一种狭基线纹香茶菜提取物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供一种狭基线纹香茶菜提取物，该提取物可由下述方法获得：将１０目以上的狭基线纹香茶菜粉末，用不少于３倍的水，在１０～６０兆帕压力差的条件下提取，浓缩，得到狭基线纹香茶菜提取物。本发明专利技术提取物制备成临床上可接受的治疗乙型肝炎、免疫性肝炎、酒精性肝炎和肝纤维化的各种口服制剂。本发明专利技术所述的提取物采用超微粉碎、高压提取工艺，不仅提取率高，而且把狭基线纹香茶菜中的有效药物成分充分的提取出来，从而提高了治疗乙型肝炎、免疫性肝炎、酒精性肝炎和肝纤维化的效果，尤其是对免疫性肝炎的疗效有很大的提高。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中草药提取物，具体涉及一种狭基线纹香茶菜提取物。
技术介绍
狭基线纹香茶菜是香茶菜属植物，是溪黄草的一种，主要出产于广东地区，具有清热利湿、退黄、凉血散瘀之功能；临床上用于治疗湿热黄疸、黄疸性肝炎、急性胆囊炎，有显著疗效。国家知识产权局于2003年03月26日公开了一项“一种治疗肝炎的天然药物溪黄草提取物”(公开号为CN1405177)的专利技术专利申请，该申请采用三种提取工艺——醇提法、水提法和超临界二氧化碳流体萃取法，提取出一种含有2-羟基熊果酸、2，3一二羟基熊果酸以及抗氧化活性成分迷迭香酸等抗病毒活性成分的提取物。将该提取物作为活性成分，与适宜的赋形剂相结合，制成各种药物制剂，包括颗粒剂、片剂、胶囊、口服液等口服剂型，以及注射剂型，用于各种病毒性肝炎尤其是乙型肝炎的治疗。虽然该提取物具有抑制乙肝病毒复制、保护免疫性肝损伤、提高细胞免疫力、增加免疫低下实验动物的脾脏和胸腺重量和增加胆汁排泄等作用，但该提取物的得率较低，其保护免疫性肝损伤的药物活性作用不够理想。
技术实现思路
鉴于上述技术的不足，本专利技术要解决的技术问题是进一步提高狭基线纹香茶菜提取物保护免疫性肝损伤的药物活性作用。本专利技术解决上述技术问题的技术方案是一种狭基线纹香茶菜提取物，该提取物由下述方法提取得到将10目以上的狭基线纹香茶菜粉末，用不少于3倍的水，在10～60兆帕压力下提取，得到狭基线纹香茶菜提取物。本专利技术所述的一种狭基线纹香茶菜提取物的制备方法，该方法由以下步骤组成取狭基线纹香茶菜干品，粉碎至10目以上，加3～50倍水常温浸泡0.5～2小时后，用高压差连续提取器在压力为10～60兆帕下提取，所得提取液先经膜滤过进行固液分离，再经膜浓缩至膏状即可。本专利技术所述的狭基线纹香茶菜提取物的制备方法，其中较佳的工艺参数是将狭基线纹香茶菜干品粉碎至30目以上，加5～15倍水，浸泡1～1.5小时，高压差连续提取器内的工作压力为30兆帕。上述制备方法中所用的提取设备是广州泽力医药科技有限公司生产的Zlp-1000型高压差连续提取器。所述的膏状物还可以根据需要经过干燥成固体，其方法是常规的干燥方法，如常温干燥、冷冻干燥或真空干燥。本专利技术提取物可采用中药制剂的常规制备方法加入口服制剂的辅料，制备成临床上可接受的治疗乙型肝炎、免疫性肝炎、酒精性肝炎和肝纤维化的各种口服制剂，如片剂、胶囊剂、软胶囊剂、丸剂、滴丸剂、颗粒剂等。本专利技术所述的口服制剂由本专利技术所述的狭基线纹香茶菜提取物和各种口服制剂的所需辅料混合制得。本专利技术所述的狭基线纹香茶菜提取物采用超微粉碎、高压提取工艺，不仅得率远高于普通水提、醇提以及超临界提取方法，还把狭基线纹香茶菜中的有效药物成分充分的提取出来。本专利技术提取物具有抑制病毒复制和炎症介质释放、调节免疫功能、减少自由基损伤等作用，能有效治疗乙型肝炎、免疫性肝炎、酒精性肝炎和肝纤维化，尤其是对免疫性肝炎的疗效，与现有技术所得的狭基线纹香茶菜提取物相比有很大的提高。下面将通过实验来证明本专利技术所述的狭基线纹香茶菜提取物具有的技术效果。1.实验材料1.1本专利技术提取物狭基线纹香茶菜干品粗粉20kg，超微粉碎，药粉可过60目筛，加水10倍常温浸泡1.5小时后用高压差连续提取器提取，压力30兆帕，提取液经膜滤过进行固液分离及膜浓缩，真空干燥成固体3.52kg。1.2狭基线纹香茶菜甲醇提取物取狭基线纹香茶菜干品粗粉4kg，用10倍量60％甲醇回流提取3次，每次2小时，过滤，合并滤液减压蒸除甲醇，残留物(甲醇总提取物)加入适量水，用石油醚(bp 60-90℃)充分提取，回收溶剂得石油醚可溶物与石油醚不溶物，不溶物经减压浓缩、冷冻干燥除尽溶剂，得固体564.1g。1.3狭基线纹香茶菜水提物取狭基线纹香茶菜干品4kg，加水，煎煮2次，第1次2小时，第2次1小时，合并提取液，高速(15000rpm)离心除去不溶物。上清液经减压浓缩、喷雾干燥的固体528.4g。1.4狭基线纹香茶菜超临界提取物取狭基线纹香茶菜干品粗粉4kg，用超临界二氧化碳流体(内含5％乙醇作为夹带剂)，在40℃、压力10Mpa的条件下，在超临界二氧化碳流体萃取釜内进行循环提取，提取2小时后，在室温下，调整解析釜温度压力释放出二氧化碳，然后加石油醚充分脱脂脱色，将石油醚不溶解的部分经减压蒸馏、冷冻干燥除尽溶剂，得固体508.2g。2.提取物得率对比上述四种提取物的提取率如表1所示，本专利技术提取物的浸膏得率最大，为17.6％。与醇提物比较，提取率高出25％；与水提物比较，提取率高出33％；于超临界提取物比较，浸膏得率高出38％。表1不同提取工艺所得狭基线纹香茶菜提取物的浸膏得率 3.本专利技术提取物的抗病毒实验3.1体外抗乙肝病毒实验3.1.1材料本专利技术提取物、三氮唑核苷(Ribavirin，病毒唑，由湖北省医药工业研究所提供)；HepG2肝癌细胞株，引自北京302医院病毒室，置于DMEM培养液(购自GBICO公司)中，培养液添加10％小牛血清，100u/ml青霉素，100u/ml链霉素，G418 100ug/ml(购自GBICO公司)，0.03％谷氨酰氨，用0.238％Hepes调pH至6.8。3.1.2方法用0.6％胰蛋白酶将HepG2肝癌细胞分散成单个细胞悬液，按3×104细胞/孔分种于96孔板，3-4d后换用含药培养液，每个浓度加四孔，药物与细胞作用四天后，再加10％DMEM(含G418)0.1ml/孔，第八天吸上清做ELISA测定HBsAg、HBeAg，余下细胞用MTT法测定药物细胞毒性，实验另设培养液空白对照组四孔，加100％DMSO 0.1ml/孔。细胞存活率(％)＝(实验孔A值/对照孔A值)×100％，50％毒性浓度(TC50)为实验孔存活细胞为对照孔50％时的药物浓度。治疗指数(TI)为评价药物临床应用前景的参数，TI＝TC50/IC50。3.1.3HBsAg、HBeAg的检测采用华美公司ELISA测定盒检测。抑制率(％)＝[(对照孔P/N值-实验孔P/N值)/(对照孔P/N值-2.1)]×100％，50％抑制浓度(IC50)为HBsAg或HBeAg抑制率为50％时的药物浓度。3.1.4评价标准TI＞2为有效低毒，1＜TI＜2为低效有毒，TI＜1为毒性作用。3.1.5结果如表2所示，本专利技术提取物对HBsAg和HBeAg的分泌有明显抑制作用，且TI＞2属有效低毒。表2药物对HBsAg和HBeAg的抑制效果及其细胞毒性 3.2体内抗鸭乙肝病毒实验3.2.1材料药物本专利技术提取物，无环鸟苷(ACV，由湖北省医药工业研究所提供)。动物雄性一日龄广州麻鸭，购自广州辛村孵化场，批号96-4-17及97-12-4，体重40-50克/只，每组5-11只。病毒鸭乙型肝炎病毒DHBV-DNA强阳性血清，采自上海麻鸭，-70℃保存。试剂鸭乙型肝炎病毒(DHBV)DNA质粒引自中国医学院医药生物技术研究所；NC膜购自Amersham公司；缺口翻译药盒为Promega公司产品；缺口翻译药盒购自promega公司；α-32p-dCTP，购自北京亚辉公司；Sephadex G-50，购自Pharmacia公司。3.2.2方法一日龄广州麻鸭，经腿静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA阳性本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种狭基线纹香茶菜提取物，该提取物由下述方法提取得到：将１０目以上的狭基线纹香茶菜粉末，用不少于３倍的水，在１０～６０兆帕压力的条件下提取，浓缩，得到狭基线纹香茶菜提取物。

【技术特征摘要】
1.一种狭基线纹香茶菜提取物，该提取物由下述方法提取得到将10目以上的狭基线纹香茶菜粉末，用不少于3倍的水，在10～60兆帕压力的条件下提取，浓缩，得到狭基线纹香茶菜提取物。2.权利要求1所述的狭基线纹香茶菜提取物的制备方法，该方法由以下步骤组成取狭基线纹香茶菜干品，粉碎至10目以上，加3～50倍量水常温浸泡0.5～2小时后，用高压差连续提取器在压力为10～60兆帕的条件下提取，提取液先经膜滤过进行固液分离，再经膜浓缩至膏状...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖小平，胡英杰，朱宇同，刘中秋，陈建南，侯少贞，
申请(专利权)人：广州中医药大学，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]