高透明度PDA培养基的制作方法技术

本发明专利技术公开一种高透明度PDA培养基的制作方法，属PDA培养基的制作方法领域，包括以下步骤：A、马铃薯切块；B、煮块：先用大火再文火煮，使马铃薯丁熟而不烂；C、过滤；D、加料：将葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.8-1.4g，硫酸镁1.2g-1.7g加入上述滤液，搅匀，用水定容至1000mL；E、调pH值：使用盐酸溶液与氢氧化钠溶液调节pH值至6.5-7，得到液体培养基；先将高纯度琼脂粉19-23g分装至数个调配容器中，然后将液体培养基分装到所述数个调配容器中，混匀；F、倒平板；G、去湿：将培养皿皿盖在酒精灯火焰上把水汽烘干；H、密封，无菌检测。本发明专利技术能精准、快速地进行各原料的配比，避免系统误差和操作误差；且能很好地控制培养皿内水分，避免杂菌滋生。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及PDA培养基的制作方法领域，特别是指一种高透明度PDA培养基的制作方法。
技术介绍
在真菌微生物培养领域，人们常用马铃薯葡萄糖琼脂培养基，现有通常的做法是：先洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块，加水煮烂，用八层纱布过滤，加热，再据实际实验需要加1-10g琼脂，继续加热搅拌混匀，待琼脂溶解完后，加入葡萄糖，搅拌均匀，稍冷却后再补足水分至1000毫升，分装试管或者锥形瓶，加塞、包扎，灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀，冷却后贮存备用。这种制备方法有以下缺陷：一是造成操作误差，先加琼脂粉后加葡萄糖，琼脂粉接触水后成糊状，易成团，拌不匀、易粘锅，造成其他添加成份被琼脂团粘住，难以混均匀，且拌好后还要换至三角瓶等容器，加了琼脂的培养液粘度大，粘到钢筋锅、漏斗、玻璃棒和勺子上面，既费时又影响配比精确度，会造成操作误差；二是造成系统误差。配好的土豆液定容后，加入辅料和琼脂粉继续加热煮沸使琼脂完全融化，这样在加热过程中还有不少水分蒸发掉，导致的PDA中各成分浓度的改变，达不到标准量，造成了系统误差；三是制成的PDA培养基比透明度低，不利于后续的接种操作。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种高透明度PDA培养基的制作方法，能精准、快速地配比，避免系统误差和操作误差。本专利技术提出一种高透明度PDA培养基的制作方法及其制备方法，包括以下步骤：A、马铃薯切块：马铃薯200g经清洗、去皮、去芽眼，切边长为4-6mm的正方体丁块；B、煮块：将马铃薯丁块放置热水中，先用大火煮5分钟至软化，再改为文火煮10-14分钟，使马铃薯营养充分散发至水中，同时使马铃薯丁熟而不烂；C、过滤：用6-8层纱布过滤2-3次，保留滤液；D、加料：将葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.8-1.4g，硫酸镁1.2g-1.7g加入上述滤液，搅匀，用水定容至1000mL；E、调pH值：使用盐酸溶液与氢氧化钠溶液调节pH值至6.5-7，得到液体培养基；先将高纯度琼脂粉19-23g分装至数个调配容器中，然后将液体培养基分装到所述数个调配容器中，混匀；F、倒平板：将加了琼脂粉的培养基高温灭菌，降温后，在无菌条件下分装到灭过菌的平板培养皿中，每个培养皿的底部是水平的，每一个培养皿培养基的厚度为3.0±0.5mm；G、去湿：进一步冷却培养皿，将皿盖在酒精灯火焰上把水汽烘干；H、密封并进行无菌检测：用透气的封口膜，在无菌状态下把培养皿封上口，装到无菌的聚丙烯塑料袋中，放到28℃的恒温培养箱里面，2-4天做无菌检测，经检测完全无菌后得到固态培养基。优选地，所述“F、倒平板”步骤中是指将培养基在123℃，高压0.122MPa灭菌26min，温度降至50℃再分装至灭过菌的平板培养皿。所述“D、加料”步骤中，加入食用级盐8-14g。本专利技术的有益效果是：一是能得到透明度高的PDA培养基，在“煮块”步骤中，先用大火短时煮再文火煮，使马铃薯丁熟而不烂，这样的煮液中既有马铃薯营养，又清澈、透明，且流动性好便于后续的加料，采用高纯度琼脂粉，因为高纯度的琼脂优点有含杂质少，水分含量达标，杂菌数量不超标，含有害金属离子非常少，凝固性能强，配出来的培养基清晰度、透明度高，培养基颜色不会变色，含重金属物质极少，显著低于国家标准，不会对菌丝生长产生毒害作用，因此制好的培养基呈透明状。二是“D、加料”步骤能够精准、快速地配比，先加葡萄糖、磷酸二氢钾、硫酸镁入马铃薯滤液，搅匀后，这三者都是易溶物，很快溶于水，最后将高纯度琼脂粉先称重后倒入调配容器，如三角瓶，再倒入上述配好的不含琼脂的PDA营养液，并摇动三角瓶，使琼脂粉在营养液中分布均匀，采用的是品质高的高纯度琼脂粉，所以只需快速摇晃、振荡三角瓶就很能快地将高纯度琼脂粉拌匀了，节省操作时间，提高配比精度，现有技术中葡萄糖、琼脂粉是同时添加的，且搅拌过程中还需用加热锅小火加热，本专利技术与现有技术相比的优点：(1)更便于清洗玻璃器皿和钢筋锅，不含琼脂的培养液不会粘到钢筋锅、漏斗、玻璃棒和勺子上面；(2)减少系统误差导致的PDA中各成分浓度的改变，如以前是在配好的土豆液定容后，加入辅料和琼脂粉继续加热煮沸使琼脂完全融化，这样在加热过程中还有不少水分蒸发掉，达不到标准量，造成了系统误差；(3)减少操作误差：先加琼脂粉后加葡萄糖，琼脂粉接触水后成糊状，易成团，拌不匀、易粘锅，造成其他添加成份被琼脂团粘住，难以混均匀，且拌好后还要换至三角瓶等容器，加了琼脂的培养液粘度大，粘到钢筋锅、漏斗、玻璃棒和勺子上面。三是PDA培养基中添加食用级盐，在菌丝生长阶段，由于食盐中含有钠、镁、钙等金属离子，可以培养健壮的菌丝；在原始母种的超低温保藏期间，可以使菌丝更快的吸收甘油小分子，更好的起到保护作用；在原始母种菌丝恢复阶段由于菌种块的水势差，菌种块容易吸水菌丝萌发成活率高。四是采用去湿控菌技术，现有技术通过加入氯霉素或土霉素，来抑制细菌的生长，减少干扰性，而本专利技术采用增加琼脂粉用量，使培养基偏干，在独创的“G、去湿”步骤中，将皿盖用酒精灯火焰彻底烘干、消毒，控制每个培养皿内小环境的水分，起到控制霉菌滋生的作用，比加入氯霉素或土霉素更加环保，利于后续食用菌母种的生长。五是加入磷酸二氢钾、硫酸镁的作用是能提供母种在生长过程中对必要微量元素的需求，更好的培养生长健壮的菌丝体。六是采用高压短时灭菌方法既起到灭菌的效果，又保持了琼脂粉的高凝固度。总之，本专利技术能快捷、省时、配比精确地制成高透明度的PDA培养基，培养基高透明度，在育菌过程中能更容易发现很微弱的杂菌污染，更清楚地观察菌丝是否粗壮和整齐及变异情况，在切取尖端菌丝等操作时看得更清楚，操作更精确，培养基纯净、透明，无杂菌，培养基厚度均匀、表面平整，皿盖内部上面没有水汽，且制作更方便。具体实施方式实施例一本实施例提出一种高透明度PDA培养基的制作方法，包括以下步骤：A、马铃薯切块：马铃薯200g经清洗、去皮、去芽眼，切边长为4-6mm的正方体丁块；B、煮块：将马铃薯丁块放置热水中，先用大火煮5分钟至软化，再改为文火煮10-14分钟，使马铃薯营养充分散发至水中，同时使马铃薯丁熟而不烂；C、过滤：用6-8层纱布过滤2-3次，保留滤液；D、加料：将葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.9g，硫酸镁1.3g，食用级盐8g，加入上述滤液，搅匀，用水定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高透明度PDA培养基的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：A、马铃薯切块：马铃薯200g经清洗、去皮、去芽眼，切边长为4‑6mm的正方体丁块；B、煮块：将马铃薯丁块放置热水中，先用大火煮5分钟至软化，再改为文火煮10‑14分钟，使马铃薯营养充分散发至水中，同时使马铃薯丁熟而不烂；C、过滤：用6‑8层纱布过滤2‑3次，保留滤液；D、加料：将葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.8‑1.4g，硫酸镁1.2g‑1.7g加入上述滤液，搅匀，用水定容至1000mL；E、调pH值：使用盐酸溶液与氢氧化钠溶液调节pH值至6.5‑7，得到液体培养基；先将高纯度琼脂粉19‑23g分装至数个调配容器中，然后将液体培养基分装到所述数个调配容器中，混匀；F、倒平板：将加了琼脂粉的培养基高温灭菌，降温后，在无菌条件下分装到灭过菌的平板培养皿中，每个培养皿的底部是水平的，每一个培养皿培养基的厚度为3.0±0.5mm；G、去湿：进一步冷却培养皿，将皿盖在酒精灯火焰上把水汽烘干；H、密封并进行无菌检测：用透气的封口膜，在无菌状态下把培养皿封上口，装到无菌的聚丙烯塑料袋中，放到28℃的恒温培养箱里面，2‑4天做无菌检测，经检测完全无菌后得到固态培养基。...

【技术特征摘要】
1.一种高透明度PDA培养基的制作方法，其特征在于，包括
以下步骤：
A、马铃薯切块：马铃薯200g经清洗、去皮、去芽眼，切边长
为4-6mm的正方体丁块；
B、煮块：将马铃薯丁块放置热水中，先用大火煮5分钟至软化，
再改为文火煮10-14分钟，使马铃薯营养充分散发至水中，同时使马
铃薯丁熟而不烂；
C、过滤：用6-8层纱布过滤2-3次，保留滤液；
D、加料：将葡萄糖20g，磷酸二氢钾0.8-1.4g，硫酸镁1.2g-1.7g
加入上述滤液，搅匀，用水定容至1000mL；
E、调pH值：使用盐酸溶液与氢氧化钠溶液调节pH值至6.5-7，
得到液体培养基；先将高纯度琼脂粉19-23g分装至数个调配容器中，
然后将液体培养基分装到所述数个调配容器中，混匀；
F、倒平板：将加了琼脂粉的培养基高...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈凡超，阳国秀，易恢满，夏志兰，姬建军，
申请(专利权)人：湖南省宇秀生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43