具有减少的衰老和保留的干细胞能力的早期间充质干细胞及其培养方法技术

本发明专利技术提供一种用于培养间充质干细胞的方法，其包括：在含有脐带血血清的培养基中早期培养间充质干细胞；然后在含有胎牛血清的培养基中传代培养所述间充质干细胞。根据本发明专利技术的用于培养间充质干细胞的方法可以通过减少干细胞的分化和衰老来维持干细胞性质，并且尤其可以实现显著高的增殖率。其可以实现显著高的增殖率。其可以实现显著高的增殖率。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有减少的衰老和保留的干细胞能力的早期间充质干细胞及其培养方法
[0001]本申请要求2020年11月11日提交的韩国专利申请号10
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2020
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0150504的优先权权益，该韩国专利申请的全部内容并入本文中作为本说明书的一部分。


[0002]本专利技术涉及一种具有减少的衰老和保留的干细胞性的早期间充质干细胞及其培养方法。

技术介绍

[0003]干细胞可以分化成各种细胞，并且正在使用这些干细胞的特征，对细胞疗法的适用性进行各种研究。具有多能性的胚胎干细胞因为它们分化成各种细胞的能力而作为细胞治疗剂受到了关注，但由于安全性和伦理问题而难以实际应用。
[0004]为了避免这些安全性和伦理问题，许多研究人员已经对作为胚胎干细胞的替代物的成体干细胞感兴趣。成体干细胞是可以在未分化状态下自我更新并且多次分化成各种细胞类型的细胞，并且最早为人所知的是来源于骨髓的骨髓干细胞(BMSC)，但是后来知道它们存在于我们身体的各个部分(诸如脐带、血液和脂肪)中。
[0005]在这些成体干细胞中，正在积极进行使用能够分化成各种组织同时具有高自我复制能力的间充质干细胞的研究。
[0006]然而，由于成体干细胞的增殖率低，所以存在一个问题，即可以从一个组织获得的细胞的数目有限。一般而言，骨髓来源的成体干细胞不仅在它们的分离过程中给供体带来疼痛，而且主要用于有限的病例中，诸如骨髓移植，因为一次可以获得的细胞的数目有限并且实际分离的成体干细胞的分化潜能也有限。
[0007]其他类型的成体干细胞，即脐带血或脂肪干细胞，相对容易获得，但与骨髓来源的成体干细胞一样，一次可以获得的细胞的数目以及分化潜能有限。
[0008]一般而言，为了临床上应用干细胞治疗剂，需要超过一定水平的细胞数(至少1
×
109个细胞)，并且为此必需大量培养干细胞。然而，随着干细胞的培养期增加，不可避免地会发生干细胞的衰老，导致干细胞性(stemness)、诸如增殖潜能和分化潜能以及治疗功效等下降。此外，因为随着培养期延长，存在生产成本、诸如材料成本和人工成本等增加的缺点，因此对用于培养间充质干细胞以使它们增殖同时维持它们的干细胞性的需求增加。
[0009][专利文件][0010]1.韩国公开专利申请号10
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2010
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0065338(2010年6月16日公布)；METHOD FOR EXTRACTING MESENCHYMAL STEM CELL FROM HUMAN OR ANIMAL EMBRYO AND FOR EXTRACTING THE SECRETION PRODUCT THEREOF。
[0011]2.中国专利号CN102127522(2012年11月21日登记)；HUMAN UMBILICAL MESENCHYMAL STEM CELL AND PREPARATION METHOD THEREOF。
[0012][非专利文件][0013]1.Seah Park等人,'Analysis of Characteristic Changes of Umbilical Cord
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derived Stem Cells during Expansion in Vitro,'Journal of Korean Reproductive Medicine,2009,36(1)23
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34。
[0014]2.Wagner等人,'Replicative senescence of mesenchymal stem cells:a continuous and organized process,'PLOS ONE 2008,3,e2213。
[0015]3.Izadpanah等人,'Long
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term in vitro expansion alters the biology of adult mesenchymal stem cells,'Cancer Research,2008,68,4229
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4238。

技术实现思路

[0016]技术问题
[0017]因此，作为进行解决上文问题的各种研究的结果，本专利技术人已经确认了可以在早期获得大量具有减少的衰老并且同时维持间充质干细胞的干细胞性的间充质干细胞，并且完成了本专利技术。
[0018]本专利技术的一个目的是提供一种用于培养间充质干细胞的方法。
[0019]本专利技术的另一个目的是提供一种用于在分离脐带来源的间充质干细胞之后培养它们的方法。
[0020]本专利技术的另一个目的是提供一种用于减少间充质干细胞的衰老的方法，其包括培养从脐带分离的间充质干细胞的步骤。
[0021]本专利技术的另一个目的是提供所分离和培养的间充质干细胞。
[0022]本专利技术的另一个目的是通过所分离和培养的间充质干细胞自身或通过转化而将它们用作用于各种疾病的细胞治疗剂。
[0023]技术方案
[0024]为了实现上文目的，本专利技术提供了一种用于培养间充质干细胞的方法。
[0025]根据本专利技术的一个实施方案，提供了一种用于培养间充质干细胞的方法，其包括以下步骤：在含有脐带血血清的培养基中原代培养分离的人间充质干细胞；以及在含有胎牛血清的培养基中传代培养分离的人间充质干细胞。
[0026]人间充质干细胞来源于骨髓基质、脂肪组织、脐带、软骨、胎盘或脐带血。
[0027]脐带血血清以0.5％至30％的体积比包含于培养基中。
[0028]胎牛血清以0.5％至30％的体积比包含于培养基中。
[0029]进行传代培养直到获得第20继代(P20)的干细胞。根据本专利技术的一个实施方案，提供了一种用于减少间充质干细胞的衰老的方法，其包括以下步骤：使用胶原酶和透明质酸酶的混合酶溶液从分离的组织分离间充质干细胞；在含有脐带血血清的培养基中原代培养所分离的间充质干细胞；以及在含有胎牛血清的培养基中传代培养所述间充质干细胞。
[0030]分离的组织是骨髓基质、脂肪组织、脐带、软骨或胎盘。
[0031]脐带血血清以0.5％至30％的体积比包含于培养基中。
[0032]胎牛血清以0.5％至30％的体积比包含于培养基中。
[0033]进行传代培养直到获得第20继代的干细胞。
[0034]根据本专利技术的一个实施方案，提供了具有减少的衰老的间充质干细胞。
[0035]间充质干细胞表达CD47、CD49e、CD56、CD62e、CD146、CD227和CD326中的一种或多
种细胞表面标志物，此外还表达CD73、CD90、CD105、CD166和CD44，它们是国际细胞治疗协会(ISCT)定义的间充质干细胞表面标志物。
[0036]此外，本专利技术提供一种包含间充质干细胞的细胞治疗组合物或一种用于制备细胞治疗剂的组合物。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于培养间充质干细胞的方法，其包括以下步骤：在含有脐带血血清的培养基中原代培养分离的人间充质干细胞；以及在含有胎牛血清的培养基中传代培养所述分离的人间充质干细胞。2.如权利要求1所述的用于培养间充质干细胞的方法，其中所述人间充质干细胞来源于骨髓基质、脂肪组织、脐带、软骨、胎盘或脐带血。3.如权利要求2所述的用于培养间充质干细胞的方法，其中所述人间充质干细胞来源于脐带。4.如权利要求1所述的用于培养间充质干细胞的方法，其中所述脐带血血清以0.5％至30％的体积比包含于所述培养基中。5.如权利要求1所述的用于培养间充质干细胞的方法，其中所述胎牛血清以0.5％至30％的体积比包含于所述培养基中。6.如权利要求1所述的用于培养间充质干细胞的方法，其中进行所述传代培养直到获得第20继代的干细胞。7.一种用于减少间充质干细胞的衰老的方法，其包括以下步骤：使用胶原酶和透明质酸酶的混合酶溶液从分离的组织分离间充质干细胞；在含有脐带血血清的培...

【专利技术属性】
技术研发人员：田洪培，朴相彦，蒋钟旭，
申请(专利权)人：社会福祉法人三星生命公益财团，
类型：发明
国别省市：