一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物制造技术

本发明专利技术公开了一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物及其制备方法和在抗肿瘤领域的应用。鲜冬虫夏草提取物由如下方法制备而成：将鲜冬虫夏草剪碎后加水匀浆，对匀浆后鲜冬虫夏草进行低温超声波辅助提取，离心，取上清，冷冻干燥得到鲜冬虫夏草提取物。本发明专利技术得到的鲜冬虫夏草提取物对黑色素瘤细胞具有很好的抑制效果，同时安全性高，具有良好的药用前景。本发明专利技术提取物制备工艺简单，易于大规模生产，使用安全。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及中药和天然药物领域，具体涉及一种鲜冬虫夏草提取物的制备方法及其在抗肿瘤方面的应用。
技术介绍
冬虫夏草为麦角菌科真菌冬虫夏草菌Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.寄生在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子座和幼虫尸体的复合体。冬虫夏草中含有多种活性成分，包括核苷、多糖、甾醇、脂肪酸、蛋白质、多肽和挥发性成分等，具有抗肿瘤、调节免疫系统、促进机体细胞损伤修复、抗自由基、抗氧化、延缓衰老、保护心肌及血管细胞、改善心血管功能、保护肝脏、保护肾脏、调节呼吸系统、调节血液系统以及调节血脂等功能。不少消费者采用的高温炖煮干冬虫夏草的食用方式，会造成热敏物质的破坏，鲜冬虫夏草可最大限度的保留其中的活性成分。黑色素瘤是皮肤癌中最具侵袭性的恶性肿瘤，近20年，世界范围发病率急剧上升，每年以3.1％的速度增加。黑色素瘤对放化疗不敏感、预后差，是最难有效治疗的肿瘤之一。已有研究表明，冬虫夏草对多种肿瘤细胞具有显著的抑制作用，其中也包括黑色素肿瘤。然而现有文献报道都以阴干、烘干或者晒干冬虫夏草或者以冬虫夏草人工发酵菌丝体为研究材料，且都采用较高温度水提取或使用有机溶剂提取。如文献《InhibitoryeffectsofethylacetateextractofCordycepssinensismyceliumonvariouscancercellsincultureandB16melanomainC57BL-6mice》报道了冬虫夏草人工发酵菌丝体的乙酸乙酯提取物对MCF-7乳腺癌细胞和B16黑色素瘤细胞具有很好的抑制作用，而其热水提取物则无抑制作用。文献《Myceliumcultivation,chemicalcompositionandantitumouractivityofaTolypocladiumsp.fungusisolatedfromwildCordycepssinensis》也报道了冬虫夏草发酵菌丝体浸提物在体外对B16黑色素瘤细胞生长抑制作用较差。鲜冬虫夏草不经过干燥处理过程，能够很好的保持其各种活性成分，特别是挥发性成分和热敏感性的大分子活性物质。本专利技术选用新鲜冬虫夏草作为原料，控制温度在15～25℃的水中进行超声、冻融、再超声的提取方法，能够很好的保留其中的活性成分。为提取冬虫夏草中活性成分的研究提供了一种新的方法和思路。
技术实现思路
本专利技术通过对鲜冬虫夏草深入研究，提供一种具有抗肿瘤活性的鲜冬虫夏草提取物及其应用。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一方面，本专利技术提供一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，是以鲜冬虫夏草为原料，在温度为15～25℃条件下用水提取所得。在一些实施例中，本专利技术所述的一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，是以鲜冬虫夏草为原料，在温度为15～25℃条件下用水经匀浆、超声提取，然后离心、收集上清液并冷冻干燥所得。在一些实施例中，本专利技术所述的一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其制备方法包括下述步骤：a、将鲜冬虫夏草用水匀浆、粉碎，控制温度为15～25℃；b、将匀浆后的鲜冬虫夏草进行超声提取，控制温度为15～25℃，然后将鲜冬虫夏草提取液于-20℃冷冻静置；c、将冷冻的鲜冬虫夏草提取液取出，匀浆并分散均匀，再次超声提取，控制温度控制为15～25℃，然后离心、收集上清液；d、将上清液冷冻干燥得鲜冬虫夏草提取物。在一些实施例中，本专利技术所述的一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其制备方法的步骤a中，水用量为8-12倍体积，匀浆时间为6～8min，匀浆转速为14000～16000rpm。在一些实施例中，本专利技术所述的一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其制备方法的步骤b中，超声提取时间为20～40min，冷冻时间为40～60min。在一些实施例中，本专利技术所述的一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其制备方法的步骤c中，再次超声提取时间为20～40min，离心时间为10～15min，离心的转速为8000～10000rpm。在一些实施例中，本专利技术所述的一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其制备方法包括下述步骤：a、将鲜冬虫夏草破碎，加8～12倍量的水，匀浆6～8min，匀浆转速为14000～16000rpm，控制温度为15～25℃，将鲜冬虫夏草粉碎成细小颗粒的悬浊液；b、将匀浆后的鲜冬虫夏草进行超声提取20～40min，控制温度为15～25℃，然后将鲜冬虫夏草提取液置于-20℃冰箱冷冻静置40～60min；c、将冷冻的鲜冬虫夏草提取液取出，匀浆并分散均匀，再次超声提取20～40min，控制温度控制为15～25℃，离心10～15min，转速为8000～10000rpm，收集上清液；d、将上清液冷冻干燥得鲜冬虫夏草提取物。在一些实施例中，本专利技术所述的一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其制备方法包括下述步骤：a、将鲜冬虫夏草破碎，加10倍量的水，匀浆7min，匀浆转速为15000rpm，控制温度为20±2℃，将鲜冬虫夏草粉碎成细小颗粒的悬浊液；b、将匀浆后的鲜冬虫夏草进行超声提取30min，控制温度为20±2℃，然后将鲜冬虫夏草提取液置于-20℃冰箱冷冻静置50min；c、将冷冻的鲜冬虫夏草提取液取出，匀浆并分散均匀，再次超声提取30min，控制温度在20±2℃，离心12min，转速为9000rpm，收集上清液；d、将上清液冷冻干燥得鲜冬虫夏草提取物。另一方面，本专利技术提供本专利技术所述的具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物在制备抗黑色素瘤药物中应用。在一些实施例中，本专利技术所述的具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物在制备抗黑色素瘤药物中应用，其中，所述抗黑色素瘤药物是抑制人黑色素瘤B16细胞的药物。本专利技术的积极效果：1.本专利技术选用新鲜冬虫夏草作为原料，控制温度在15～25℃，采用超声、冻融再超声的提取方法，能够很好的保留其中的活性成分。2.本专利技术提取物对B16黑色素瘤细胞具有很强的抑制作用，IC50仅为0.02mg/mL，具有非常广阔的应用前景。3.本专利技术提取物为天然活性成分，安全可靠，为开发疗效好且毒副作用小的新型抗肿瘤药物提供了很好的基础。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。鲜冬虫夏草来源：宜昌山城水都冬虫夏草有限公司新鲜采收。超声仪器来源及参数：KQ-500DB数控超声清洗机(昆山市超声仪器有限公司)，功率：500w；超声频率：40khz。离心设备来源：272R-3超大容量冷冻离心机(湖南湘离仪器厂)实施例1取鲜冬虫夏草10g，剪碎，加10倍量的水，高速匀浆7min，匀浆转速为15000rpm，控制温度20±2℃，将鲜冬虫夏草粉碎成细小颗粒悬浊液，超声辅助提取30min，控制温度为20±2℃，然后将鲜冬虫夏草提取液置于-20℃冰箱冷冻静置50min取出，匀浆并分散均匀，再次超声提取30min，控制温度控制在20±2℃，离心12min，转速为9000rpm，收集上清液，冷冻干燥得鲜冬虫夏草提取物。实施例2取鲜冬虫夏草10g，剪碎，加8倍量的水，高速匀浆6min，匀浆转速为14000rpm本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其特征在于，以鲜冬虫夏草为原料，在温度为15～25℃条件下用水提取所得。

【技术特征摘要】
1.一种具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其特征在于，以鲜冬虫夏草为原料，在温度为15～25℃条件下用水提取所得。2.如权利要求1所述的具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其特征在于，以鲜冬虫夏草为原料，在温度为15～25℃条件下用水经匀浆、超声提取，然后离心、收集上清液并冷冻干燥所得。3.如权利要求1所述的具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其特征在于，其制备方法包括下述步骤：a、将鲜冬虫夏草用水匀浆、粉碎，控制温度为15～25℃；b、将匀浆后的鲜冬虫夏草进行超声提取，控制温度为15～25℃，然后将鲜冬虫夏草提取液于-20℃冷冻静置；c、将冷冻的鲜冬虫夏草提取液取出，匀浆并分散均匀，再次超声提取，控制温度控制为15～25℃，然后离心、收集上清液；d、将上清液冷冻干燥得鲜冬虫夏草提取物。4.如权利要求3所述的具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其特征在于，其制备方法的步骤a中，水用量为8-12倍体积，匀浆时间为6～8min，匀浆转速为14000～16000rpm。5.如权利要求3所述的具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其特征在于，其制备方法的步骤b中，超声提取时间为20～40min，冷冻时间为40～60min。6.如权利要求3所述的具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其特征在于，其制备方法的步骤c中，再次超声提取时间为20～40min，离心时间为10～15min，离心的转速为8000～10000rpm。7.如权利要求1所述的具有抗黑色素瘤活性的鲜冬虫夏草提取物，其特征在于，其制备方法包括下...

【专利技术属性】
技术研发人员：田野，肖瑛，江晓梅，黄嘉仪，徐香琴，李文佳，钱正明，
申请(专利权)人：广东东阳光药业有限公司，宜昌山城水都冬虫夏草有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44