一种高效表达大熊猫DNAJC12基因的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效表达大熊猫DNAJC12基因的方法，涉及基因工程技术领域。通过将核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的大熊猫DNAJC12基因进行密码子优化，得到核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的优化序列，并在所得优化序列的C‑末端依次添加酶切克隆位点和His‑tag，将其连接到原核质粒中并转入原核表达菌中得到重组表达菌，培养所得的重组表达菌后进行Ni‑柱纯化得到大熊猫DNAJC12蛋白。本发明专利技术提供的方法无需添加诱导剂，即可对大熊猫DNAJC12基因进行高效表达，为进一步研究DNAJC12结构功能及用途提供基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程，具体涉及一种大熊猫dnajc12基因的高效表达和分离方法。

技术介绍

1、dnajc12是dnaj热休克蛋白家族成员之一，具有阻止蛋白质的错误折叠和聚集作用，从而帮助蛋白质形成正确的结构及功能。在临床上，dnajc12基因的变化与神经性退行性疾病和代谢性疾病相关。研究报道，在欧洲人老年痴呆症患者中dnjc12发生突变，在胃癌、非小细胞肺癌、食管癌等疾病中发现dnajc12表达增高。同时，我们发现早期胚胎中dnajc12基因具有阶段性表达。可见，dnajc12基因在不同时期或个体中具有不同功能，特别是在神经性疾病、代谢性疾病中具有重要作用。

2、大熊猫是我国特有珍惜物种，开展大熊猫疾病的产生机制机理、防治新技术的研究，对大熊猫保护具有重要意义。目前除了与人类疾病相关的较少文献报道外，包括大熊猫在内的其他物种中针对dnajc12基因的研究甚少。但是受到实体dnajc12来源的限制、伦理问题及尚未分离出dnajc12蛋白，限制了dnajc12的进一步研究与应用。因此，有必要建立体外表达获得dnajc12蛋白。在体外表达系统中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高效表达大熊猫DNAJC12基因的方法，其特征在于，通过将核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示的大熊猫DNAJC12基因进行密码子优化，得到核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的优化序列，对所述优化序列进行表达纯化。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述优化序列的C-末端添加由六个组氨酸组成的His-tag碱基序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的表达纯化为经原核表达后纯化。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述原核表达的表达载体选自pET-30a(+)。

5.根据权利要求3所述的方法，其特...

【技术特征摘要】

1.一种高效表达大熊猫dnajc12基因的方法，其特征在于，通过将核苷酸序列如seq idno.1所示的大熊猫dnajc12基因进行密码子优化，得到核苷酸序列如seq id no.2所示的优化序列，对所述优化序列进行表达纯化。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述优化序列的c-末端添加由六个组氨酸组成的his-tag碱基序列。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛德才，杨志松，郑海朋，何可，侯勤曦，吴姝，林琦，
申请(专利权)人：四川省大熊猫科学研究院，
类型：发明
国别省市：