化合物4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮4-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种化合物4(S)‑4,5‑二羟基‑α‑四氢萘酮4‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖(1→6)‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷及其制备方法与应用。本发明专利技术化合物具有肿瘤细胞抑制作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术具体涉及一种具有癌细胞抑制作用的新化合物。
技术介绍
肿瘤细胞实质就是肿瘤。肿瘤组织由实质和间质两部分构成，肿瘤实质是肿瘤细胞，是肿瘤的主要成分，具有组织来源特异性。它决定肿瘤的生物学特点以及每种肿瘤的特殊性。通常根据肿瘤的实质形态来识别各种肿瘤的组织来源，进行肿瘤的分类、命名和组织学诊断，并根据其分化成熟程度和异型性大小来确定肿瘤的良恶性和肿瘤的恶性程度。肿瘤细胞有三个显著的基本特征即：不死性，迁移性和失去接触抑制。除此之外，肿瘤细胞还有许多不同于正常细胞的生理、生化和形态特征。现有对于肿瘤的治疗，多采用手术、放疗和化疗三种。其中，化疗主要是使用DNA合成抑制剂（如5-氟尿嘧啶）或细胞分裂抑制剂（如长春新碱、紫杉酚）之类的细胞毒制剂物来抑制肿瘤细胞，但其同样对所有分裂细胞具有杀伤作用，因而会引起感染、出血、粘膜炎、脱发等副作用。中国的中医疗法源远流长，其治疗肿瘤不仅有独到之处，而且可弥补西医疗法的某些不足。采用中药治疗癌症不仅有抑制、杀伤癌细胞的作用，还可改善病人症状及其生存质量，延长生存期，提高机体免疫能力，减轻放疗、化疗及手术的不良反应或并发症。但目前针对肿瘤治疗的中药较少，且有效成分不明确，对肿瘤治疗无法起到确定疗效。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决现有技术中存在的缺陷，扩大治疗肿瘤药物的资源、来源，提供一种新的具有肿瘤细胞抑制作用的化合物。为了达到上述目的，本专利技术提供了4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮4-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷，其结构式如下：本专利技术还提供了4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮4-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷的制备方法：以核桃青皮为原料，依次通过醇提、柱层析制备得到。上述柱层析依次包括大孔树脂柱、正相硅胶柱、反相硅胶柱、葡聚糖凝胶柱和HPLC。本专利技术4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮4-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷具体制备步骤如下：（1）醇提：以核桃青皮为原料，采用95%乙醇冷浸14-21天，过滤得乙醇提取液，减压回收溶剂，干燥，得粉末状提取物；优选冷浸方法为采用95%乙醇冷浸提取3次，每次七天，每次95%乙醇的用量与原料的比例为6L：1kg，合并提取液过滤即得上述乙醇提取液；（2）富集纯化：将步骤（1）所得粉末状提取物用水分散至相对密度为1.25±0.05的溶液，经AB-8型大孔树脂柱色谱富集纯化，分别以水、30%乙醇、95%乙醇依次洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压回收溶剂得30%乙醇洗脱部分；（3）正相硅胶柱层析：取步骤（2）所得30%乙醇洗脱部分采用正相硅胶柱，依次采用体积比为5:1的二氯甲烷和甲醇混合溶液、体积比为4:1的二氯甲烷和甲醇混合溶液、体积比为3:1的二氯甲烷和甲醇混合溶液、体积比为2:1的二氯甲烷和甲醇混合溶液、体积比为1:1的二氯甲烷和甲醇混合溶液、体积比为1:2的二氯甲烷和甲醇混合溶液、甲醇进行系统梯度洗脱，收集馏分，经薄层色谱层析检识后相近者合并，根据洗脱顺序依次得到Fr.1、Fr.2、Fr.3、Fr.4四部分；其中，采用的甲醇均为100%甲醇；（4）反相硅胶柱层析：取Fr.2部分减压回收溶剂，通过反相硅胶ODS柱色谱，依次以体积比为1.5:1的甲醇和水混合溶液、体积比为1:1的甲醇和水混合溶液进行洗脱，收集体积比为1:1的甲醇和水混合溶液洗脱部分，回收溶剂；（5）葡聚糖凝胶柱纯化：取经步骤（4）层析后的产物，通过葡聚糖凝胶柱，以50%甲醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得粗品；（6）制备型HPLC纯化：将步骤（5）所得粗品采用甲醇溶解进入制备型HPLC，流动相为体积比为30:70的甲醇和水混合溶液，流速为3mL/min，收集馏分后，回收干燥即得。本专利技术还提供了4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮4-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷在制备预防和治疗肿瘤药物方面的应用。优选为在制备预防和治疗宫颈癌、肺癌药物方面的应用。本专利技术相比现有技术具有以下优点：从核桃青皮中提取的天然化合物，具有较好的肿瘤细胞抑制率，其中，对人宫颈癌HeLa细胞、人肺癌细胞A549细胞作用IC50值分别为61.47μM和82.13μM，具有制备临床肿瘤预防和治疗药物的前景，扩大了药物来源。同时提取采用的原料为核桃外壳的青衣，通常被当做废物抛弃，以此为原料进行化合物提取，能有效合理利用资源，且能有效防止治疗肿瘤药物资源的短缺、枯竭。附图说明图1为本专利技术化合物的化学结构式；图2为本专利技术化合物的正性HR-ESI-MS谱图；图3为本专利技术化合物的1H-NMR谱图；图4为本专利技术化合物的13C-NMR谱图；图5为本专利技术化合物的DEPT谱图；图6为本专利技术化合物的HSQC谱图；图7为本专利技术化合物的HMBC谱图；图8为本专利技术化合物的HMBC谱主要相关关系图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。制备方法：（1）取核桃青皮干燥品5kg，采用95%乙醇冷浸提取3次，每次七天，每次95%乙醇的用量为30L，过滤，合并提取液得乙醇提取液，减压回收溶剂，-60℃～-50℃真空条件下冷冻干燥成粉末状，得到乙醇提取物320g；（2）分离：将步骤（1）所得乙醇提取物用水分散至相对密度为1.25±0.05（35℃）的溶液，经AB-8型大孔树脂（色谱柱内径5cm长1.2m，其中树脂有效高度0.8m）柱色谱富集纯化，分别以水（用量4.5个柱体积）、30%乙醇（6个柱体积）、95%乙醇（5个柱体积）依次洗脱，收集30%乙醇洗脱液，减压回收溶剂，干燥后得30%乙醇洗脱部分26g；（3）正相硅胶柱层析：取步骤（2）所得30%乙醇洗脱部分采用正相硅胶柱（色谱柱内径3cm长1.5m，其中硅胶有效高度1m），依次采用二氯甲烷-甲醇（5:1，V/V，1柱体积）→二氯甲烷-甲醇（4:1，V/V，2柱体积）→二氯甲烷-甲醇（3:1，V/V，1.5柱体积）→二氯甲烷-甲醇（2:1，V/V，1.5柱体积）→二氯甲烷-甲醇（1:1，V/V，1.5柱体积）→二氯甲烷-甲醇（1:2，V/V，0.5柱体积）→甲醇（1个柱体积）进行系统梯度洗脱，每150mL（补充各馏分体积）收集馏分，经薄层色谱层析检识后相近者合并，根据洗脱顺序依次得到Fr.1、F.2、Fr.3、Fr.4四部分；（4）反相硅胶柱层析：取Fr.2部分减压回收溶剂，干燥后得3.9g，通过反相硅胶ODS本文档来自技高网...

【技术保护点】
化合物4(S)‑4,5‑二羟基‑α‑四氢萘酮4‑O‑β‑D‑吡喃葡萄糖(1→6)‑β‑D‑吡喃葡萄糖苷，其结构式如下：。

【技术特征摘要】
1.化合物4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮4-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖
苷，其结构式如下：
。
2.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于：所述化合物4(S)-4,5-二羟基-α-四
氢萘酮4-O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷以核桃青皮为原料，依次通过醇提、
柱层析制备得到。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮4-
O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷以核桃青皮为原料，依次通过醇提、大孔树脂
柱、正相硅胶柱、反相硅胶柱、葡聚糖凝胶柱和制备型HPLC制备得到。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：所述4(S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮4-
O-β-D-吡喃葡萄糖(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷通过以下步骤制备：
（1）醇提：以核桃青皮为原料，采用95%乙醇冷浸14-21天，过滤得乙醇提取液，减压回收
溶剂，干燥，得粉末状提取物；
（2）富集纯化：将步骤（1）所得粉末状提取物用水分散至相对密度为1.25±0.05的溶
液，经AB-8型大孔树脂柱色谱富集纯化，分别以水、30%乙醇、95%乙醇依次洗脱，收集30%乙
醇洗脱液，减压回收溶剂得30%乙醇洗脱部分；
（3）正相硅胶柱层析：取步骤（2）所得30%乙醇洗脱部分采用正相硅胶柱，依次采用体积
比为...

【专利技术属性】
技术研发人员：周媛媛，苏晓琳，蒋艳秋，
申请(专利权)人：黑龙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23