一种提取蓝萼香茶菜总二萜或蓝萼甲素的方法技术

本发明专利技术属于中药提取领域，公开了一种制备蓝萼香茶菜总二萜或蓝萼甲素的方法：包括提取、洗脱、脱色步骤，将药材蓝萼香茶菜地上部分粉碎，在常压下，用乙醇水溶液回流提取1~3次，合并提取液，减压回收溶剂，得浓缩提取液；将所得浓缩提取液过已经处理好的大孔吸附树脂，50倍柱体积水洗脱色素，25倍柱体积30%乙醇洗脱杂质，30倍柱体积60%乙醇洗脱，收集此洗脱部分，回收溶剂，得到蓝萼香茶菜二萜提取物；将蓝萼香茶菜二萜提取物溶于乙醇，加入活性炭脱色，回收溶剂，干燥，得到蓝萼香茶菜总二萜，乙醇结晶，制备得到蓝萼甲素。采用本发明专利技术所述制备方法得到的蓝萼香茶菜总二萜含量高，蓝萼甲素纯度90%以上，得率7%以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药提取领域，涉及一种以药材蓝萼香茶菜为原材料制备蓝萼香茶菜总二萜或蓝萼甲素的方法。
技术介绍
蓝萼香茶菜(Isodon japonica var glaucocalyx (Maxim) Hara)为唇形禾斗香茶菜属植物，广泛分布在我国的东北，华北，华东等地区；具有健胃、清热解毒、活血、抗菌消炎等活性，用于治疗胃炎，脘腹胀痛，肝炎初期，感冒发热，乳腺炎、关节痛等。蓝萼香茶菜主要含有蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素、glaucocalyxin F、 glaucocalyxin X，等对映-贝壳杉烧型二萜(参见Zhao Bao Xiang, et al. Two new diterpenoids from Rabdosia japonica var. glaucocalyx. Chinese Chemical Letters. 2008, 19: 852，曹露晔等，蓝萼香茶菜研究进展，云南中医中药杂志，2004，25 (3) :42.)。 蓝萼香茶菜中的二萜类成分是其主要活性物质，蓝萼甲素可抑制卡西霉素刺激的兔血小板生成血小板活化因子，能抑制花生四烯酸诱导的兔血小板血栓素A2生成，并同时升高前列腺素E2，能显著抑制ADP，AA，PAF等诱导的兔血小板聚集，显著升高血小板内cAMP水平(参见Zhang B, Long K. Effects of glaucocalyxin A on aggtegation and cAMP levels of rabbit platelets in vitro. Acta Pharmacologica Sinica 1993, 14 (4): 347.) 蓝萼甲素对艾氏腹水癌有一定抑制作用，体内对S180实体瘤抑制率达30. 4% (10mg/kg, 7天)，(参见张淑香等，蓝萼甲素在体外对DNA，RNA和蛋白质生物合成的影响，药学情报通讯，1990，8 (3) 238.)。蓝萼甲素、蓝萼乙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素、蓝萼己素对A549 (人肺癌细胞)、L0V0 (人肠癌细胞)、6T-CEM (人T细胞白血病细胞)、HL-60 (人白血病细胞) 具有较强的细胞毒活性，可用于制备抗癌药物(参见陈海生等，蓝萼香茶菜中二萜类化合物在制备抗癌药物中的应用，专利号为200910044882. O的中国专利技术专利)；蓝萼乙素、蓝萼丙素、蓝萼丁素、蓝萼戊素和蓝萼己素进行了抗乙肝表面抗原和乙肝核心抗原试验，结果发现，它们具有显著的抗乙肝病毒活性，可用于制备抗乙肝病毒的药物(参见陈海生等，蓝萼香茶菜中二萜类化合物在制备抗肝炎病毒药物中的应用，专利号为200910044883. 5的中国专利技术专利)。现有技术中，从药材蓝萼香茶菜中提取蓝萼甲素的方法不仅步骤繁琐，得率偏低， 普遍低于10%，而且由于采用对生物体具有毒性的溶剂，残留的有毒溶剂不符合药典要求， 具体包括以下步骤( 采集药材蓝萼香茶菜地上部分并粉碎，在常压下，用体积百分数859Γ95%乙醇水溶液回流提取2 3次，每次回流提取2小时，合并提取液，减压回收溶剂，至每毫升溶剂含原药材3 IOg ；G)用等体积的石油醚萃取三次，石油醚层弃去，水层再用等体积氯仿萃取三次，合并氯仿层并浓缩，得到氯仿萃取液；(3J向步骤 所得氯仿萃取液中加入硅胶搅拌均勻，减压干燥，进行硅胶柱层析；以氯仿甲醇200:1或氯仿甲醇100:1洗脱，以薄层层析对照，收集含有蓝萼甲素的洗脱液，将洗脱液回收溶剂；(4)以无水乙醇或甲醇反复结晶，得蓝萼甲素，测试纯度，计算得率。采用上述技术方案所得蓝萼甲素的纯度一般在90%以上，但得率一般为79Γ9%，而且过程中使用了有毒的溶剂，氯仿、甲醇，并且残留的有毒溶剂会影响蓝萼甲素作为药物的使用，不符合药典要求。公开号为CN 101914002的中国专利技术专利申请公开了一种蓝萼甲素的提取方法， 提取、硅胶柱层析洗脱色素和杂质、纯化步骤，具体包括以下步骤⑴采集原药材蓝萼香茶菜地上部分并粉碎，在常压下，用体积百分数75、0%乙醇水溶液回流提取2 3次，每次回流提取2 3小时，合并提取液，减压除去部分溶剂，得浓缩提取液；⑵向步骤⑴所得浓缩提取液中加入硅胶并搅拌均勻，减压干燥，进行硅胶柱层析以硅胶柱体积为1体积份，首先以2 3份体积份的洗脱液A洗脱脂溶性色素，再以4飞份体积份的洗脱液B洗脱杂质，最后以1(Γ15份体积份的洗脱液C洗脱；收集洗脱液，浓缩后放置， 析出晶体；其中，所述洗脱液A为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体积比，石油醚乙酸乙酯=8 1 ；所述洗脱液B为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体积比，石油醚乙酸乙酯=4 1 ；所述洗脱液C为石油醚和乙酸乙酯的混合物，并且按体积比，石油醚乙酸乙酯 =2:1; )无水乙醇重结晶，得蓝萼甲素晶体。经上述方法得到的蓝萼甲素的纯度在95 100%，纯度高，适于制备各种剂型，得率在10%以上，得率高，方法的重现性强，按照2010版药典附录中有机溶剂残留测定方法测定，无有机溶剂残留，并且适用的有机溶剂无毒性，符合2010版药典要求。大孔吸附树脂是一类不带离子交换基团的多孔性交联聚合物，具有大孔结构的高分子吸附剂。物理化学性质稳定，比表面积大，吸附容量大，选择性好，吸附速度快，解吸条件温和，对有机物选择性好，不受无机盐类及其他强离子、低分子存在的影响，有利于吸附， 品种多，不同品种可吸附多种有机化合物，流体阻力较小，脱色能力高，再生处理方便、使用周期长、宜于构成闭路循环、节省费用；同时还可减少产品的吸潮性，有效去除重金属，解决中药重金属超标的难题。目前主要用于中草药的分离纯化，如对药材样品的预处理、对单味中药提取物的分离纯化及对中药复方提取物的分离纯化，有的已实现工业化生产，具有广阔的发展前景。(参见刘帅英等，赤芍中芍药苷的大孔吸附树脂纯化研究，中草药，2010， 41 (9) :1480.)硅胶为不可重复使用的柱填料，化学分离纯化蓝萼甲素，硅胶用量大，成本较高，而大孔树脂为可重复使用的柱层析填料，并且可以工业化生产，会大大降低成本。蓝萼香茶菜中蓝萼甲素及二萜具有显著的药理活性，但未见有文献报道蓝萼甲素及总二萜的大孔树脂制备方法，有必要进行制备工艺考察。
技术实现思路
本专利技术的专利技术目的是提供一种提取蓝萼香茶菜总二萜的方法。为达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案是一种提取蓝萼香茶菜总二萜的方法，包括提取、洗脱、脱色步骤，其中，所述提取步骤为将药材蓝萼香茶菜地上部分粉碎，用乙醇水溶液回流提取，得到提取液，减压回收溶剂，得浓缩提取液，所述每毫升浓缩提取液中含原药材0. 5-lg ；所述洗脱步骤为将所得浓缩提取液过大孔吸附树脂，以50倍柱体积水洗脱色素，25 倍柱体积30%乙醇水溶液洗脱杂质，30倍柱体积60%乙醇水溶液洗脱，收集此洗脱部分，回收溶剂，得到蓝萼香茶菜二萜提取物。所述脱色步骤为将蓝萼香茶菜二萜提取物溶于乙醇中，然后加入活性炭脱色，回收溶剂，干燥，得到蓝萼香茶菜总二萜。上述技术方案中，脱色步骤是为了去除叶绿素等色素，提高得率。上述技术方案中，用乙醇水溶液回流提取的方法为在常压下，用体积百分数 55-70%乙醇水溶液回流提取广3次，每次回流提取广3小时，合并提取液。上本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张健，姚士，沈晓丹，徐乃玉，褚纯隽，吴双庆，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：