一种猴头菌素/PLGA微球的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种猴头菌素/PLGA微球的制备方法，所述的制备方法为：将PLGA溶于二氯甲烷中，形成有机相；将猴头菌素浸膏加到所得有机相中，超声得到混悬液；将该混悬液滴加到明胶水溶液中，然后先在5～30℃下以300～1500rpm的速率搅拌乳化5～85min，再于室温下以100～500rpm的速率搅拌直至二氯甲烷挥发完全，微球沉降析出，接着于0～4℃下离心，收集沉降的微球，用蒸馏水洗涤，真空冷冻干燥，即得成品；使用本发明专利技术方法制备的猴头菌素/PLGA微球具有较高的包封率，且具有缓释效果，生物利用度高，该制备方法工艺简便、制备成本低、工艺重现性好、样品需要量少，对产业化的应用具有指导意义。

【技术实现步骤摘要】
一种猴头菌素/PLGA微球的制备方法(一)
本专利技术涉及一种保健品的制备方法，具体涉及一种猴头菌素/PLGA微球的制备方法。(二)
技术介绍
猴头菌素，化学成分为二萜类等小分子化合物，可促使神经生长因子的合成，对智力衰退、神经衰弱及植物性神经衰退，尤其对阿尔茨海默症和痴呆症有良好的功效。此外，猴头菌素在提高机体免疫力、抗癌抑瘤、降血压、降血糖等多方面均有一定的保健效果。它被广泛应用于食品、饮料、医疗当中，其具有较高的食用和药用价值。猴头菌素通常为白色晶体，为亲脂性成分，易溶于亲脂性有机溶剂，可溶于醇，难溶于水。微胶囊技术是将物质细微分散包覆后，并在所需的时候将其释放出来的方法。在食品领域得到广泛的应用，开发出了许多微胶囊化食品，如粉末油脂、胶囊饮料、营养强化剂如维生素、氨基酸等、微胶囊化食品添加剂也已大量应用于生产中。微胶囊技术还应用于烘焙食品、保健食品以及固定化酵母培养等方便，在食品工业中的应用领域将不断拓宽。聚乳酸-羟基乙酸共聚物[poly(lactic-co-glycolicacid)，PLGA]是由两种单体(乳酸和羟基乙酸)随机聚合而成，是一种生物可降解高分子有机化合物，其降解产物乳酸和羟基乙酸可参与人体的新陈代谢，最终形成二氧化碳和水被排出体外。由于其具有良好的生物相容性和生物可降解性且降解速度可控，在生物医学领域具有广泛的用途。用PLGA制备载药微球，能增加猴头菌素的稳定性，掩盖其不良口味，控制其释放速度实现长效的目的，提高生物利用度。(三)
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种猴头菌素/PLGA微球的制备方法，本专利技术方法工艺简单，周期短，且适用于大规模生产。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种猴头菌素/PLGA微球的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：(1)将PLGA溶于二氯甲烷中，形成有机相；(2)将猴头菌素浸膏加入步骤(1)得到的有机相中，(20～60KHz)超声(20～60min)得到混悬液；所述的猴头菌素浸膏是猴头菌菌丝体经乙醇提取制得的浸膏；(3)将步骤(2)得到的混悬液滴加到明胶水溶液中，然后先在5～30℃下以300～1500rpm(优选600～1000rpm)的速率搅拌乳化5～85min(优选25～65min)，再于室温(20～30℃)下以100～500rpm(优选150～300rpm)的速率搅拌直至二氯甲烷挥发完全，微球沉降析出，接着于0～4℃下离心，收集沉降的微球，用蒸馏水洗涤，真空冷冻干燥，即得所述的猴头菌素/PLGA微球；本专利技术所述的制备方法，步骤(1)中，所述的PLGA(聚乳酸-羟基乙酸共聚物)分子量为5000～50000dal(优选30000dal)，PLGA单体乳酸/羟基乙酸的摩尔比为75：25～50：50(优选50：50)。步骤(1)所形成的有机相中，PLGA的质量浓度为2.5％～20％，优选5％～15％。步骤(2)中，通常所述的猴头菌素浸膏以醇提的方法得到，猴头菌菌丝体以乙醇提取后，提取液先用石油醚萃取，收集萃余液，再用乙酸乙酯萃取，收集萃取液，旋蒸除去乙酸乙酯得到所述的猴头菌素浸膏。具体的，所述的猴头菌素浸膏可按如下方法制备：将猴头菌菌丝体粉末与95wt％乙醇以料液质量比1：20混合，静置1h，然后在60℃下微波(功率为500w)萃取25min，接着用石油醚萃取，收集萃余液，再用乙酸乙酯萃取，收集萃取液，旋蒸除去乙酸乙酯得到所述的猴头菌素浸膏。步骤(2)中，所述的猴头菌素浸膏与步骤(1)中PLGA的投料质量比为1：0.5～15，优选1：2～10。步骤(3)中，所述明胶水溶液的质量浓度为0.1％～1％，优选0.5％；所述混悬液与明胶水溶液的质量比为1：1～30，优选为1：10～25。本专利技术的有益效果在于：1、使用本专利技术方法制备的猴头菌素/PLGA微球在保证猴头菌素稳定性的条件下具有较高的包封率，最高包封率达到98.87％，并且制备的微球具有缓释效果，可以保持体内最佳的浓度，并且延长作用的时间，提高生物利用度；2、该制备方法具有工艺简便、制备成本低、工艺重现性好、样品需要量少的特点，试验筛选的处方和工艺也可放大到工业生产规模，因此对产业化的应用具有指导意义。(四)附图说明图1为实施例1制备的猴头菌素/PLGA微球扫描电镜图；图2为实施例2中PLGA浓度对微球包封率的影响；图3为实施例2中芯壁比对微球包封率的影响；图4为实施例2中搅拌乳化速度对微球包封率的影响；图5为实施例2中乳化时间对微球包封率的影响；图6为实施例3中猴头菌素/PLGA微球体外释放结果。(五)具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术作进一步说明，但本专利技术的保护范围并不仅限于此。实施例1：乳化挥发法制备猴头菌素/PLGA微球(1)制备猴头菌素浸膏取5g猴头菌菌丝体粉末(北京福尔康生物技术研究所)于250mL三口烧瓶中，加入100mL95％乙醇(料液比为1：20)，静置1h，然后在温度为60℃条件下微波(功率500w)萃取25min，接着用石油醚萃取(500mL×3)，弃去石油醚萃取液，收集萃余液再用乙酸乙酯萃取(500mL×3)，合并收集乙酸乙酯萃取液，旋蒸除去乙酸乙酯，得到猴头菌素浸膏0.6g；(2)制备猴头菌素/PLGA微球首先，取PLGA(分子量为30000dal，单体乳酸/羟基乙酸的摩尔比为50：50)100mg加入到2mL二氯甲烷中，然后加入25mg上述制备的猴头菌素浸膏，40KHz超声30min得到混悬液；将所得混悬液缓慢滴加到50mL0.5wt％明胶水溶液中，接着在室温下先以1200rpm的速率磁力搅拌乳化30min，然后在室温下减速到300rpm搅拌3h挥干二氯甲烷，微球沉降析出，之后于0℃下离心，收集沉降的微球，用蒸馏水洗涤，真空冷冻干燥，即得所述的猴头菌素/PLGA微球0.2g。扫描电镜观察所得微球形态，结果见图1，微球形态饱满圆整。实施例2：微球制备工艺研究(1)PLGA浓度对微球包封率的影响猴头菌素/PLGA微球的制备操作同实施例1，其中的投料及操作参数条件为：选取二氯甲烷2.0mL、0.5％明胶溶液50mL、PLGA100mg、芯壁比(猴头菌素浸膏与PLGA质量比)为2：1、搅拌乳化速度900rpm、乳化时间30min，300rpm下搅拌3h至二氯甲烷挥干，考察不同PLGA浓度对微球包埋率的影响。PLGA浓度取2.5％、5％、10％、15％、20％。PLGA浓度对微球包封率的影响结果见图2。(2)猴头菌素浸膏与PLGA质量比(芯壁比)对微球包封率的影响猴头菌素/PLGA微球的制备操作同实施例1，其中的投料及操作参数条件为：选取二氯甲烷2.0mL、0.5％明胶溶液50mL、PLGA100mg、搅拌乳化速度900rpm、乳化时间30min，300rpm下搅拌3h至二氯甲烷挥干，考察不同芯壁比对微球包埋率的影响。芯壁比取1：1、1：2、1：5、1：10、1：15。芯壁比对微球包封率的影响结果见图3。(3)搅拌乳化速度对微球包封率的影响猴头菌素/PLGA微球的制备操作同实施例1，其中的投料及操作参数条件为：选取二氯甲烷2.0mL、0.5％明胶溶液50mL、PLGA100mg、芯壁比为2：1、乳化时间30min，300rpm下搅拌3h至二氯甲烷挥干，考察不同搅本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猴头菌素/PLGA微球的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：(1)将PLGA溶于二氯甲烷中，形成有机相；所形成的有机相中，PLGA的质量浓度为2.5％～20％；(2)将猴头菌素浸膏加入步骤(1)得到的有机相中，超声得到混悬液；所述的猴头菌素浸膏与步骤(1)中PLGA的投料质量比为1：0.5～15；所述的猴头菌素浸膏是猴头菌菌丝体经乙醇提取制得的浸膏；(3)将步骤(2)得到的混悬液滴加到明胶水溶液中，然后先在5～30℃下以300～1500rpm的速率搅拌乳化5～85min，再于室温下以100～500rpm的速率搅拌直至二氯甲烷挥发完全，微球沉降析出，接着于0～4℃下离心，收集沉降的微球，用蒸馏水洗涤，真空冷冻干燥，即得所述的猴头菌素/PLGA微球；所述明胶水溶液的质量浓度为0.1％～1％；所述混悬液与明胶水溶液的质量比为1：1～30。

【技术特征摘要】
1.一种猴头菌素/PLGA微球的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：(1)将PLGA溶于二氯甲烷中，形成有机相；所形成的有机相中，PLGA的质量浓度为2.5％～20％；(2)将猴头菌素浸膏加入步骤(1)得到的有机相中，超声得到混悬液；所述的猴头菌素浸膏与步骤(1)中PLGA的投料质量比为1：0.5～15；所述的猴头菌素浸膏是猴头菌菌丝体经乙醇提取制得的浸膏；(3)将步骤(2)得到的混悬液滴加到明胶水溶液中，然后先在5～30℃下以600～1000rpm的速率搅拌乳化25～65min，再于室温下以150～300rpm的速率搅拌直至二氯甲烷挥发完全，微球沉降析出，接着于0～4℃下离心，收集沉降的微球，用蒸馏水洗涤，真空冷冻干燥，即得所述的猴头菌素/PLGA微球；所述明胶水溶液的质量浓度为0.1％～1％；所述混悬液与明胶水溶液的质量比为1：1～30。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的PLGA分子量为5000～50000dal，PLGA单体乳酸/羟...

【专利技术属性】
技术研发人员：何晋浙，姚丽娜，孙培龙，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33