一种酪蛋白-百里香精油脂质体抗菌剂的制备方法和用途技术

本发明专利技术属于抗菌剂及食品添加剂或者化妆品领域，具体涉及一种酪蛋白‑百里香精油脂质体抗菌剂的制备方法及用途。本发明专利技术通过将百里香精油包裹在酪蛋白脂质体中，以实现减少百里香精油在施用过程中的挥发，从而减少百里香精油的浪费，提高其利用率，达到长效抗菌与高效利用的目的。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于抗菌剂及食品添加剂或者化妆品领域，具体涉及一种酪蛋白-百里香精油脂质体抗菌剂的制备方法及用途。
技术介绍
百里香，属于常绿灌木草本植物，是唇形科植物，花期7-8月，小坚果近圆形或卵圆形。主要有以百里酚为主的百里香酚百里香、含最多沉香醇的沉香醇百里香、以侧柏醇为主的侧柏醇百里香这三种。百里香精油具有治感冒、祛风、健脾消食、止咳化痰、温中散寒等作用。在海鲜、肉类、鱼类等食品中应用广泛，是天然的调味香料，可去除腥味，增加菜肴的风味；百里香中含有大量的单萜等挥发性成分，对人体具有极高的食用营养价值。国内已有很多关于百里香在食品、化妆品、医药技术等领域的专利申请。CN103333509A公开了一种含有百里香精油的可食性鱼皮胶原蛋白抗菌膜及其制备方法。制备的胶原蛋白抗菌膜具有良好的抗菌性能，能被生物降解，不会对环境造成污染，能抑制食品表面微生物的生长，从而达到食品保鲜及延长货架期的效果。CN104739952A公开了一种具有促进伤口愈合作用的复方茶树精油，能促进皮肤新陈代谢，促进伤口愈合，且可防留疤。CN1618294公开了一种从天然芳香植物百里香中提取的精油作为活性成分的驱螨组合物，24h驱避率均达到100％。CN102178251A公开了一种百里香羊肉除膻调味剂，除膻效果良好，色泽优美，百里香香气适宜，口感和谐自然，具有很高的应用价值和广阔的市场前景。CN104379156A公开了一种铺地百里香提取物，用于治疗肠炎性疾病。CN104478607A公开了一种百里香酚杀菌剂及其该杀菌剂几种剂型的制备方法。该杀菌剂低毒、环保、安全、无害，是一种非常具有市场应用前景的杀菌剂。CN104381334A公开了一种微囊悬乳剂，特别是含有阿维菌素、百里香酚、茚楝油、生半夏活性成分的微囊悬乳剂的配方及其制备方法。阿维菌素和百里香酚具有协同增效作用，复配作用明显，大大降低农药的用药量，还可扩大杀虫谱，提高杀虫效率。虽然百里香精油在医学，食品和化妆品行业被广泛应用，具有较好的杀菌、增香等特点，但是百里香精油易挥发，暴露在空气中不稳定，所以要寻找有效的方法降低百里香精油在使用过程中的挥发程度，延长其贮存期。纳米脂质体能将精油包裹在内，并且纳米脂质体不会对百里香精油的主要活性成分造成破坏。纳米脂质体使百里香精油中的活性成分与外界环境隔绝开来，可以降低百里香精油的挥发性，延长保存期。但由于脂质体的缓释作用，包裹精油的脂质体保质期有限。因此，选用酪蛋白制成稳定性更高的酪蛋白脂质体。此外，纳米脂质体由于它们的亚细胞尺寸，能加强脂质体的被动吸收机制，减少物质运输阻力，从而增强精油的抗菌效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是公开一种酪蛋白-百里香精油脂质体的制备方法及其用途，通过将百里香精油包裹在酪蛋白脂质体中，以实现减少百里香精油在施用过程中的挥发，从而减少百里香精油的浪费，提高其利用率，达到长效抗菌与高效利用的目的。本专利技术由百里香精油，大豆卵磷脂，胆固醇和表面活性剂，酪蛋白制成酪蛋白-百里香精油脂质体。本专利技术的制备方法是将百里香精油，大豆卵磷脂，胆固醇混合于有机溶剂，减压蒸发形成光滑的薄膜，加入水相介质溶解膜状物并超声成乳液，通过离心和微孔滤膜过滤，得到粒径为纳米级的百里香精油脂质体，其特征在于：将纳米级的百里香精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂的溶液混合，搅拌均匀，通过低温冷冻缓慢融化的方法使酪蛋白镶嵌在脂质体上，通过温和超声使脂质体闭合，最终形成包裹百里香精油的酪蛋白脂质体。本专利技术的大豆卵磷脂和胆固醇的质量比为5:1；用于制备精油脂质体的乳液含有百里香精油的浓度为5.0mg/mL；表面活性剂为十二烷基聚乙二醇醚(Brij-35)，得到包裹百里香精油的酪蛋白脂质体后其最终浓度为1.0mg/mL。本专利技术中所述的有机溶剂为氯仿。本专利技术中所用的水相介质是根据中国药典2000版标准配制的磷酸盐缓冲溶液，pH值6.5～7.4，优选7.2。所述的酪蛋白和表面活性剂的溶液是将酪蛋白分散在Brij-35的磷酸盐缓冲液中得到的，Brij-35浓度为10mg/mL，分散后溶液中酪蛋白浓度为1.0mg/mL。本专利技术中脂质体上镶嵌的蛋白为酪蛋白，百里香精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂的溶液以体积比10:1混合，混合后溶液中酪蛋白浓度为0.1mg/mL，Brij-35浓度为1.0mg/mL。本专利技术中低温冷冻缓慢融化是指将混合液在-18℃下冷冻2h，随后在0℃
下缓慢融化2h。本专利技术中温和超声是指在低功率50W条件下超声2h，温度范围0-10℃。附图说明图1酪蛋白-百里香精油脂质体的包封率。图2酪蛋白-百里香精油脂质体的粒径与多分散系数(PDI)。图3酪蛋白-百里香精油脂质体对大肠杆菌的抗菌效果。图4酪蛋白-百里香精油脂质体对金黄色葡萄球菌的抗菌效果。表1酪蛋白-百里香精油脂质体的Zeta电位。具体实施方式通过下面实例说明本专利技术的具体实施方式，但本专利技术的保护内容，不仅局限于此实施例1酪蛋白-百里香精油脂质体的包封率1实验材料2实验方法1)百里香精油脂质体的制备①称取1g大豆卵磷脂，0.2g胆固醇和250mg的百里香精油，加入50mL氯仿使其溶解。②在旋转蒸发仪中蒸发至溶剂蒸干，蒸发温度为10～30℃，圆底烧瓶内壁会形成光滑的薄膜；然后将所得产品放入真空干燥箱中，30℃，真空状态下干燥24h。③加入50mL的磷酸盐缓冲液到圆底烧瓶中进行水化，水化超声波功率为100W，超声时间为5h。④将所得混合液于细胞超微粉碎仪中以功率360W，工作10s，间隙5s，粉碎30min。⑤将所得产品进行离心，4000rpm，15min，取上层液体。⑥将所得液体用0.22μm滤膜进行过滤，得滤液。2)酪蛋白-百里香精油脂质体的制备①按照上述百里香精油脂质体的制备方法，制备百里香精油浓度为5.0mg/mL的百里香精油脂质体。②将酪蛋白超声分散在含10mg/mL Brij-35的磷酸盐缓冲液中，形成酪蛋白—Brij-35溶液，其中酪蛋白浓度为1.0mg/mL。③在50mL百里香精油脂质体中添加5mL酪蛋白—Brij-35溶液，混合均匀。④将所得混合液于超声条件下扩散10min。⑤将所得混合液在-18℃下冷冻2h。⑥将所得混合液在0℃下缓慢融化2h。⑦通过温和超声(功率50W，2h，KQ-300DE，昆山市超声仪器有限公司)使脂质体闭合，所得溶液即为酪蛋白-百里香精油脂质体。3)包封率的测定用无水乙醇稀释百里香精油，逐级稀释成浓度分别为0.1、0.2、0.4、0.6、0.8mg/mL的标准溶液。然后，分别吸取1μL标准溶液进行GC-MS分析，对其主要成分的谱峰面积进行自动积分，绘制主成分峰面积-百里香精油浓度标准曲线。取1mL酪蛋白-百里香精油脂质体样品，13500rpm，离心3h，倒掉上清液。接着加入1mL乙醇破乳剂，超声3h。最后以10000rpm的转速离心15min，取上清液，用于GC-MS分析。制备好的脂质体样品，对精油主成分的峰面进行自动积分，再根据绘制的标准曲线，计算出脂质体中百里香精油的含量。则：3酪蛋白-百里香精油脂质体的包封率包封率是评价脂质体制剂质量好坏的最重要的指标，也是脂质体能否发挥较普通制剂高效、低毒等特点的关键。由图1可看出本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种酪蛋白‑百里香精油脂质体抗菌剂的制备方法，将百里香精油，大豆卵磷脂，胆固醇混合于有机溶剂，减压蒸发形成光滑的薄膜，加入水相介质溶解膜状物并超声成乳液，通过离心和微孔滤膜过滤，得到粒径为纳米级的百里香精油脂质体，其特征在于：将纳米级的百里香精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂的溶液混合，搅拌均匀，通过低温冷冻缓慢融化的方法使酪蛋白镶嵌在脂质体上，通过温和超声使脂质体闭合，最终形成包裹百里香精油的酪蛋白脂质体。

【技术特征摘要】
1.一种酪蛋白-百里香精油脂质体抗菌剂的制备方法，将百里香精油，大豆卵磷脂，胆固醇混合于有机溶剂，减压蒸发形成光滑的薄膜，加入水相介质溶解膜状物并超声成乳液，通过离心和微孔滤膜过滤，得到粒径为纳米级的百里香精油脂质体，其特征在于：将纳米级的百里香精油脂质体与酪蛋白和表面活性剂的溶液混合，搅拌均匀，通过低温冷冻缓慢融化的方法使酪蛋白镶嵌在脂质体上，通过温和超声使脂质体闭合，最终形成包裹百里香精油的酪蛋白脂质体。2.如权利要求1所述的一种酪蛋白-百里香精油脂质体抗菌剂的制备方法，其特征在于：大豆卵磷脂和胆固醇的质量比为5:1；用于制备精油脂质体的乳液含有百里香精油的浓度为5.0mg/mL；表面活性剂为十二烷基聚乙二醇醚(Brij-35)，得到包裹百里香精油的酪蛋白脂质体后其最终浓度为1.0mg/mL。3.如权利要求1所述的一种酪蛋白-百里香精油脂质体抗菌剂的制备方法，其特征在于：所述的有机溶剂为氯仿。4.如权利要求1所述的一种酪蛋白-百里香精油脂质体抗菌剂的制备方法，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：林琳，马翠霞，崔海英，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32