一种多酚酸有效部位的提取方法技术

本发明专利技术公开一种多酚酸有效部位的提取方法。分两步：先采用无水甲醇或浓度大于９５％的甲醇水溶液提取，接下来用大孔树脂分离。所得多酚酸有效部位的主要成分是丹酚酸Ｂ及其镁盐和铵钾盐，占总重量的７３－７５％；次要成分是咖啡酸三聚体和二聚体，两者共占１２－１４％。本发明专利技术工艺简单，产品中有效成分含量高，质量稳定，成本低，适合大规模生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及从中药中提取有效部位的方法。具体地说，涉及从鼠尾草属植物中提取多酚酸有效部位的方法，更具体地涉及从丹参中提取多酚酸有效部位的方法。
技术介绍
传统上，丹参是一种用于治疗如心绞痛、高血压、冠心病和中风等心血管性疾病的常用有效中药。但一般用的都是从丹参中提取的粗提品，或直接用丹参切片。近二十多年来，体外实验发现丹参中的有效成分，主要是多酚酸类化合物，特别是丹酚酸B及其盐类。体外研究结果显示，丹酚酸B及其盐类，除了用于治疗心血管性疾病(中国专利CN02155004，01110378和98111076)外，还具有治疗其它多种疾病的潜力，如慢性肝病(中国专利CN 99113644)、肿瘤(中国专利CN 02136970和94103933)、消化性溃疡(中国专利CN 98114172)、乙型肝炎(中国专利CN 95105902)和艾滋病等(美国专利US 6043276，中国专利CN 95105902和99809677，参考文献Antiviral Research 5591-96，2002)。从其它鼠尾草属的植物，如Coleus parvifolius和Cordia spinescens中，分离出的丹酚酸B及其盐类，体外实验同样证明它们具有抗艾滋病毒的作用(参考文献Phytotherapy Research 17232-239，2003和11490-495，1997)。随着丹参中多酚酸类化合物新用途的不断发现，分离纯化多酚酸类化合物制备方法的专利也在不断增加。这些方法大致可分为两种类型(一)先用热水浸提丹参粉末，浸出水溶性的多酚酸后，再经不同方法纯化。如再用酸提和大孔树脂分离(中国专利CN02160771)；用大孔树脂层析和乙醇精制(中国专利CN 98111076)；酸提，Sephadex LH20和高压液相层析(中国专利CN 99809677)；或再经硅胶树脂和高压液相层析(中国专利CN98114172)。(二)用较低浓度的有机溶剂水溶液取代热水浸提丹参粉末，浸出水溶性的多酚酸后，再经不同方法纯化。如用50-80％丙酮水或60-95％乙醇水对丹参粉末浸提，再用不同的树脂、或某种树脂加高压液相层析(中国专利CN 02160771，02137375和95113971)进行纯化。本专利技术的目的，是建立一种工艺简单、成本低和产品质量高而稳定可控的方法，从鼠尾草属植物特别是丹参中分离纯化出一种多酚酸有效部位，满足市场的需求。
技术实现思路
本专利技术用一种简单易行的二步法，从鼠尾草属植物特别是丹参中分离纯化出一种多酚酸部位。由于制备方法十分简单，因此结果重复性好，组合物的质量完全稳定可控。本专利技术的方法包括以下两个步骤(1)植物粉末提取植物粉末用无水甲醇或者浓度大于95％的甲醇水溶液提取，提取充分后除去甲醇，残留物溶于水后离心过滤，除去沉淀；(2)柱层析滤液经大孔树脂柱层析，以适量水洗柱后，用甲醇水溶液洗脱，减压蒸去甲醇和水，残留物干燥后即得多酚酸有效部位。所述用无水甲醇或浓度大于95％的甲醇水溶液提取，优选为用无水甲醇提取。所述提取包括浸渍法或者渗漉法。所得多酚酸有效部位，经高压液相层析，高效硅胶簿板层析，比色和质谱等分析，发现它的主要成分是丹酚酸B及其镁盐和铵钾盐，它们的结构式如图1所示，占总重量的73-75％(如图2和图3所示)，它们的分子量分别是718，740和773(如图4和图6所示)。次要成分是咖啡酸三聚体和二聚体，两者共占12-14％(如图2和图3所示)。根据质谱分析，咖啡酸三聚体以分子量520和516的多酚酸为主(如图7所示)；二聚体以分子量为296的多酚酸为主(如图8所示)。在相同实验条件下，对来自四个不同时间制备的多酚酸有效部位，比较了它们的高压液相层析和高效硅胶簿板层析。结果显示，四批多酚酸有效部位，无论是它们的高压液相层析，还是高效硅胶簿板层析图谱，彼此都十分相似(如图9和图10所示)。说明用本专利技术制备的多酚酸有效部位，结果重复性好，组合物的质量完全稳定可控。本专利技术和现有技术的制备方法不同之处在于，打破常规，第一步用无水甲醇或者浓度大于95％的甲醇水溶液取代热水或现有技术所采用的浓度较低的有机溶剂水溶液，浸提植物粉末。实验表明，用热水或现有技术所采用的浓度较低的有机溶剂水溶液浸提100克丹参粉末，浸出物可达到50-60克，而用无水甲醇或者浓度大于95％的甲醇水溶液浸提，浸出物只有20-30克左右。由于甲醇的疏水性低，这一变革既可以浸出水溶性的多酚酸，又可以大量减少丹参中其它一些易溶于水的物质进入浸提液而干扰后面的纯化。因此，再进行一步大孔树脂层析，便可得到更富集的多酚酸有效部位，它的主要成分是丹酚酸B及其镁盐和铵钾盐，占总重量的73-75％(丹酚酸B是咖啡酸的四聚体)；次要成分是咖啡酸的三聚体和二聚体，两者共占12-14％。附图说明图1是丹酚酸B及其镁盐和铵钾盐的分子量与结构式，其中，丹酚酸B 718R＝HH镁盐 740R＝Mg铵钾盐 773R＝NH4K图2是实施例1的多酚酸有效部位的高压液相色谱图。图3是实施例1的产物和检测例1中的馏分7、6和5的高效硅胶簿板层析谱。图4是实施例1的多酚酸有效部位的质谱(ES-MS)图。图5是对照用的纯丹酚酸B及其盐类的质谱图。图6是实施例1的多酚酸有效部位高压液相色谱分离所得馏分7的质谱图。图7是实施例1的多酚酸有效部位高压液相色谱分离所得馏分6的质谱图。图8是实施例1的多酚酸有效部位高压液相色谱分离所得馏分5的质谱图。图9是四批提取物的高压液相色谱图。图10是四批提取物的高效硅胶簿板层析图。具体实施例方式下面提供的实施例仅为进一步说明本专利技术，它们对本专利技术并不构成任何限制。实施例1第一步，无水甲醇提取向10公斤丹参粉末内，加无水甲醇浸泡三次，依次加60，50和40升，每次浸泡8小时，合并三次浸出液。减压蒸去浸出液中甲醇，加30升水，使残留物溶解后，离心过滤(4000转/分)，收集滤液。第二步，柱层析滤液经AmberliteXAD-4柱层析。层析柱直径为30厘米，高80厘米，内装20公斤树脂。将近30升滤液慢慢加入柱内，依次用水、20％和80％的甲醇水溶液洗柱，每次150升。所要的多酚酸有效部位洗脱在80％甲醇水溶液内。减压蒸去甲醇和水，进一步干燥后即得到浅棕色多酚酸有效部位0.22公斤，按丹参计得率为2.2％。以上二步，除蒸馏外，均在室温下操作。检测例1多酚酸有效部位的高压液相色谱分析将实施例1的产物进行高压液相色谱分析，采用反相柱C18(10×250mm)，进样量125微克，以甲醇-水-三氟醋酸洗脱，体积比为4∶6∶0.05％，流速为1.5ml/min。结果见图2，其中，馏分5和6以咖啡酸二聚体和三聚体为主；馏分7为丹酚酸B及其镁盐和铵钾盐。并经称量法鉴定，馏分5和6共占总进样量的13.1％，馏分7占75.1％。检测例2多酚酸有效部位的高效硅胶簿板层析分析将实施例1的产物和检测例1中的馏分7、6和5进行高效硅胶簿板层析。点样顺序为1.实施例1的产物；2.馏分5；3.馏分6；4.馏分7；5.对照品纯丹酚酸B及其镁盐。展开采用氯仿-丙酮-甲酸(体积比＝8∶8∶1)。层析板用含8％的磷酸，3％醋酸铜水溶液喷雾，200℃加热碳化显色。图3为高效硅胶本文档来自技高网...

【技术保护点】
从鼠尾草属植物中提取多酚酸有效部位的方法，其特征在于：包括以下两个步骤：（１）植物粉末提取：植物粉末用无水甲醇或浓度大于９５％的甲醇水溶液提取，提取充分后除去甲醇，残留物溶于水后离心过滤，除去沉淀；（２）柱层析：滤液经大孔树脂柱层析，以适量水洗柱后，用甲醇水溶液洗脱，减压蒸去甲醇和水，残留物干燥后即得多酚酸有效部位。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：邵明川，邵明顺，
申请(专利权)人：百愈生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：SG[新加坡]