一种荧光免疫层析检测试纸制造技术

本实用新型专利技术公开了一种荧光免疫层析检测试纸。包括样品垫(1)，抗体承载膜(2)，吸水纸(3)，依次通过带有粘合剂的底板(4)互相搭接而成，所述抗体承载膜(2)上从靠近样品垫(1)一端分别依次包被标记物的混合物结合线(5)、检测线(6)和质控线(7)，所述标记物的混合物结合线(5)是将荧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物用划膜喷金仪包被在抗体承载膜预处理过的预处理区域(8)内。克服了因结合物在玻纤上滞留过多，释放量不足导致的结果不准确的问题，使检测的荧光值提高，提高了灵敏度或检测上限。同时在生产上，将荧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物包被在抗体承载膜上，可同时将标记物的混合物结合线、T线、C线包被上，省时省工艺，提高生产效率。

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及检测试纸领域，尤其涉及一种荧光免疫层析检测试纸。
技术介绍
临床上所用的试纸大部分是由4部分构成，即依次由样品垫、结合垫、抗体承载膜、吸水纸依次通过有粘合剂的底板依次互相搭接而成，或者样品垫直接用玻璃纤维膜，省去结合垫。其中，在结合垫靠近抗体承载膜一侧涂或喷上带有荧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物。在抗体承载膜上包被检测项目的抗体(或抗原)的T线和质控C线，检测原理即向样品垫加入样品，样品中的待检物层析到结合线，待检物与结合线上的荧光微球与抗体1偶联标记物的混合物特异性反应后形成复合物，层析至T线，形成双抗夹心或竞争，结合线上的生物素标记物层析至C线与亲和素形成特异性反应，利用荧光定量检测系统检测T线和C线区域的富集的荧光强度，反映样本中待测物的含量。这种方法有3个缺点：1，由于玻璃纤维膜材质因素，只能把荧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物喷上去，或者浸泡，如果是喷上去，会有不均匀的缺点，影响精密度，不适用于定量检测；如果是浸泡，不仅不均匀且会浪费大量的微球和抗体，增加成本；2，喷在玻璃纤维膜上的标记物混合物部分会勾到玻璃纤维素膜的立体空间，导致每次层析均一性较差，每次均有不同程度的标记物混合物滞留在玻璃纤维膜上，使得精密度和准确度变大。3，喷膜工艺的均一性比不上包被工艺，导致抗体-荧光结合物的均一性差。
技术实现思路
本技术的目的在于提供一种提高荧光值、精密度，节省材料并简化工艺的荧光免疫层析检测试纸。为实现上述目的，本技术提供一种荧光免疫层析检测试纸，包括样品垫(1)，抗体承载膜(2)，吸水纸(3)，依次通过带有粘合剂的底板(4)互相搭接而成，所述抗体承载膜(2)上从靠近样品垫(1)一端分别依次包被标记物的混合物结合线(5)、检测线(6)和质控线(7)，其特征在于，所述标记物的混合物结合线(5)是将荧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物用划膜喷金仪包被在抗体承载膜预处理过的预处理区域(8)内。进一步，所述抗体承载膜预处理为在靠近样品垫(1)的一端用划膜喷金仪包被上宽度1.8-2.2mm的预处理液；优选的，为在靠近样品垫(1)一端且距边缘4mm的抗体承载膜(2)膜上用划膜喷金仪包被；所述预处理液为PH7.4的0.01MPBS加入20质量体积％蔗糖，2质量体积％BSA和0.02质量体积％NaN3；进一步，所述标记物的混合物结合线(5)位于抗体承载膜预处理过的预处理区域(8)的居中位置。进一步，所述检测线(6)包被被检测项目的抗体2或抗原。进一步，所述预处理区域(8)的宽度大于标记物的混合物结合线(5)宽度；优选地，预处理区域(8)的宽度是标记物的混合物结合线(5)宽度的2倍。进一步，所述荧光微球是采用稀土元素铕或荧光素包裹在二氧化硅颗粒或者乳胶颗粒上；优选地，所述荧光微球为采用稀土元素铕或荧光素包裹在二氧化硅颗粒上。进一步，所述标记物的混合物结合线(5)位于靠近样品垫(1)一端且距边缘4mm的抗体承载膜(2)膜上，标记物的混合物结合线(5)与检测线(6)相隔10mm，标记物的混合物结合线(5)距离质控线(7)15mm。另一方面，本技术还提供一种所述荧光免疫层析检测试纸的制备方法，其特征在于，步骤为，预处理液制备：取PH为7.4的0.01MPBS溶液加入20质量体积％蔗糖，加入2质量体积比％BSA和0.02质量体积％NaN3，充分混匀后；标记物的混合物的制备：选用荧光微球的氨基和葡聚糖的醛基偶联后，按质量比1:1加入抗体1混合，葡聚糖上其他醛基可与抗体1上的氨基偶联，形成荧光微球与抗体1偶联标记物的混合物；优选的，选用荧光微球和抗体1按质量比1:1混合，形成荧光微球与抗体1偶联标记物的混合物；以同样方法，用荧光微球的氨基和葡聚糖的醛基偶联后，按质量比1:1加入生物素混合，葡聚糖上其他醛基可与生物素上的氨基偶联，形成荧光微球和生物素偶联的标记物；将所述两种标记物按体积比1:1混合，并用含1质量比％BSA的pH7.4，0.01MPBS500倍稀释混合物；T线包被液的配制：用pH7.4，0.01MPBS稀释液将鼠抗检测项目的单克隆抗体稀释至工作浓度；C线包被液的配制：用pH7.4，0.01MPBS稀释液将亲和素稀释至工作浓度；抗体承载膜(2)的预处理：选用硝酸纤维膜作为抗体承载膜，在靠近将要贴玻璃纤维膜的一端用划膜喷金仪包被上宽度约2mm的上述制备好的预处理液，该宽度约2mm的区域称为预处理区域；45℃2h烘干；包被线：将上述预处理后的硝酸纤维膜通过划膜喷金仪将荧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物荧光、T线包被液、C线包被液同时包被上去，形成标记物的混合物结合线、T线、C线，所述3条线，线宽均为1mm；标记物的混合物结合线(5)与检测线(6)距离约10mm，标记物的混合物结合线(5)与质控线(7)距离约15mm；之后将该包被后的NC膜于45℃2h烘干；所述标记物的混合物结合线(5)位于预处理区域的居中位置；组装成检测卡：将玻璃纤维膜和烘干包被后的硝酸纤维膜、吸水纸依次粘贴组装，组装完成后用切条机切成每条宽度为4mm的试条，装进试条卡，压卡，制备成检测卡即可。还一方面，本技术还提供一种所述荧光免疫层析检测试纸用于抗原或抗体的检测的用途。进一步，加样品于权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸的样品垫上，样品中的待检物层析到结合线，待检物与所述荧光免疫层析检测试纸的结合线上的抗体1标记物特异性反应后形成复合物，层析至T线，形成双抗夹心或竞争，结合线上的生物素标记物层析至C线与亲和素形成特异性反应，利用荧光定量检测系统检测T线和C线区域的富集的荧光强度，将T/C荧光强度值处理后带入标准曲线即得出样品中待测物的含量；优选的，所述标准曲线得到的方法为，用pH7.4，0.01MPBS稀释国家或国际标准品到所需的线性浓度，用荧光免疫层析检测试纸测试各浓度相应的荧光强度值，标准品浓度和荧光强度值比值拟合得到相关趋势线。本技术的荧光免疫层析检测试纸用于抗原、抗体的检测，包括人体、动植物、中的抗原抗体检测，食品、食品添加剂中抗原抗体检测等。所述样品垫(1)可以是玻璃纤维素膜；带有粘合剂的底板(4)可以是带粘合剂的衬板(PVC板)。所述标记物的混合物结合线(5)所在的预处理区域(8)离T线(6)位置保持有一定距离，保证预处理液不影响T线。本专利技术所述检测线(6)又称为T线(6)。所述标记物的混合物结合线(5)，所在的膜部位置上在包被前经过预处理，T线(6)为检测线包被检测项目的抗体2(或抗原)，C线为质控线(7)包被亲和素，通过待检物与结合线上的荧光微球与抗体1偶联标记物的混合物特异性反应后形成复合物，层析至T线(6)，形成双抗夹心或竞争，结合线上的生物素标记物层析至C线与亲和素形成特异性反应，利用荧光定量检测系统检测T线和C线区域的富集的荧光强度，反映样本中待测物的含量。本技术所述荧光免疫层析检测试纸具有增强荧光颗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种荧光免疫层析检测试纸，包括样品垫(1)，抗体承载膜(2)，吸水纸(3)，依次通过带有粘合剂的底板(4)互相搭接而成，所述抗体承载膜(2)上从靠近样品垫(1)一端分别依次包被标记物的混合物结合线(5)、检测线(6)和质控线(7)，其特征在于，所述标记物的混合物结合线(5)是将荧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物用划膜喷金仪包被在抗体承载膜预处理过的预处理区域(8)内。

【技术特征摘要】
1.一种荧光免疫层析检测试纸，包括样品垫(1)，抗体承载膜(2)，吸水纸(3)，依次通过带有粘合剂的底板(4)互相搭接而成，所述抗体承载膜(2)上从靠近样品垫(1)一端分别依次包被标记物的混合物结合线(5)、检测线(6)和质控线(7)，其特征在于，所述标记物的混合物结合线(5)是将荧光微球分别与抗体1和生物素偶联标记物的混合物用划膜喷金仪包被在抗体承载膜预处理过的预处理区域(8)内。
2.权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述抗体承载膜预处理为在靠近样品垫(1)的一端用划膜喷金仪包被上宽度1.8-2.2mm的预处理液。
3.权利要求2所述荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述抗体承载膜预处理为在靠近样品垫(1)一端且距边缘4mm的抗体承载膜(2)膜上用划膜喷金仪包被。
4.权利要求1所述荧光免疫层析检测试纸，其特征在于，所述标记物的混合物结合线(5)位于抗体承载膜预处理过的预处理区域(8)的居中位置。
5.权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：颜珊，杨莉莉，吴颖，张国锋，
申请(专利权)人：厦门宝太生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：福建;35