一种具有抗氧化活性的红松籽肽及其制备方法技术

本发明专利技术属于农副产品精深加工及其副产物综合利用的技术领域，涉及一种具有抗氧化活性的红松籽肽及其制备方法，利用排阻色谱法和高效液相色谱质谱联用仪(HPLC‑MS/MS)从3～10kDa红松籽肽中鉴定出抗氧化肽，其特征在于，氨基酸序列是Phe‑Thr‑Gly‑Ser‑Lys(FTGSK)，分子量538.61，纯度为97％以上，该肽序列在浓度1mg/mL～3mg/mL具有DPPH自由基清除率为16％～50％，其电位经过纳米粒度仪测定得出为18mV～30mV，其二级结构经过傅里叶红外光谱仪(FTIR)和圆二色谱仪(CD)测定后得出，含有的官能团有‑OH，＝C‑H，C＝O，C＝C，C‑N，C‑S；α‑螺旋含量为1％～3％，β‑折叠含量为45％～46％，β‑转角含量为20％～24％，无序结构含量为24％～27％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农副产品精深加工及其副产物综合利用的
，涉及一种具有抗氧化活性的红松籽肽及其制备方法，利用排阻色谱法和高效液相色谱质谱联用仪(HPLC-MS/MS)从3～10kDa红松籽肽中鉴定出抗氧化肽，其特征在于，氨基酸序列是Phe-Thr-Gly-Ser-Lys(FTGSK)，分子量538.61，纯度为97％以上，该肽序列在浓度1mg/mL～3mg/mL具有DPPH自由基清除率为16％～50％，其电位经过纳米粒度仪测定得出为18mV～30mV，其二级结构经过傅里叶红外光谱仪(FTIR)和圆二色谱仪(CD)测定后得出，含有的官能团有-OH，＝C-H，C＝O，C＝C，C-N，C-S；α-螺旋含量为1％～3％，β-折叠含量为45％～46％，β-转角含量为20％～24％，无序结构含量为24％～27％。
技术介绍
目前，红松籽广泛应用于主菜，小吃等的制作，由于具有美容养颜，健脑益智的功效，在市场中颇受女性及中老年人群的欢迎。红松籽富含油脂和蛋白质，除此之外，还含有维他命，多酚组分等等。近几年来，研究者都将目光集中于红松籽油的研究，而红松籽蛋白的研究相对较少。另外，红松籽制油后废弃了大量的松子粕，采用松子粕为原料开发蛋白制品可以说是满足了环境友好型社会的要求，而且价格低廉，可进行工业化生产，因此具有广阔前景。近年来，抗氧化肽是研究热点，因为抗氧化肽除了具有清除体内自由基的功能，还具有防辐射，抗衰老等其他生物活性，因此抗氧化肽除了在功能性食品、保健食品方面有广泛应用，还可以应用于医药和化妆品等方面。目前，很多抗氧化肽从动植物蛋白中鉴定出来，比如，从螺旋藻中鉴定的肽序列LAHICGVP，具有·OH清除能力；从大米中鉴定的肽序列FRDEHKK，KHDRGDEF，具有抑制脂质自动氧化，清除DPPH、·OH、O2-·的能力；从火麻仁中鉴定出的肽序列FLKLTAER，具有Fe2+螯合能力和清除DPPH、·OH、O2-·的能力，从草鱼中鉴定出肽序列PSKYEPFV，具有清除O2-·的能力，等等。相关研究表明，红松籽蛋白酶解物具有免疫活性和抗氧化活性，本专利技术提供了一种具有抗氧化活性的红松籽肽的制备方法。在本专利中，DPPH清除率，电位稳定性，含有的官能团和二级结构含量，由于操作简单，准确度和精确度高，被用来作为抗氧化肽的评价指标。DPPH清除率越高，即代表抗氧化活性越强，电位通常用表示溶液中带电粒子的表面电荷，且电位的绝对值越大则溶液的稳定性则越大。二级结构包括α-螺旋，β-折叠，β-转角以及无序结构。本专利技术对于红松籽产品多样化、红松籽生物活性肽在功能性食品、保健食品或者药品中的开发利用具有重要的意义。本专利技术的技术优势主要体现在以下三个方面：第一，申请专利提供一条新的抗氧化肽序列Phe-Thr-Gly-Ser-Lys(FTGSK)，可广泛应用于功能性食品、保健食品等方面。第二，申请专利的原料创新。是以3～10kDa红松籽肽为原料。第三，申请的专利技术方法多元化。是以排阻色谱法，高效液相色谱质谱联用法(HPLC-MS/MS)为核心技术，以纳米粒度仪，傅里叶红外光谱仪(FTIR)和圆二色谱仪(CD)为辅助技术，其技术优势突出体现在：(1)以排阻色谱法结合高效液相色谱质谱联用法(HPLC-MS/MS)纯化鉴定3～10kDa红松籽肽，得到抗氧化松子肽，并将合成肽纯化。其特征在于，氨基酸序列是FTGSK，分子量538.61，纯度为97％以上。(2)鉴定出来的肽序列测定DPPH自由基清除率和电位，并且经过FTIR和CD的分析，可得知该肽序列在浓度1mg/mL～3mg/mL具有DPPH自由基清除率为16％～50％，其电位经过纳米粒度仪测定得出为18mV～30mV，含有的官能团有-OH，＝C-H，C＝O，C＝C，C-N，C-S；其二级结构测定结果为α-螺旋含量为1～3％，β-折叠含量为45～46％，β-转角含量为20～24％，无序结构含量为24～27％。综上所述，纵观国内外相关研究与技术报道，肽序列FTGSK并未被发现。而且，也未见以排阻色谱法，HPLC-MS/MS为核心技术，以纳米粒度仪，FTIR和CD为辅助技术，纯化鉴定3～10kDa红松籽肽，并确定抗氧化肽二级结构特性。红松籽抗氧化肽的特征在于，氨基酸序列为FTGSK，分子量为538.61，纯度为97％以上，浓度1mg/mL～3mg/mL样品具有DPPH自由基清除率为16％～50％，电位为18mV～30mV，含有的官能团有-OH，＝C-H，C＝O，C＝C，C-N，C-S；α-螺旋含量为1～3％，β-折叠含量为45～46％，β-转角含量为20～24％，无序结构含量为24～27％。
技术实现思路
申请专利技术所需要解决的技术问题：公开一种具有抗氧化活性的红松籽肽及其制备方法，其特征在于，氨基酸序列是Phe-Thr-Gly-Ser-Lys(FTGSK)，分子量538.61，纯度为97％以上，浓度1mg/mL～3mg/mL样品具有DPPH自由基清除率为16％～50％，电位为18mV～30mV，含有的官能团有-OH，＝C-H，C＝O，C＝C，C-N，C-S；α-螺旋含量为1～3％，β-折叠含量为45～46％，β-转角含量为20～24％，无序结构含量为24～27％。本专利技术所涉及的一些缩写具有以下含义：Phe(F)：苯丙氨酸Thr(T)：苏氨酸Gly(G)：甘氨酸Ser(S)：丝氨酸Lys(K)：赖氨酸申请专利技术的技术方案是：1.一种具有抗氧化活性的红松籽肽，其特征在于，氨基酸序列是Phe-Thr-Gly-Ser-Lys(FTGSK)，分子量538.61，纯度为97％以上，该肽序列在浓度1mg/mL～3mg/mL具有DPPH自由基清除率为16％～50％，电位为18mV～30mV，含有的官能团有-OH，＝C-H，C＝O，C＝C，C-N，C-S；α-螺旋含量为1％～3％，β-折叠含量为45％～46％，β-转角含量为20％～24％，无序结构含量为24％～27％。2.一种具有抗氧化活性的红松籽肽的制备方法，其特征在于，以3～10kDa红松籽肽为原料，利用排阻色谱法和HPLC-MS/MS鉴定出松子肽序列，并对合成的抗氧化肽进行纯化；1)所述的排阻色谱法，是指称取SephadexG-25或G-50凝胶，使其与蒸馏水比例为1:3～1:5(v/v)，室温溶胀时间2～5h，沸水溶胀0.5h～2h，将凝胶在2℃～本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种具有抗氧化活性的红松籽肽，其特征在于，氨基酸序列是Phe‑Thr‑Gly‑Ser‑Lys(FTGSK)，分子量538.61，纯度为97％以上，该肽序列在浓度1mg/mL～3mg/mL具有DPPH自由基清除率为16％～50％，电位为18mV～30mV，含有的官能团有‑OH，＝C‑H，C＝O，C＝C，C‑N，C‑S；α‑螺旋含量为1％～3％，β‑折叠含量为45％～46％，β‑转角含量为20％～24％，无序结构含量为24％～27％。

【技术特征摘要】
1.一种具有抗氧化活性的红松籽肽，其特征在于，氨基酸序列是
Phe-Thr-Gly-Ser-Lys(FTGSK)，分子量538.61，纯度为97％以上，该肽序列在
浓度1mg/mL～3mg/mL具有DPPH自由基清除率为16％～50％，电位为18mV
～30mV，含有的官能团有-OH，＝C-H，C＝O，C＝C，C-N，C-S；α-螺旋含量为
1％～3％，β-折叠含量为45％～46％，β-转角含量为20％～24％，无序结构含
量为24％～27％。
2.一种具有抗氧化活性的红松籽肽的制备方法，其特征在于，以3～10kDa
红松籽肽为原料，利用排阻色谱法和HPLC-MS/MS鉴定出松子肽序列，并对合
成的抗氧化肽进行纯化；
1)所述的排阻色谱法，是指称取SephadexG-25或G-50凝胶，使其与蒸馏
水比例为1:3～1:5(v/v)，室温溶胀时间2～5h，沸水溶胀0.5h～2h，将凝
胶在2℃～6℃条件下注入层析柱中，待凝胶沉积至离层析柱顶约5cm～10cm
时，停止注入凝胶，采用蒸馏水平衡层析柱，使其基线走平，紫外检测器的波长
范围为200nm～280nm，将肽粉溶于蒸馏水中，使其浓度为30mg/mL～60mg/mL，
将样品经0.45μm滤膜过滤，上样体积为0.5mL～6mL，控制流速1mL/min～2.5
mL/min，最终收集到组分Ⅰ，将组分Ⅰ真空冷冻干燥；
2)所述的HPLC-MS/MS方法，是指针对上一步骤中收集的组分Ⅰ进行分析，
其洗脱程序为10％～90％乙腈在10min～15min时结束程序，上样体积为10μL
～30μL，流速为0.5mL/min～1mL/min，在1.5min～2min时可鉴定出肽序列；
3)所述的肽序列纯化过程，是指流动...

【专利技术属性】
技术研发人员：林松毅，杨睿雯，叶海清，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22