先用
1-2倍柱体积15-20％甲醇水洗脱，再用2-4倍柱体积的体积浓度为30％的乙醇洗脱，收集体
积浓度为30％乙醇的洗脱液，减压回收乙醇，得相对密度1.2-1.4的稠浸膏；
4)冬凌草甲素的纯化：将稠浸膏加溶剂15-25ml溶解，在-20℃-30℃下静置24-72h，析
出白色粉末状结晶，过滤，得白色结晶状粉末，上清液继续在-20℃-30℃下静置24-72h，析
出白色粉末状结晶，过滤，得白色结晶状粉末，合并两次白色结晶状粉末，制得冬凌草甲素；
所述的溶剂为甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、乙腈或丙酮的一种。
2.根据权利要求1所述的从毛叶香茶菜中制备冬凌草甲素的方法，其特征在于，包括以
下步骤：
1)上样液的制备：毛叶香茶菜干燥药材1kg粉碎，过40目药典筛，每次加质量浓度为
95％的乙醇10L，提取3次，每次1.5h，合并3次提取液，减压回收溶剂至无醇味，加水分散，减
压回收溶剂至无醇味，水分散，在3600r/min下离心30min，倾取上清液，不溶物加100ml体积
浓度为15％的乙醇溶解，在3600r/min下离心30min，合并两次上清液制得上样液；
2)树脂预处理：方法是，SephadexLH-20树脂用甲醇浸泡24h后，倾去甲醇液，用体积浓
度为15％的甲醇浸泡12h，每2h置换一次溶剂，湿法装柱，用体积浓度为15％的甲醇洗脱2个
柱体积，得预处理好的SephadexLH-20树脂；
3)装柱与上样：将步骤2)预处理好的树脂湿法装柱，于内径为5cm的层析柱，使树脂床
径高比达1︰15，再将步骤1)中的上样液1000ml自然流速通过树脂柱吸附完全；
4)分离纯化：树脂柱先用体积浓度为15％的甲醇洗脱1500ml，再用30％的甲醇洗脱
4000ml，收集体积浓度为30％甲醇的洗脱液，减压回收溶剂，得相对密度为1.243的稠浸膏；
5)重结晶：将上述稠浸膏用20ml甲醇溶解，在-20℃-35℃下静置24-72h，去除上清液，
析出白色粉末状结晶，过滤，得白色结晶状粉末，上清液继续放置24-72h，析出白色粉末状
结晶，过滤，得白色结晶状粉末，合并两次白色结晶状粉末，即得冬凌草甲素0.523g，采用
HPLC法面积归一化法计算其纯度大于96.81％。
3.根据权利要求1所述的从毛叶香茶菜中制备冬凌草甲素的方法，其特征在于，包括以
下步骤：
1)上样液的制备：毛叶香茶菜干燥药材1kg，粉碎，过60目药典筛，每次加质量浓度为
95％的乙醇12L，提取3次，每次2h，合并3次提取液，减压回收溶剂至无醇味，加水分散，减压
回收溶剂至无醇味，加水分散，在3600r/min下离心30min，倾取上清液，不溶物加200ml体积
浓度为20％的乙醇溶解，在3600r/min下离心30min，合并两次上清液制得上样液；
2)树脂预处理：方法是，SephadexG树脂用甲醇浸泡24h，倾去甲醇液，用20％的甲醇浸
泡12h，每2h置换一次溶剂，湿法装柱，用体积浓度为20％的甲醇洗脱2个柱体积，得预处理
好的SephadexG树脂；
3)装柱与上样：将步...

【专利技术属性】
技术研发人员：代丽萍，赵猛，刘孟奇，时博，赵娇娇，张玲霞，陈随清，
申请(专利权)人：河南中医学院，
类型：发明
国别省市：河南;41