僵尸化巨噬细胞在炎性疾病靶向药物递送载体中的应用制造技术

本发明专利技术公开了僵尸化巨噬细胞在炎性疾病靶向药物递送载体中的应用，所述应用包括以下步骤：将抗炎药物或封装有抗炎药物的纳米颗粒与巨噬细胞共孵育；再置于细胞冻存液中，

【技术实现步骤摘要】
僵尸化巨噬细胞在炎性疾病靶向药物递送载体中的应用


[0001]本专利技术属于药物
，更具体地，本专利技术涉及一种僵尸化巨噬细胞在炎性疾病靶向药物递送载体中的应用、一种炎性疾病靶向药物递送载体、以及一种治疗炎性疾病的药物及其制备方法。

技术介绍

[0002]近年来，细胞介导的药物递送系统在疾病治疗中增强疗效的特异性和功效已经受到相当大的关注。巨噬细胞作为天然免疫细胞具有较长的血液半衰期，并可被特异性招募到疾病的炎症部位。此外，巨噬细胞可以吞噬自然界中的外来颗粒，可以直接吞噬药物，继而将药物输送到疾病部位。因此，研究人员寻求利用活的巨噬细胞作为药物的仿生递送载体，有研究者利用活的巨噬细胞将化疗药物靶向递送到肿瘤中使药物在肿瘤中的蓄积显著增加。活的巨噬细胞作为药物递送载体，与血液中的其他细胞如红细胞、中性粒细胞相比，具有一样长的血液循环周期，同时也能通过巨噬细胞的α4和β1整合素与炎症病变部位的血管细胞粘附分子
‑
1(VCAM
‑
1)结合。
[0003]尽管巨噬细胞介导的仿生给药系统已被广泛应用，但活的巨噬细胞介导的药物靶向递送方法在治疗炎症性疾病方面收效甚微。主要原因是巨噬细胞可以被炎症部位的细胞因子(如IFN
‑
γ和TNF
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α)或细菌脂多糖(LPS)识别并诱导为促炎M1型巨噬细胞，这反过来又导致了炎症性疾病中活的巨噬细胞作为药物载体的缺陷。它们还存在着易被肿瘤微环境驯化为促进肿瘤的M2型巨噬细胞发挥促进肿瘤病理进程的作用。目前已有将巨噬细胞作为临床药物的靶向递送载体策略被试验，并且在小鼠实验上也取得了一定的治疗效果。但是这些策略依旧存在一定的局限性，没有从根本上解决细胞被驯化的问题。
[0004]因此，寻找新的、具有炎症病灶归巢以及驻留的、可以避免巨噬细胞被疾病微环境驯化的巨噬细胞仿生递送载体策略将会为炎症性疾病的治疗提供新的靶向递送方式和希望。

技术实现思路

[0005]基于此，本专利技术的目的在于提供一种僵尸化巨噬细胞在炎性疾病靶向药物递送载体中的应用、一种炎性疾病靶向药物递送载体、以及一种治疗炎性疾病的药物及其制备方法。
[0006]实现上述专利技术目的的技术方案包括如下。
[0007]本专利技术的第一方面，提供了僵尸化巨噬细胞在炎性疾病靶向药物递送载体中的应用，所述应用包括以下步骤：将抗炎药物或封装有抗炎药物的纳米颗粒与巨噬细胞共孵育；再置于细胞冻存液中，
‑
196
±
4℃的液氮中常压冻存10h～15h；再于37℃～42℃恒温解冻至细胞冻存液完全溶解。
[0008]本专利技术的第二方面，提供了一种炎性疾病靶向药物递送载体，其是通过以下方法制备而得：将抗炎药物或封装有抗炎药物的纳米颗粒与巨噬细胞共孵育；再置于细胞冻存
液中，
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196
±
4℃的液氮中常压冻存10h～15h；再于37℃～42℃恒温解冻至细胞冻存液完全溶解。
[0009]本专利技术的第三方面，提供了一种治疗炎性疾病的药物，所述药物是通过以下方法制备而得：将抗炎药物或封装有抗炎药物的纳米颗粒与巨噬细胞共孵育；再置于细胞冻存液中，
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196
±
4℃的液氮中常压冻存10h～15h；再于37℃～42℃恒温解冻至细胞冻存液完全溶解。
[0010]本专利技术的第四方面，提供了一种治疗炎性疾病的药物的制备方法，包括以下步骤：将抗炎药物或封装有抗炎药物的纳米颗粒与巨噬细胞共孵育；再置于细胞冻存液中，
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196
±
4℃的液氮中常压冻存10h～15h；再于37℃～42℃恒温解冻至细胞冻存液完全溶解。
[0011]本专利技术的专利技术人发现，载药巨噬细胞被僵尸化后，能够避免被炎症因子驯化为M1型巨噬细胞，且依旧保留了大部分活细胞所表达的蛋白，仍然具有炎症部位的归巢以及驻留能力，因此，僵尸化巨噬细胞是潜在的作为治疗炎症性疾病药物的靶向递送载体，对于巨噬细胞作为药物载体的递送策略将会提供更加广阔的应用前景，将会更加有利于巨噬细胞作为药物仿生递送载体的发展。
附图说明
[0012]图1为本专利技术实施例1中僵尸化载药巨噬细胞的制备流程图。
[0013]图2为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞和活的巨噬细胞的粒径正态分布图。
[0014]图3为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞和活的巨噬细胞的流式实验结果(FSC和SSC)。
[0015]图4为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞的共聚焦实验结果(F
‑
actin染色)。
[0016]图5为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞的共聚焦实验结果(CA/PI染色)。
[0017]图6为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞和活的巨噬细胞的流式实验结果(PI染色)。
[0018]图7为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞和活的巨噬细胞的扫描电镜结果。
[0019]图8为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞和活的巨噬细胞的流式细胞检测iNOS指标结果。
[0020]图9为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞和活的巨噬细胞的流式检测iNOS指标的统计结果。
[0021]图10为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞和活的巨噬细胞中炎症因子TNF
‑
α的含量。
[0022]图11为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞和活的巨噬细胞中炎症因子IL
‑
6的含量。
[0023]图12为本专利技术实施例2中僵尸化巨噬细胞和活的巨噬细胞的细胞体积和形态图。
[0024]图13为本专利技术实施例3中共聚焦检测僵尸化巨噬细胞保留参与驻留在炎症位置的ICAM
‑
1蛋白的结果。
[0025]图14为本专利技术实施例3中流式细胞术检测僵尸化巨噬细胞保留参与驻留在炎症位置的ICAM
‑
1(CD54)蛋白的结果。
[0026]图15为本专利技术实施例3中对僵尸化巨噬细胞中存在的ICAM
‑
1(CD54)蛋白进行量化
统计结果。
[0027]图16为本专利技术实施例3中共聚焦检测僵尸化巨噬细胞保留其趋化到炎症位置的CCR
‑
2蛋白的结果。
[0028]图17为本专利技术实施例3中流式细胞术检测僵尸化巨噬细胞保留其趋化到炎症位置的CCR
‑
2(CD192)蛋白的结果。
[0029]图18为本专利技术实施例3中对僵尸化巨噬细胞中存在的CCR
‑
2(CD192)蛋白进行量化统计结果。
[0030]图19为本专利技术实施例4中僵尸化巨噬细胞在动脉粥样硬化斑块位置的驻留效果。
[0031]图20为本专利技术实施例4中僵尸化巨噬细胞在动脉粥样硬化斑块位置的不同时间点的荧光信号统计结果。
[0032]图21为本专利技术实施例4中小鼠主动脉血管的离体成像。
[0033]图22为本专利技术实施例4中血管离体成本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.僵尸化巨噬细胞在炎性疾病靶向药物递送载体中的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：将抗炎药物或封装有抗炎药物的纳米颗粒与巨噬细胞共孵育；再置于细胞冻存液中，
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196
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4℃的液氮中常压冻存10h～15h；再于37℃～42℃恒温解冻至细胞冻存液完全溶解。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述炎性疾病为动脉粥样硬化或炎症性肠病。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗炎药物为阿托伐他汀、辛伐他汀或卡托普利。4.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述液氮温度为
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196
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1℃；和/或所述冻存时间为12h～14h。5.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述解冻温度为37℃～38℃。6.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述巨噬细胞为RAW264.7或小鼠骨髓原代巨噬细胞BMDMs。7.根据权利要求1～3任一项所述的应用，其特征在于，所述纳米颗粒为RO...

【专利技术属性】
技术研发人员：权利要求书一页说明书六页附图一零页，
申请(专利权)人：广州医科大学，
类型：发明
国别省市：