一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法技术

本发明专利技术提供了一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法，包括，对动植物油中甘三酯进行层析分离并收集甘油三酯，将其用脂肪酶水解后，对水解产物经薄层层析分离，确定α游离脂肪酸并收集进行衍生化处理，进气相色谱检测，测定甘油三酯中α位脂肪酸的组成及含量。该方法具有操作简便、试剂安全、需要溶剂消耗量少、分析结果准确、检测限低、分析时间快的优点、样品需求量低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于油脂测定领域，具体涉及一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法。
技术介绍
食用动植物油的主要组成成分为甘油三酯，其含量占总脂类的95％以上，5％为其他脂类，如甘油二酯，单甘油酯，脂肪酸、磷脂、糖脂和固醇类等。甘油三酯是由一分子甘油和三分子脂肪酸通过酯化反应生成，酯化的脂肪酸分别位于α和β位，其化学结构式如附图2。天然存在的油脂由于来源、脂肪酸种类和含量，碳链长短、双键数目、双键位置的差异而具有不同的理化性质和流变特性。不仅如此，脂肪酸在甘三酯中的位置分布决定着甘三酯的消化，吸收，代谢及营养价值。例如：棕榈酸(C16：0)是母乳中的主要脂肪酸组分(占总脂肪酸25％)，其中≥65％位于β位置上，被胰脂酶水解形成β-甘一酯，与胆盐形成乳糜微粒而被机体吸收。而牛乳和婴儿配方乳中的棕榈酸主要分布在α位，其被胰脂酶水解为游离脂肪酸，易与Ca 2+形成钙皂，不能被人体很好地吸收利用。而甘三酯中的油酸(C18：1)位于α位时更容易被机体利用，提供能量。另外，硬脂酸(C18：0)处于α位时不具有升高血脂和胆固醇的作用，而位于β位时则与肉豆蔻酸(C 14：0)和棕榈酸(C 16：0)一样具有升高血液胆固醇作用。同时，酰化位置对血浆脂肪酸分布也有重要影响，因此油脂中脂肪酸组成固然重要，但脂肪酸的位置分布也不容忽视，这就需要对油脂中脂肪酸的位置分布进行测定。目前，国内外开展了大量的关于甘三酯α或β位脂肪酸检测技术的研究工作。常用的测定甘三酯中脂肪酸位置分布的方法有胰脂酶水解法和格氏降解法。胰脂酶水解法是根据胰脂酶的α特异性，通过水解甘三酯α位上的脂肪酸，对β-甘一酯进行测定，分析脂肪酸的位置分布的一种常用的酶解方法。然而，胰脂酶水解具有脂肪酸和立体区位选择性，尤其是对多不饱和脂肪酸和中短链脂肪酸，所以，无法准确分析这些脂肪酸的位置分布。另一种方法是格氏降解法，格氏反应将甘三酯α位酯化脂肪酸降解，对生成的甘二酯进行测定，从而计算出脂肪酸位置分布的一种化学方法。此方法可以避免胰脂酶对脂肪酸的选择性水解，但是，烯丙基溴化镁遇水极易失活，且具有毒性。因此，探索其他 脂肪酶特异性水解动植物油脂检测甘三酯α位脂肪酸组成的方法，对深入分析动植物甘三酯的结构有重要意义。
技术实现思路
本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。鉴于上述和/或现有动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法中存在的问题，提出了本专利技术。因此，本专利技术的目的是解决现有技术的不足，提供一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法，其特征在于，包括，对动植物油中甘三酯进行层析分离并收集甘油三酯，将其用脂肪酶水解后，对水解产物经薄层层析分离，确定α游离脂肪酸并收集进行衍生化处理，进气相色谱检测，测定甘油三酯中α位脂肪酸的组成及含量。作为本专利技术所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述层析分离，其是采用硅胶柱层析分离，其中，柱层析洗脱液为石油醚和乙醚，其体积比为80～90：10～15，洗脱速度为1～3ml/min。作为本专利技术所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述脂肪酶水解，其是加入脂肪酶、胆酸钠、CaCl2:，在37～55℃下，保持15～25min，然后在3000～5000r/min的条件下，离心5min。作为本专利技术所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述脂肪酶为米根霉发酵生产的α特异性脂肪酶，其添加量为甘油三酯质量的5～15％。作为本专利技术所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述脂肪酶水解，还加入MgCl2，且满足添加后Mg2+在混合液中的浓度为3～4mmol/L。作为本专利技术所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述薄层层析分离，其是将硅胶G板置于105℃烘箱中活化1h，然 后用0.4mol/L硼酸溶液饱和处理，自然通风晾干后进行展开，在薄板上均匀喷洒0.2wt％的2，7二氯荧光素的甲醇溶液并在紫外灯下显色处理，油酸作为参照标样，确定α-游离脂肪酸在高效薄层色谱上的位置，将α-游离脂肪酸条带刮下，用乙醚提取。作为本专利技术所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述进行展开，其中，使用的扩展液为己烷、乙醚、乙酸按体积比为70～80：20～30：0.5～1的混合液，处理时间为40～50min。作为本专利技术所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述衍生化处理，其是使用氮吹仪将溶剂挥发掉，并向离心管中加入1～2mL正己烷和0.5～1mL 1～1.5mol/L的氢氧化钠-甲醇溶液，将混合液涡旋混匀1min，4000～5000r/min离心3～5min，收集上清液。作为本专利技术所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述进气相色谱检测，其是吸取上清液于进样瓶中，采用气相色谱-氢火焰离子检测，载气为纯度大于99.99％的氮气，载气流速为1.0mL/min，分流比为100～50∶1，气化室温度250～300℃，FID检测器温度为250～300℃，进样体积1.0μL，气相色谱柱规格为SP-2560、100m×0.25mm、0.20μm毛细管柱。作为本专利技术所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法的一种优选方案，其中：所述气相色谱-氢火焰离子检测分析条件为程序升温，其初始温度为80～100℃，保持2～5min，以5～15℃/min升至160～200℃，保持2～5min，再以5～15℃/min升温至210～230℃。本专利技术所具有的有益效果：本专利技术将层析分离、脂肪酶水解、薄层层析、脂肪酸衍生化、气相色谱检测五个环节优选结合以及参数条件优选优化(包括酶解条件、展开剂相关因素等)，形成独有的对动植物油脂甘三酯α位脂肪酸进行测定的方法，该方法具有操作简便、试剂安全、需要溶剂消耗量少、分析结果准确、检测限低、分析时间快的优点、样品需求量低。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术 的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：图1是实施例1～5中甲酯化衍生物在SP-2560，100m×0.25mm，0.20μm毛细管气相色谱柱上的分离图谱，根据出峰顺序确定各种脂肪酸甲酯的保留时间。图2是甘油三酯的化学结构式。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本专利技术的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本专利技术，但是本专利技术还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本专利技术内涵的情况下做类似推广，因此本专利技术不受下面公开的具体实施例的限制。其次，此处所称的“一个实施例”或“实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法，其特征在于：包括，对动植物油中甘三酯进行层析分离并收集甘油三酯；将其用脂肪酶水解后，对水解产物经薄层层析分离，确定α游离脂肪酸并收集进行衍生化处理；进气相色谱检测，测定甘油三酯中α位脂肪酸的组成及含量。

【技术特征摘要】
1.一种动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法，其特征在于：包括，对动植物油中甘三酯进行层析分离并收集甘油三酯；将其用脂肪酶水解后，对水解产物经薄层层析分离，确定α游离脂肪酸并收集进行衍生化处理；进气相色谱检测，测定甘油三酯中α位脂肪酸的组成及含量。2.根据权利要求1所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法，其特征在于：所述层析分离，其是采用硅胶柱层析分离，其中，柱层析洗脱液为石油醚和乙醚，其体积比为80～90：10～15，洗脱速度为1～3ml/min。3.根据权利要求1或2所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法，其特征在于：所述脂肪酶水解，其是加入脂肪酶、胆酸钠、CaCl2，在37～55℃下，保持15～25min，然后在3000～5000r/min的条件下，离心5min。4.根据权利要求1或2所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法，其特征在于：所述脂肪酶为米根霉发酵生产的α特异性脂肪酶，其添加量为甘油三酯质量的5～15％。5.根据权利要求3所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法，其特征在于：所述脂肪酶水解，还加入MgCl2，且满足添加后Mg2+在混合液中的浓度为3～4mmol/L。6.根据权利要求1、2或5任一所述动植物油脂甘三酯α位脂肪酸的测定方法，其特征在于：所述薄层层析分离，其是将硅胶G板置于105℃烘箱中活化1h，然后用0.4mol/L硼酸溶液饱和处理，自然通风晾干后进行展开，在薄板上均匀喷洒0.2wt％的2，7-二氯荧光素的甲醇溶液并在紫外灯下显色处理，油酸作...

【专利技术属性】
技术研发人员：王兴国，张惠君，金青哲，刘睿杰，常明，黄健花，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32