【技术实现步骤摘要】
本申请为生物领域，具体涉及一株lmh悬浮细胞、无血清驯化方法和应用。
技术介绍
1、lmh贴壁细胞经过驯化可以得到lmh悬浮细胞，并用于病毒培养，具体可见如下文献：
2、公开号cn118291370a，主题为一株无血清全悬浮lmh细胞及其驯化方法与应用的专利申请；
3、公开号cn113564127a，主题为一种大规模悬浮培养禽腺病毒的方法的专利申请。
4、通过上述技术可以得到适用于扩繁病毒的lmh悬浮细胞。但是，上述方案均采用的是低血清的驯化方法，更为具体来说，不断的降低驯化培养基的血清浓度，直至其可以在无血清的培养基中存活。
5、采用含血清的培养基进行驯化，其存在潜在的安全风险，会带来外源性的污染。
6、但是，现有的lmh贴壁细胞无一例外都需要采用上述的低血清驯化方式。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一株lmh悬浮细胞，该lmh悬浮细胞由贴壁细胞在无血清的培养基中进行成功驯化，成功的降低或避免了细胞的外源性污染。
2、同时，本专利技术还提出了该lmh悬浮细胞的驯化方法以及用途。
3、为实现上述目的，本申请公开了一株lmh悬浮细胞，所述lmh悬浮细胞的保藏单位为中国普通微生物菌种保藏管理中心；保藏时间为2024年11月22日；保藏编号为cgmcc no:46140；所述lmh悬浮细胞的分类名为鸡肝癌上皮细胞系，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
4、一种如上所述的lm
5、步骤1：将lmh贴壁细胞消化；
6、步骤2：将消化后的lmh贴壁细胞采用exgrowthtm lmh无血清培养基进行培养传代，lmh贴壁细胞的接种密度不低于1.5×106cells/ml；培养温度为36.9～37℃；传代3～5代，经过鉴定，得到lmh悬浮细胞。
7、本专利技术所使用的lmh贴壁细胞是本申请人于实验室经过多次筛选、分离得到的一株可以经无血清驯化并成功的贴壁细胞。
8、本专利技术的lmh悬浮细胞全程进行无血清驯化，不会引入任何的外源性的污染，具有非常高的安全性。
9、在上述的lmh贴壁细胞的无血清驯化方法中，所述步骤2中，每次传代的时间为72～96小时；每次传代后，均将lmh贴壁细胞在exgrowthtm lmh无血清培养基中稀释至接种密度不低于1.5×106cells/ml。
10、在上述的lmh贴壁细胞的无血清驯化方法中，每次传代过程中，lmh贴壁细胞在exgrowthtm lmh无血清培养基中的稀释浓度为(1.5～2)×106cells/ml。
11、在上述的lmh贴壁细胞的无血清驯化方法中，所述步骤2中，鉴定合格的标准为：
12、当lmh贴壁细胞在exgrowthtm lmh无血清培养基中的稀释浓度为1.5×106cells/ml时，培养72小时，所得的exgrowthtm lmh无血清培养基中lmh贴壁细胞细胞密度不低于4×106cells/ml，培养96小时，所得的exgrowthtm lmh无血清培养基中lmh贴壁细胞细胞密度不低于6×106cells/ml；且细胞活率超过95％，则认为驯化合格。
13、在上述的lmh贴壁细胞的无血清驯化方法中，所述步骤1中，消化的方法为：将lmh贴壁细胞壁培养72小时后终止消化，吹打分散细胞，呈单细胞或2～3个细胞聚团状态。
14、同时，本专利技术还公开了一种lmh悬浮细胞，采用如上所述的方法驯化得到。
15、以及，采用如上所述的lmh悬浮细胞培养病毒的用途。
16、最后，本专利技术还公开了ⅰ群4型腺病毒的培养方法，采用含如上所述的lmh悬浮细胞的培养基接种ⅰ群4型腺病毒。
17、本申请的有益效果是：
18、1.本专利技术的lmh贴壁细胞是经过筛选得到的特定的一株lmh贴壁细胞，该细胞可以在无血清的培养基中进行成功驯化，成功的降低或避免了细胞的外源性污染。
19、2.本专利技术驯化得到的lmh悬浮细胞培养的ⅰ群4型腺病毒c4抗原量是贴壁细胞的6～8倍。动物免疫攻毒试验结果表明悬浮培养细胞收获的抗原经6、8倍稀释后的保护率高于贴壁细胞培养的原液所配制的抗原，在转化大生产时可大大降低生产成本。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一株LMH悬浮细胞，其特征在于，所述LMH悬浮细胞的保藏单位为中国普通微生物菌种保藏管理中心；保藏时间为2024年11月22日；保藏编号为CGMCC NO:46140；所述LMH悬浮细胞的分类名为鸡肝癌上皮细胞系，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种如权利要求1所述的LMH悬浮细胞的无血清驯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的LMH贴壁细胞的无血清驯化方法，其特征在于，所述步骤2中，每次传代的时间为72～96小时；每次传代后，均将LMH贴壁细胞在EXgrowthTM LMH无血清培养基中稀释至接种密度不低于1.5×106cells/ml。
4.根据权利要求2所述的LMH贴壁细胞的无血清驯化方法，其特征在于，每次传代过程中，LMH贴壁细胞在EXgrowthTM LMH无血清培养基中的稀释浓度为(1.5～2)×106cells/ml。
5.根据权利要求2所述的LMH贴壁细胞的无血清驯化方法，其特征在于，所述步骤2中，鉴定合格的标准为：
6.根据权利要求2所述的LMH贴壁细胞的无血
7.一种LMH悬浮细胞，其特征在于，采用如权利要求2或3所述的方法驯化得到。
8.采用如权利要求7所述的LMH悬浮细胞培养病毒的用途。
9.Ⅰ群4型腺病毒的培养方法，其特征在于，采用含如权利要求7所述的LMH悬浮细胞的培养基接种Ⅰ群4型腺病毒。
...【技术特征摘要】
1.一株lmh悬浮细胞，其特征在于，所述lmh悬浮细胞的保藏单位为中国普通微生物菌种保藏管理中心；保藏时间为2024年11月22日；保藏编号为cgmcc no:46140；所述lmh悬浮细胞的分类名为鸡肝癌上皮细胞系，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种如权利要求1所述的lmh悬浮细胞的无血清驯化方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.根据权利要求2所述的lmh贴壁细胞的无血清驯化方法，其特征在于，所述步骤2中，每次传代的时间为72～96小时；每次传代后，均将lmh贴壁细胞在exgrowthtm lmh无血清培养基中稀释至接种密度不低于1.5×106cells/ml。
4.根据权利要求2所述的lmh贴壁细胞的无血清驯化方法，其特征在于，每次传代过程...
【专利技术属性】
技术研发人员：于亚南，陈思宇，麦康聪，王建超，邵明明，黄丽萍，池心恬，赖汉漳，盘伟岚，李飞跃，
申请(专利权)人：肇庆大华农生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。