一种高效表达非特异性过氧化酶毕赤酵母重组菌株的构建方法技术

一种高效表达非特异性过氧化酶毕赤酵母重组菌株的构建方法，属于基因工程技术领域。其包括以下步骤：1)构建质粒；2)易错PCR突变体库构建；3)高拷贝菌株的构建；4)共表达分子伴侣。本发明专利技术至少具有以下优点：本发明专利技术以毕赤酵母GS115为出发菌，通过易错PCR文库构建、构建高拷贝菌株和共表达分子伴侣蛋白，实现PaDa‑I的高效分泌，底物为甲醇，发酵成本低，分离纯化过程简单，在制备PaDa‑I中具有潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，具体涉及一种高效表达非特异性过氧化酶毕赤酵母重组菌株的构建方法。

技术介绍

1、茶树菇(agrocybeaegerita)的非特异性过氧化酶(aaeupo)是高度糖基化的硫代血红素酶，upo是以h2o2为电子受体，不需要任何辅因子，与p450酶相比具有独特的优势。aaeupo可催化脂肪族和芳香族化合物的羟基化、环氧化、脱烷基等反应。

2、除此之外，aae upo也成功应用于医疗行业，aae upo催化胆钙化醇和麦角钙化醇生成25-单羟基维生素(lucas f,babot e d,m,et al.catal sci technol,2016,6(1):288-295)，该产物既是维生素，也是一种类固醇激素，它在促进钙的吸收利用、调节激素分泌和免疫功能等方面均发挥重要作用，是人类健康重要的化合物。

3、但aae upo的活性和表达量较低，这一因素成为了其在工业上大规模应用的主要限制因素。利用大肠杆菌生产upo，无法对upo进行糖基化等翻译后加工，存在二硫键和空间构象折叠不正确等问题，因此得到具有生物活性的蛋白的几本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高效表达非特异性过氧化酶毕赤酵母重组菌株的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种高效表达非特异性过氧化酶毕赤酵母重组菌株的构建方法，其特征在于所述线性化质粒为pPICZαA-PaDa-I，所述质粒载体为pPICZαA。

3.如权利要求1所述的一种高效表达非特异性过氧化酶毕赤酵母重组菌株的构建方法，其特征在于所述毕赤酵母为毕赤酵母GS115。

4.如权利要求1所述的一种高效表达非特异性过氧化酶毕赤酵母重组菌株的构建方法，其特征在于所述分子伴侣包括HAC1、PDI和Ero1。

5.权利要求1-4任一项所述的方法制...

【技术特征摘要】

1.一种高效表达非特异性过氧化酶毕赤酵母重组菌株的构建方法，其特征在于包括以下步骤：

2.如权利要求1所述的一种高效表达非特异性过氧化酶毕赤酵母重组菌株的构建方法，其特征在于所述线性化质粒为ppiczαa-pada-i，所述质粒载体为ppiczαa。

3.如权利要求1所述的一种高效表达非特异性过氧化酶毕赤酵母重组菌株的构建方法，其特征在于所述毕...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳志强，沈秀红，柯霞，郑彤，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：