一种野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基，该培养基的配比由一定比例的KNO3、(NH4)3SO4、KH2PO4、MgSO4•7H2O、CaCl2•2H2O、MnSO4•4H2O、ZnSO4•7H2O、H3BO3、KI、NaMoO4•2H2O、CuSO4•5H2O、CoCl2•6H2O、FeSO4•7H2O、甘氨酸、丙氯酸、赖氨酸、烟酸、叶酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、肌醇、水解乳蛋白、酵母浸提物、NAA、2.4‑D、蔗糖、琼脂、活性炭组成，pH值为5.5。采用本发明专利技术的技术方案，对野栽杂种后代花药培养时愈伤组织诱导率高，能够诱导出高质量的愈伤组织，愈伤组织的结构坚实。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于稻种资源研究的植物组织培养
，尤其涉及一种野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基。
技术介绍
在有性杂交技术中，采用种间远缘杂交方法是有效的转移种间优异基因的有效方法，但是该方法也存在最难克服的技术问题，就是在野栽稻种间杂交后代自交分离严重，在很长时期内很难获得稳定的优良品系的技术问题。我们曾经做过1400多个野栽杂交组合，先后历史10余年，仍然有部分杂交组合后代品系继续分离，无法获得自交稳定品系，从而严重影响野生稻优异种质(优异基因)的应用。同时，经过调查，许多育种家都一致反映，利用野生稻优异种质作杂交育种周期很长，杂种后代出现严重分离是造成周期长的主要原因。所以，大家都希望能采取新技术克服这一难题，提供容易稳定的具有优异基因的中间材料，进而促进野生稻优异种质的利用。然而，在野栽远缘杂交后代(F2～6)的花药培养研究中发现，花药培养的第一步就是要得到花药愈伤组织，而且必须是高诱导率的花药愈伤组织；但是，采用现有技术的花药愈伤组织的培养基得到的愈伤诱导率很低，最高只能达到10％左右，所以严重影响了花药培养的效率。
技术实现思路
针对以上技术问题，本专利技术公开了一种野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基，对野栽杂种后代花药培养具有高效诱导愈伤组织的效果。对此，本专利技术的技术方案为：一种野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基，其包括的组分及其浓度为：其中，所述铁盐中含有的FeSO4的摩尔浓度为0.02mol/l。作为本专利技术的进一步改进，所述的野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基包括的组分及其浓度为：作为本专利技术的进一步改进，所述铁盐采用铁盐母液；所述铁盐母液为将5.57g FeSO4·7H2O和7.45g Na-EDTA定容于1000ml蒸馏水中得到。在水稻野栽(栽野)远缘杂交过程中或者在野生稻优异种质创新、育种过程常常出现杂种F2代及以后的子代(F2～Fn)中严重分离的现象，这种现象严重阻碍野生稻优异种质利用。我们在近10年来先后作了1000余个普通野生稻与栽培稻品种杂交组合，部分不经过本培养基进行花药培养的杂交组合后代材料已经超过F18代，还在继续分离，很难获得稳定的优良材料。采用野栽杂种后代(F2～4)的材料进行花药培养获取单倍体愈伤组织进而分化出单倍体绿苗在H1代就获得稳定单株，H2代就形成稳定株系，能够有效地克服野栽杂种后代疯狂分离技术难题，并极大地缩短野栽杂交育种周期，提升野生稻优异种质(基因)利用效果。在研制本野栽杂种花药愈伤组织诱导培养基前，我们采用栽培稻的花药培养的愈伤组织诱导培养基，进行野栽杂种后代花药愈伤组织诱导培养，愈伤组织诱导率普遍较低，在80多次试验中平均愈伤组织诱导率徘徊5％左右，并且出现大量参试杂交组合花药愈伤组织诱导率为0的现象。采用本专利技术的技术方案，在野生稻优异种质创新研究及野栽杂交育种过程中先后做了200多次试验，每次小花2800多枚，共试验576000多枚小花，平均愈伤组织诱导率20％以上，株系最高诱导率33％以上。比现有技术的培养基的平均诱导率提高2倍多，达到和超过栽培稻品种间杂交后代花药培养愈伤组织诱导率，为从根本上解决普通野生稻与栽培稻的野栽杂交后代疯狂分离的技术难题提供了新的方向，为野生稻优异种质利用打下坚实基础。与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：采用本专利技术的技术方案，愈伤组织诱导率高，能够诱导出高质量的愈伤组织，表现在愈伤组织的结构坚实，分化率较好，有效地提升了我国普通野生稻与栽培稻杂交后代花药愈伤组织诱导技术水平，基本上解决野栽杂种后代花药愈伤组织诱导难，为进一步解决野生稻优异基因在水稻(杂交水稻、超级稻、优质常规稻)利用的技术难题奠定了基础。具体实施方式下面对本专利技术的较优的实施例作进一步的详细说明。实施例1一种野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基，其包含的组分及其浓度为：KNO3 2810mg/l，(NH4)3SO4 673mg/l，KH2PO4 515mg/l，MgSO4·7H2O 175mg/l，CaCl2·2H2O 156mg/l，MnSO4·4H2O 20.2mg/l，ZnSO4·7H2O 7.6mg/l，H3BO3 1.5mg/l，KI 0.7mg/l，NaMoO4·2H2O 0.015mg/l，CuSO4·5H2O 0.015mg/l，CoCl2·6H2O 0.015mg/l，铁盐9ml/L，甘氨酸1.8mg/l，丙氯酸1.8mg/l，赖氨酸1.8mg/l，烟酸0.4mg/l，叶酸0.4mg/l，盐酸硫胺素0.8mg/l，盐酸吡哆素0.4mg/l，肌醇48mg/l，水解乳蛋白780mg/l，酵母浸提物980mg/l，NAA 1.5mg/l，2.4-D 3.2mg/l，蔗糖14800mg/l，琼脂8800mg/l，活性炭10mg/l，pH为5.5。其中，铁盐采用铁盐母液加入；所述铁盐母液为将5.57g FeSO4·7H2O和7.45g Na-EDTA定容于1000ml蒸馏水中得到，在添加铁盐时，每升培养基取铁盐母液9ml。实施例2一种野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基，其包含的组分及其浓度为：KNO3 2820mg/l，(NH4)3SO4 685mg/l，KH2PO4 520mg/l，MgSO4·7H2O 180mg/l，CaCl2·2H2O 160mg/l，MnSO4·4H2O 20.5mg/l，ZnSO4·7H2O 8.0mg/l，H3BO3 2.0mg/l，KI 0.9mg/l，NaMoO4·2H2O 0.02mg/l，CuSO4·5H2O 0.02mg/l，CoCl2·6H2O 0.02mg/l，铁盐9ml/L，甘氨酸2.0mg/l，丙氯酸2.0mg/l，赖氨酸2.0mg/l，烟酸0.5mg/l，叶酸0.5mg/l，盐酸硫胺素1.0mg/l，盐酸吡哆素0.5mg/l，肌醇50mg/l，水解乳蛋白800mg/l，酵母浸提物1000mg/l，NAA2.0mg/l，2.4-D 3.5mg/l，蔗糖15000mg/l，琼脂9000mg/l，活性炭10mg/l，pH为5.6。其中，铁盐采用铁盐母液加入；所述铁盐母液为将5.57g FeSO4·7H2O和7.45g Na-EDTA定容于1000ml蒸馏水中得到，在添加铁盐时，每升培养基取铁盐母液9ml。实施例3一种野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基，其包含的组分及其浓度为：KNO3 2850mg/l，(NH4)3SO4 713mg/l，KH2PO4 535mg/l，MgSO4·7H2O 195mg/l，CaCl2·2H2O 176mg/l，MnSO4·4H2O 24.2mg/l，ZnSO4·7H2O 9.6mg/l，H3BO3 2.5mg/l，KI 0.9mg/l，NaMoO4·2H2O 0.035mg/l，CuSO4·5H2O 0.035mg/l，CoCl2·6H2O 0.035mg/l，铁盐10ml/L，甘氨酸2.1mg/l，丙氯酸2.1mg/l，赖氨酸2.1mg/l，烟酸0.5mg/l，叶酸0.5mg/l，盐酸硫胺素1.0mg/l，盐本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基，其特征在于：其包括的组分及其浓度为：KNO3              2780~2880mg/l，(NH4)3SO4          650~720 mg/l，KH2PO4            500~550 mg/l，MgSO4•7H2O        155~210 mg/l，CaCl2•2H2O        146~196mg/l，MnSO4•4H2O        19.5~26.2mg/l，ZnSO4•7H2O        6.6~9.6 mg/l，H3BO3             1.0~2.8mg/l，KI               0.6~1.0mg/l，NaMoO4•2H2O      0.015~0.035 mg/l，CuSO4•5H2O        0.010~0.040mg/l，CoCl2•6H2O        0.010~0.040mg/l，铁盐             9~11ml/L，甘氨酸           2.0±0.2 mg/l，丙氯酸           2.0±0.2mg/l，赖氨酸           2.0±0.2 mg/l，烟酸             0.5±0.1mg/l，叶酸             0.5±0.1mg/l，盐酸硫胺素       1.0 ±0.2 mg/l，盐酸吡哆素       0.5±0.2mg/l，肌醇             50±3mg/l，水解乳蛋白       800±30 mg/l，酵母浸提物       1000±30 mg/l，NAA              2.0±0.8 mg/l，2.4‑D            3.5±0.3 mg/l，蔗糖             15000±200 mg/l，琼脂             9000±200 mg/l，活性炭           10±2 mg/l，pH               5.5~5.8；其中，所述铁盐中含有的FeSO4的摩尔浓度为0.02mol/l。...

【技术特征摘要】
1.一种野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基，其特征在于：其包括的组分及其浓度为：KNO3 2780~2880mg/l，(NH4)3SO4 650~720 mg/l，KH2PO4 500~550 mg/l，MgSO4•7H2O 155~210 mg/l，CaCl2•2H2O 146~196mg/l，MnSO4•4H2O 19.5~26.2mg/l，ZnSO4•7H2O 6.6~9.6 mg/l，H3BO3 1.0~2.8mg/l，KI 0.6~1.0mg/l，NaMoO4•2H2O 0.015~0.035 mg/l，CuSO4•5H2O 0.010~0.040mg/l，CoCl2•6H2O 0.010~0.040mg/l，铁盐 9~11ml/L，甘氨酸 2.0±0.2 mg/l，丙氯酸 2.0±0.2mg/l，赖氨酸 2.0±0.2 mg/l，烟酸 0.5±0.1mg/l，叶酸 0.5±0.1mg/l，盐酸硫胺素 1.0 ±0.2 mg/l，盐酸吡哆素 0.5±0.2mg/l，肌醇 50±3mg/l，水解乳蛋白 800±30 mg/l，酵母浸提物 1000±30 mg/l，NAA 2.0±0.8 mg/l，2.4-D 3.5±0.3 mg/l，蔗糖 15000±200 mg/l，琼脂 9000±200 mg/l，活性炭 10±2 mg/l，pH 5.5~5.8；其中，所述铁盐中含有的FeSO4的摩尔浓度为0.02mol/l。2.根据权利要求1所述的野栽杂交后代花药愈伤组织诱导培养基，其特征在于，其包括的组分及其浓度为：KNO3 ...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁云涛，陈成斌，
申请(专利权)人：广西壮族自治区农业科学院水稻研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45