本发明专利技术涉及来源于作为胎盘的细微组织的滋养层基底层(basal portion of chorionic trophoblast layer，bCT)的干细胞及包含其的细胞治疗剂。与现有的来源于整个胎盘或其它组织的干细胞相比，本发明专利技术的来源于滋养层基底层的干细胞具有匀质的生长特性、优秀的增殖特性及分化特性，在组织缺损动物模型中具有优秀的组织再生效果，从而可有效地用作细胞治疗剂。
Stem cells derived from the trophoblast basal layer and cell therapeutic agents comprising the same
The present invention relates to the basal layer of trophoblast derived from the placenta as minor (basal portion of chorionic trophoblast layer, bCT) stem cells and cells containing the therapeutic agent. Compared with the existing sources in the placenta or other tissue stem cells, proliferation and differentiation characteristics of growth characteristics, sources in the trophoblast stem cells of the basal layer with uniform quality excellent, with excellent organization in the regeneration of tissue defects in animal models, which can be effectively used as cell treatment agent.
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及来源于作为胎盘的细微组织的滋养层基底层(basal portion of chorionic trophoblast layer，bCT)的干细胞及包含其的细胞治疗剂。
技术介绍
最近生命工程将人类福利作为最终目标来提供可解决粮食、环境、健康问题的新解决办法，其中利用干细胞的技术正成为治疗顽固性疾病的新篇章。以前为了治疗人类的顽固性疾病而提出了脏器移植、基因治疗等，但由于免疫排斥反应和脏器供应不足、载体研发或者缺少针对疾病基因的知识而无法有效地应用。由此，提高了对干细胞的关注，从而认识到具有通过增殖和分化可形成所有器官的能力的全能干细胞既能治疗大部分的疾病又能从根本上解决脏器损害。并且，许多科学家们提出了通过使用干细胞既能实现人体的几乎所有脏器再生又能治疗帕金森病、各种癌、糖尿病和脊椎损伤等的多种可能性。干细胞(stem cell)是指作为未分化的细胞具有自我复制能力及分化成两个以上的互不相同种类的细胞的能力的细胞。干细胞根据细胞学起源可分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞来源于受精卵或者生成中的胎儿组织等，相反，成体干细胞来源于作为完成胎儿生长后的个体组织的骨髓、脐带血、脂肪、胎盘、肌肉、滑膜、脑、肝、胰脏等。另一方面，由于胚胎干细胞存在道德上的限制，因此在使用为细胞治疗剂的方面存在限制，但与此相反地，由于成体干细胞可主要从骨髓、脂肪、脐带血及胎盘等获取，从而不存在道德上的问题。其中，在上述干细胞为来源于胎盘的干细胞的情况下，利用分娩后废弃的胎盘，从而存在容易提取且可便于确保大量的干细胞的优点。在上述干细胞为来源于脂肪或骨髓的干细胞的情况下，受到所要分离、提取的捐献者的年纪或健康状态等影响而在增殖力或分化能力等上有限制，而且变动性多，但在来源于胎盘的干细胞的情况下，作为成体干细胞中可最早获取的干细胞，几乎不受到根据捐献者的年纪等的变数的干细胞干性影响，而且具有优秀的增殖力及分化能力。并且，来源于胎盘的干细胞具有可分离能够适用于神经系统疾病、肝病、肌肉骨骼疾病等多种疾病的干细胞组的优点。由于上述的优点，正积极进行与来源于胎盘的干细胞相关的研究。例如，在韩国专利授权第818214号中公开了利用含N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC，N-acrtyl-L-cysteine)的培养基从羊膜或蜕膜分离干细胞的方法，在韩国专利授权第871984号中公开了利用含碱性成纤维细胞生长因子(bFGF，Basic Fibroblast Growth Factor)的培养基培养来源于羊膜、浆膜、底蜕膜及胎盘组织的干细胞的多分化能力。但是，目前为止未执行针对来源于作为胎盘的细微组织的滋养层基底层的干细胞的研究。
技术实现思路
专利技术要解决的课题对此，本专利技术人为了在来源于胎盘的干细胞中也找到干细胞干性(stemness)更优秀的干细胞而持续研究的结果，分离作为胎盘的整个滋养层(total chorionic trophoblast layer，tCT)中的与绒毛膜相连接的部位且作为相当于约25％的厚度的组织层的滋养层基底层(basal portion of chorionic trophoblast layer，bCT)，从而制备来源于上述滋养层基底层的干细胞，发现了来源于上述滋养层基底层的干细胞作为多能干细胞，与现有的来源于整个胎盘或其它组织的干细胞相比具有匀质的生长特性、优秀的增殖特性及分化特性，而且在组织缺损动物模型中具有优秀的组织再生效果，由此完成了本专利技术。并且，本专利技术的目的在于，提供来源于作为胎盘的细微组织的滋养层基底层(basal portion of chorionic trophoblast layer，bCT)的干细胞。本专利技术的另一目的在于，提供将来源于上述滋养层基底层的干细胞或从上述干细胞分化的细胞作为有效成分包含的细胞治疗剂及组织再生用组合物。用于解决课题的方法为了实现上述目的，本专利技术提供来源于作为胎盘的细微组织的滋养层基底层(basal portion of chorionic trophoblast layer，bCT)的干细胞。并且，本专利技术提供将来源于上述滋养层基底层的干细胞或从上述干细胞分化的细胞作为有效成分包含的细胞治疗剂。并且，本专利技术提供将来源于上述滋养层基底层的干细胞或从上述干细胞分化的细胞作为有效成分包含的组织再生用组合物。专利技术的效果与现有的来源于整个胎盘或其它组织的干细胞相比，本专利技术的来源于滋养层基底层(basal portion of chorionic trophoblast layer，bCT)的干细胞具有匀质的生长特性、优秀的增殖特性及分化特性，而且在组织缺损动物模型中具有优秀的组织再生效果，从而可有效地用作细胞治疗剂。附图说明图1为示出作为胎盘(Pla)的细微组织的绒毛膜(chorionic membrane，CM)、绒毛膜滋养层(chorionic membrane and chorionic trophoblast layer，CMT)、整个滋养层(total chorionic trophoblast layer，tCT)、滋养层上层部(upper portion of chorionic trophoblast layer，uCT)及滋养层基底层(basal portion of chorionic trophoblast layer，bCT)的剖面照片的图。图2为示出通过显微镜观察本专利技术的来源于滋养层基底层(bCT)的干细胞的继代培养之前(P0)与长时间继代培养之后(P31)的细胞形态的照片(X100)的图。图3为示出通过显微镜观察来源于整个胎盘的干细胞的继代培养之间(P0)的细胞形态与长时间继代培养之后(P29)的细胞形态的照片(X100)的图。图4为示出来源于整个胎盘、胎盘的各细微组织及其它组织的干细胞的群体倍增时间的图。图5为示出来源于整个胎盘、胎盘的各细微组织及其它组织的干细胞的集落形成单位的图。图6为示出本专利技术的用于确认来源于滋养层基底层(bCT)的干细胞的表面因子表达特性的流式细胞分析结果的图。图7为示出用于观察来源于整个胎盘、胎盘的各细微组织及其它组织的干细胞的分化成脂肪细胞(Adipogenesis)、软骨细胞(Chondr ogenesis)或骨细胞(Osteogenesis)的程度的各染色结果的图。图8为示出为了观察来源于整个胎盘、胎盘的各细微组织及其它组织的干细胞的分化成软骨细胞的程度而利用番红O(Safranin-O)进行染色后进行定量化的结果的图。图9为示出为了观察来源于整个胎盘、胎盘的各细微组织及其它组织的干细胞的分化成软骨细胞的程度而在进行利用Ⅱ型胶原蛋白(Type II collagen)的免疫组织化学染色后进行定量化的结果的图。图10为示出为了观察来源于整个胎盘、胎盘的各细微组织及其它组织的干细胞的分化成骨细胞的程度而利用碱性磷酸盐(Alkaline phosphate)进行染色后进行定量化的结果的图。图11为示出为了观察来源于整个胎盘、胎盘的各细微组织及其它组织的干细胞的分化成骨细胞的程度而利用茜素红S(Alizarin red S)进行染色后进行定量化的结果的图。图12为示出为了观察来源于整个胎盘、胎盘的各细微组织本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种干细胞，其特征在于，来源于作为胎盘的细微组织的滋养层基底层。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.01.08 KR 10-2014-00023161.一种干细胞，其特征在于，来源于作为胎盘的细微组织的滋养层基底层。2.根据权利要求1所述的干细胞，其特征在于，上述干细胞对CD44、CD73、CD90以及CD105具有阳性的表面因子表达特性。3.根据权利要求1所述的干细胞，其特征在于，上述干细胞对CD31、CD34、CD45以及HLA-DR具有阴性的表面因子表达特性。4.根据权利要求1至3中任一项所述的干细胞，其特征在于，来源于上述滋养层基底层的干细胞来源于作为位于绒毛膜与蜕膜之间的整个滋养层中的与绒毛膜相连接的部位的20至30％厚度的组织。5.一种细胞治疗剂，其特征在于，包含来源于作为胎盘的细微组织的滋养层基底层的干细胞或从上述干细胞分化的细胞作为有效成分。6.根据权利要求5所述的细胞治疗剂，其特征在于，从上述干细胞分化的细胞为选自由软骨细胞、脂肪细胞、骨细胞、神经细胞、韧带...
【专利技术属性】
技术研发人员：河喆源，金鉁儿，
申请(专利权)人：社会福祉法人三星生命公益财团，
类型：发明
国别省市：韩国;KR
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