一种AD293球形细胞团的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种AD293球形细胞团的培养方法，包括以下步骤：1)配置悬浮培养基：培养基中包括以下组成成分：无血清培养基、胎牛血清、血清替代物、非必需氨基酸溶液、表皮细胞生长因子、转化生长因子、甲基纤维素；将物质混合溶解均匀，得到悬浮培养基；2)准备AD293细胞：使用10％胎牛血清的DMEM培养基在细胞瓶中复苏AD293细胞，进行传代；3)培养细胞：在摇瓶中加入经步骤2)处理的AD293细胞和步骤1)得到的悬浮培养基；然后置于摇床，温度为37℃的条件下培养48～72h，获得AD293球形细胞团；通过该培养方法形成的AD293球形细胞团，其细胞密度比球形微载体悬浮培养的细胞密度高10倍以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及细胞培养
，更具体地，涉及一种AD293球形细胞团的培养方法。
技术介绍
细胞培养对于整个生物工程技术是一个必不可少的过程，尤其在研究细胞苗、药物筛选等方面作用更加突出。传统细胞培养是通过转瓶或扁瓶培养细胞，然后发展到生物反应器使用片状载体或球形微载体高密度培养细胞，或通过中空纤维的方式培养细胞。这些细胞培养的方法均存在一些缺陷，例如：转瓶或扁瓶培养细胞的细胞密度低，平均密度仅仅为105个/毫升级别；而生物反应器或中空纤维细胞密度能够达到106个/毫升级别，甚至更高但是成本高、扩大难等缺陷。而目前通过细胞基因改造或者驯化等方法使细胞不需要贴壁生长而直接进行单细胞悬浮培养。目前，已经能够进行悬浮培养的细胞有BH K-21、SP20、MDCK等细胞；但是关于人胚肾细胞AD293细胞的研究少有报道。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种AD293球形细胞团的培养方法，通过该培养方法形成的AD293球形细胞团，其细胞密度比球形微载体悬浮培养的细胞密度高10倍以上。实现本专利技术的目的可以通过采取如下技术方案达到：一种AD293球形细胞团的培养方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种AD293球形细胞团的培养方法，其特征在于包括以下步骤：1)配置悬浮培养基：培养基中包括以下组成成分：体积比85～95％Gibco无血清培养基、体积比2～5％Gibco胎牛血清、体积比2～10％Gibco血清替代物、体积比0.5～2％Gibco非必需氨基酸溶液、质量体积比1～10ng/mL表皮细胞生长因子、质量体积比1～10ng/mL转化生长因子、质量体积比0.5～5mg/mL甲基纤维素；将上述物质混合溶解均匀，得到悬浮培养基；2)准备AD293细胞：使用含体积比为10％胎牛血清的DMEM培养基在细胞瓶中复苏AD293细胞，按照体积比1：3的比例进行传代，然后培养AD293细胞直到细胞量为...

【技术特征摘要】
1.一种AD293球形细胞团的培养方法，其特征在于包括以下步骤：1)配置悬浮培养基：培养基中包括以下组成成分：体积比85～95％Gibco无血清培养基、体积比2～5％Gibco胎牛血清、体积比2～10％Gibco血清替代物、体积比0.5～2％Gibco非必需氨基酸溶液、质量体积比1～10ng/mL表皮细胞生长因子、质量体积比1～10ng/mL转化生长因子、质量体积比0.5～5mg/mL甲基纤维素；将上述物质混合溶解均匀，得到悬浮培养基；2)准备AD293细胞：使用含体积比为10％胎牛血清的DMEM培养基在细胞瓶中复苏AD293细胞，按照体积比1：3的比例进行传代，然后培养AD293细胞直到细胞量为107～6×108个；3)培养细胞：在摇瓶中加入经步骤2)处理的AD293细胞和步骤1)得到的悬浮培养基；然后置于摇床，放入二氧化碳培养箱中，温度为37℃的条件下培养48～72h，获得AD293球形细胞团。2.如权利要求1所述的AD293球形细胞团的培养方法，其特征在于：步骤1)中，培养基中包括以下组成成分：体积比90％Gibco无血清培养基、体积比4％Gibco胎牛血清、体积比...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙贝贝，陈瑞爱，徐家华，王新秋，谢小雨，
申请(专利权)人：肇庆大华农生物药品有限公司，广东温氏大华农生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44