一种复合修饰外泌体包裹白藜芦醇的制剂及其制备方法技术

本发明专利技术属于医用配制品技术领域，涉及一种复合修饰外泌体包裹白藜芦醇的制剂及其制备方法。该制剂包括：胆固醇

【技术实现步骤摘要】
一种复合修饰外泌体包裹白藜芦醇的制剂及其制备方法


[0001]本专利技术属于医用配制品
，涉及一种复合修饰外泌体包裹白藜芦醇的制剂及其制备方法。

技术介绍

[0002]白黎芦醇(resveratrol)，又名虎杖甙元，化学名：(E)
‑5‑
[2
‑
(4
‑
羟苯基)
‑
乙烯基]‑
1，3
‑
苯二酚；3，5，4
”‑
三羟基芪；芪三酚；分子量：228.25，CAS号：501
‑
36
‑
0；物理特征参数：白色或灰白色针状固体粉末；熔点：255～265℃；化学特征参数：易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等。它是蒽醌萜类化合物，主要来源于蓼科植物虎杖PolygonumcuspidatumSieb.etZucc.的根茎提取物，目前也可以采用合成方法获得。白黎芦醇是一种天然的抗氧化剂，可降低血液粘稠度，抑制血小板凝结和血管舒张，保持血液畅通，可预防癌症的发生及发展，具有抗动脉粥样硬化和冠心病，缺血性心脏病，高血脂的防治作用；抑制肿瘤的作用还具有雌激素样作用，可用于治疗乳腺癌等疾病。然而，白藜芦醇在水中的溶解性极低，且生物利用度低，对其应用有一定限制。据文献报道，健康男性口服含有白藜芦醇的葡萄提取物，药代动力学研究显示白藜芦醇口服吸收率为75％，能被人体真正吸收利用的却不足1％，主要原因在于白藜芦醇在人体内发生了广泛的Ⅱ相代谢反应，生成葡萄糖醛酸苷和硫酸酯类结合物，导致血液中只能检测到微量的白藜芦醇，影响白藜芦醇功效。
[0003]自然界的大多数生物(动物、植物和某些细菌)细胞能够分泌由磷脂双分子膜包裹的纳米级囊泡状结构，统称为细胞外囊泡。细胞外囊泡主要来源于细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到细胞外基质中，主要由外泌体(30～200nm)、微囊泡(100～1000nm)和凋亡小体(500～4000nm)组成，其中关于外泌体的研究最多。外泌体可携带多种蛋白质、mRNA、miRNA等，参与细胞间通讯和物质交换，因其具有良好的生物相融性及具有保护性的脂质双分子层囊泡，使其具有成为良好的天然药物递送载体的潜力。近年来，乳源外泌体在的研究逐渐丰富，乳源外泌体作为乳汁重要成分之一，能够携带和传递miRNA等信号分子，已成为目前食源外泌体的研究热点。
[0004]RGD是序列为RGD，具体由精氨酸、甘氨酸和天门冬氨酸组成的短肽。RGD存在于多种细胞外基质中，可与11种整合素特异性结合。胆固醇为细胞膜和外泌体磷脂双分子层的重要组成成分，研究表明，温度高时胆固醇可以阻止磷脂双分子层的无序化，温度低时又可干扰其有序化，阻止液晶形成，保持其流动性。
[0005]解决白藜芦醇目前应用问题一般有以下几种方式：(1)协同给药提高生物利用度，例如与某些成分协同使用抑制代谢酶活性；(2)设计前体药物，进入体内之后代谢水解为白藜芦醇，延缓其代谢速率；(3)通过改良剂型，使用脂质体或天然外泌体进行包裹，提高性能。目前已有通过脂质体或天然外泌体对白藜芦醇进行包裹，提高其性能的研究，例如CN110123838A利用胚胎干细胞与诱导人多能干细胞来源的外泌体作为白藜芦醇的药物载体，CN111436609A利用植物外泌体作为白藜芦醇的药物载体。但目前未见同时提高白藜芦
醇的生物利用度和溶解性，且能增强白藜芦醇的靶向性及稳定性的制剂。

技术实现思路

[0006]本专利技术目的在于提高白藜芦醇的生物利用度和溶解性，同时，增强白藜芦醇的靶向性及稳定性。
[0007]基于上述目的，本申请通过提供胆固醇
‑
RGD修饰的外泌体包裹白藜芦醇制剂及制备方法来解决该领域中的这种需要。
[0008]一方面，本专利技术涉及一种胆固醇
‑
RGD修饰的外泌体包裹白藜芦醇的制剂，其包括：胆固醇
‑
RGD、乳源外泌体和白藜芦醇。白藜芦醇包括顺式白藜芦醇、反式白藜芦醇和白藜芦醇甙。
[0009]进一步地，本专利技术提供的胆固醇
‑
RGD修饰的外泌体包裹白藜芦醇的制剂中，以质量比计，所述胆固醇
‑
RGD、乳源外泌体和白藜芦醇的配比为0.1～1:10:0.1～1。
[0010]进一步地，本专利技术提供的胆固醇
‑
RGD修饰的外泌体包裹白藜芦醇的制剂中，所述乳源外泌体为牛奶外泌体。不同原料的乳源外泌体在结构上相似，都具有与细胞相同的拓扑结构和脂质双分子层，膜上具有膜蛋白，内含物中存在大量的蛋白质、核酸和脂质。基于易得性考虑，选用以牛乳为原料制备的牛奶外泌体作为乳源外泌体。
[0011]本专利技术对牛奶外泌体的制备方法不做特别限定，本领域内技术人员易知关于牛奶外泌体的分离方法常用的有超速离心法、尺寸排阻法、免疫亲和捕获法、试剂盒法和微流体技术等。示例性地，本专利技术提供了牛奶外泌体的制备方法，包括：新鲜牛奶2～8℃，2000～3000g离心20min，脂肪层与乳清分离，收集乳清；在乳清中加入等体积超纯水，使用6N盐酸调节PH至4.5～4.6，加入过程中持续搅拌，可见蛋白沉淀明显；放入高速冷冻离心机2～8℃下，5000～6000g离心20min，离心后收集上清；2～8℃下，10000～12000g离心60～90min，收集上清；2～8℃下，100000～150000g离心60～90min，取沉淀得到牛奶外泌体。
[0012]进一步地，本专利技术提供的胆固醇
‑
RGD修饰外泌体包裹白藜芦醇的制剂中，所述胆固醇
‑
RGD的制备方法包括：称取胆固醇和丁二酸酐，溶解于吡啶中，加热至45℃反应72h，加水透析3天后经真空冷冻冻干即得胆固醇
‑
丁二酸酐；
[0013]将所述胆固醇
‑
丁二酸酐溶于二甲基亚砜中，加入DMTMM[4
‑
(4,6
‑
二甲氧基三嗪
‑2‑
基)
‑4‑
甲基吗啉盐酸盐]活化30min后，最后向其中加入RGD，45℃搅拌搅拌过夜反应，加水透析三天后经真空冷冻冻干即得所述胆固醇
‑
RGD。
[0014]进一步地，本专利技术提供的胆固醇
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RGD修饰的外泌体包裹白藜芦醇的制剂中，以质量比计，所述胆固醇和所述丁二酸酐的配比为1:0.2～0.4；以质量比计，所述胆固醇
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丁二酸酐和所述RGD的配比为1:1～2。
[0015]进一步地，本专利技术提供的复合修饰外泌体包裹白藜芦醇的制剂中，制备方法包括：(1)将所述乳源外泌体的溶液持续搅拌，然后室温下滴入白藜芦醇的醇溶液；(2)超声后置于4℃孵育12～18h，制得乳源外泌体包裹的白藜芦醇；(3)室温下，向所述乳源外泌体包裹的白藜芦醇中加入所述胆固醇
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RGD，超声后置于37℃孵育30min，冷冻干燥后即为所述复合修饰外泌体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种复合修饰外泌体包裹白藜芦醇的制剂，其特征在于，先由乳源外泌体对白藜芦醇进行包裹，得到乳源外泌体包裹的白藜芦醇，然后，使用胆固醇
‑
RGD对所述乳源外泌体包裹的白藜芦醇进行修饰，即得到所述制剂。2.根据权利要求1所的复合修饰外泌体包裹白藜芦醇的制剂，其特征在于，以质量比计，所述胆固醇
‑
RGD、乳源外泌体和白藜芦醇的配比为0.1～1:10:0.1～1。3.根据权利要求1所述的复合修饰外泌体包裹白藜芦醇的制剂，其特征在于，所述乳源外泌体为牛奶外泌体。4.根据权利要求1所述的复合修饰外泌体包裹白藜芦醇的制剂，其特征在于，所述胆固醇
‑
RGD的制备方法包括：称取胆固醇和丁二酸酐，溶解于吡啶中，加热至45℃反应72h，加水透析3天后经真空冷冻冻干得胆固醇
‑
丁二酸酐；将所述胆固醇
‑
丁二酸酐溶于二甲基亚砜中，加入DMTMM活化30min后，最后向其中加入RGD，45℃搅拌搅拌过夜反应，加水透析三天后经真空冷冻冻干即得胆固醇
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RGD。5.根据权利要求4所述的复合修饰外泌体包裹白藜芦醇...

【专利技术属性】
技术研发人员：李雪茹，王向东，张琪，张姣姣，党璐娇，
申请(专利权)人：陕西微泌生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：