一种固液相结合制备西那普肽的方法技术

本发明专利技术涉及多肽合成领域，特别涉及一种固液相结合制备西那普肽的方法。本发明专利技术提供的方法如下：首先制备多肽片段Ⅰ：Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-OH，然后采用Fmoc固相合成法向载体树脂上依次偶联四个多肽片段Ⅰ，最后偶联保护氨基酸Lys，经裂解反应后制得西那普肽。采用本方法制备西那普肽仅需经过五步接肽反应，生产周期短，粗肽纯度高，生产成本低，操作简便，适宜进行工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多肽合成领域，特别涉及一种固液相结合制备西那普肽的方法。
技术介绍
新生儿呼吸窘迫综合征(RDS)是指新生儿出生后不久即出现进行性呼吸困难和呼吸衰竭等症状，主要是由于缺乏肺泡表面活性物质所引起，导致肺泡进行性萎陷，患儿于生后4-12小时内出现进行性呼吸困难、呻吟、发绀、吸气三凹征，严重者发生呼吸衰竭。发病率与胎龄有关，胎龄越小，发病率越高，体重越轻，病死率越高。2012年3月6日，DiscoveryLaboratories公司的气管内悬液Surfaxin(Lucinactant，芦西纳坦)获得美国食品药品管理局(FDA)批准，用于治疗早产儿呼吸窘迫综合征。Surfaxin是在西那普肽的基础上根据天然人肺表面活性剂的特点设计而成的产品，用于模拟人肺表面活化蛋白B(SP-B)。西那普肽，英文名称为Sinapultide，分子量2469.40，是一种人工设计的含有21个氨基酸的多肽分子，其结构如下：目前国内关于西那普肽的合成方法主要有基因重组法和化学法。其中美国专利US5260273采用基因重组技术合成西那普肽，但该方法操作繁琐，且技术要求及生产成本极高，不利于进行工业化大规模生产，最重要的是，一旦重组基因DNA分子链上的核苷酸发生突变，则会造成肽链上相应的氨基酸突变，降低了药品的纯度和使用安全性。中国专利CN102850440A是国内首个有关西那普肽合成方法的专利，采用了片段合成的方法。该方法首先通过固相合成的方法合成片段肽树脂Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-树脂，然后再逐步偶联以固相法制得的中间体Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-OH，制得KLLLLKLLLLKLLLLKLLLL肽树脂，裂解后得西那普肽类似物，该专利采用固相法制备多肽片段，需要耗用大量昂贵的载体树脂，生产成本较高，并且在合成片段Fmoc-Lys(Boc)-Leu-Leu-Leu-Leu-OH过程中，容易产生杂质Fmoc-Lys-Leu-Leu-Leu-Leu-OH，进而导致终产品中含有Lys侧链氨基偶联上片段H-Lys-Leu-Leu-Leu-Leu-OH的杂质。中国专利CN104098656A采用Fmoc固相合成法，依次偶联每一位保护氨基酸，获得保护21肽树脂，经裂解反应制得西那普肽，产率为47.9％。此方法生产周期较长，经历多步接肽反应，粗肽纯度较低，导致总收率较低，生产成本高。中国专利CN104817631A介绍了一种首先通过Fmoc固相合成法合成Fmoc-Lys(Boc)-树脂，然后交替偶联保护片段Fmoc-(Leu)4-OH与保护氨基酸Fmoc-Lys(Boc)-OH，制得西那普肽肽树脂，最后经裂解反应制得西那普肽的方法。此方法仍需经历多步接肽反应，粗品纯度较低，产率在52.3％-57.1％之间，生产周期较长，生产成本高。综上所述，目前报道的西那普肽合成方法中，均存在生产周期较长，生产成本高的问题，不利于放大生产，产率较低的问题。
技术实现思路
为解决上述西那普肽合成过程中存在的问题，本专利技术提供一种固液相结合制备西那普肽的方法：首先采用液相法制备多肽片段Ⅰ：Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-OH，然后采用Fmoc固相合成法向载体树脂上依次偶联四个多肽片段Ⅰ，最后偶联保护氨基酸Lys，经裂解反应后制得西那普肽。采用本方法制备西那普肽仅需经过五步接肽反应，生产周期短，粗肽纯度高，收率高，同时大大降低了生产成本，适宜进行工业化生产。为实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：一种固液相结合制备西那普肽的方法，包括如下步骤：(a)制备多肽片段Ⅰ：Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-OH；(b)采用Fmoc固相合成法向载体树脂上依次偶联步骤(a)中的多肽片段Ⅰ依次偶联4次后，然后偶联保护氨基酸Lys，制备西那普肽肽树脂；(c)西那普肽肽树脂经裂解反应制备西那普肽粗肽；(d)西那普肽粗肽经纯化过程制备西那普肽精肽。其中，步骤(a)中，多肽片段Ⅰ的制备过程为：(1)合成Boc-Leu-OSu：Boc-Leu-OH与HOSu在有机溶剂中，以DCC为活化剂，反应制备Boc-Leu-OSu；其中Boc-Leu-OH和HOSu的摩尔比为1:1.0～1.2；Boc-Leu-OH和DCC的摩尔比为1:1.0～1.2；(2)合成H-Leu-Leu-OH：H-Leu-OH和Boc-Leu-OSu在碳酸钠溶液中反应，制备Boc-Leu-Leu-OH，然后经TFA处理，制备H-Leu-Leu-OH；其中H-Leu-OH和碳酸钠的摩尔比为1：1.0～2.0；H-Leu-OH和Boc-Leu-OSu的摩尔比为1:1.1～1.5；(3)合成Fmoc-Leu-OSu：Fmoc-Leu-OH与HOSu在有机溶剂中，以DCC为活化剂，反应制备Fmoc-Leu-OSu；其中Fmoc-Leu-OH和HOSu的摩尔比为1:1.0～1.2；Fmoc-Leu-OH和DCC的摩尔比为1:1.0～1.2；(4)Fmoc-Leu-Leu-OH的制备：H-Leu-OH和Fmoc-Leu-OSu在碳酸钠溶液中反应，制备Fmoc-Leu-Leu-OH；其中H-Leu-OH和碳酸钠的摩尔比为1：1.0～2.0；H-Leu-OH和Fmoc-Leu-OSu的摩尔比为1:1.1～1.5；(5)Fmoc-Leu-Leu-OSu的制备：Fmoc-Leu-Leu-OH与HOSu在有机溶剂中，以DCC为活化剂，反应制备Fmoc-Leu-Leu-OSu；其中Fmoc-Leu-Leu-OH和HOSu的摩尔比为1:1.0～1.2；Fmoc-Leu-Leu-OH和DCC的摩尔比为1:1.0～1.2；(6)Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OH的制备：H-Leu-Leu-OH和Fmoc-Leu-Leu-OSu在碳酸钠溶液中反应，制备Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OH；其中H-Leu-Leu-OH和碳酸钠的摩尔比为1：1.0～2.0；H-Leu-Leu-OH和Fmoc-Leu-Leu-OSu的摩尔比为1:1.1～1.5；(7)Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OSu的制备：Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OH与HOSu在有机溶剂中，以DCC为活化剂反应制备Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OSu；其中Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种固液相结合制备西那普肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：(a)液相法制备多肽片段Ⅰ：Fmoc‑Leu‑Leu‑Leu‑Leu‑Lys(Boc)‑OH；(b)采用Fmoc固相合成法向载体树脂上偶联步骤(a)中的多肽片段Ⅰ，依次偶联四次后再与保护氨基酸Lys进行偶联，制备西那普肽肽树脂；(c)西那普肽肽树脂经裂解反应制备西那普肽粗肽；(d)西那普肽粗肽经纯化过程制备西那普肽精肽。

【技术特征摘要】
1.一种固液相结合制备西那普肽的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)液相法制备多肽片段Ⅰ：Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys(Boc)-OH；
(b)采用Fmoc固相合成法向载体树脂上偶联步骤(a)中的多肽片段Ⅰ，
依次偶联四次后再与保护氨基酸Lys进行偶联，制备西那普肽肽树脂；
(c)西那普肽肽树脂经裂解反应制备西那普肽粗肽；
(d)西那普肽粗肽经纯化过程制备西那普肽精肽。
2.根据权利要求1所述的一种固液相结合制备西那普肽的方法，其特征在于，步
骤(a)中，多肽片段Ⅰ的制备过程为：
(1)合成Boc-Leu-OSu：Boc-Leu-OH与HOSu在有机溶剂中，以DCC为
活化剂，反应制备Boc-Leu-OSu；所述Boc-Leu-OH和HOSu的摩尔比为1:1.0～1.2；
所述Boc-Leu-OH和DCC的摩尔比为1:1.0～1.2；
(2)合成H-Leu-Leu-OH：H-Leu-OH和Boc-Leu-OSu在碳酸钠溶液中反
应，制备Boc-Leu-Leu-OH，然后经TFA处理，制备H-Leu-Leu-OH；所述H-Leu-OH
和碳酸钠的摩尔比为1：1.0～2.0；所述H-Leu-OH和Boc-Leu-OSu的摩尔比为
1:1.1～1.5；
(3)合成Fmoc-Leu-OSu：Fmoc-Leu-OH与HOSu在有机溶剂中，以DCC
为活化剂，反应制备Fmoc-Leu-OSu；所述Fmoc-Leu-OH和HOSu的摩尔比为
1:1.0～1.2；所述Fmoc-Leu-OH和DCC的摩尔比为1:1.0～1.2；
(4)Fmoc-Leu-Leu-OH的制备：H-Leu-OH和Fmoc-Leu-OSu在碳酸钠溶
液中反应，制备Fmoc-Leu-Leu-OH；所述H-Leu-OH和碳酸钠的摩尔比为1：1.0～
2.0；所述H-Leu-OH和Fmoc-Leu-OSu的摩尔比为1:1.1～1.5；
(5)Fmoc-Leu-Leu-OSu的制备：Fmoc-Leu-Leu-OH与HOSu在有机溶剂
中，以DCC为活化剂，反应制备Fmoc-Leu-Leu-OSu；所述Fmoc-Leu-Leu-OH
和HOSu的摩尔比为1:1.0～1.2；所述Fmoc-Leu-Leu-OH和DCC的摩尔比为
1:1.0～1.2；
(6)Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OH的制备：H-Leu-Leu-OH和
Fmoc-Leu-Leu-OSu在碳酸钠溶液中反应，制备Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OH；所
述H-Leu-Leu-OH和碳酸钠的摩尔比为1：1.0～2.0；所述H-Leu-Leu-OH和
Fmoc-Leu-Leu-OSu的摩尔比为1:1.1～1.5；
(7)Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OSu的制备：Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OH与
HOSu在有机溶剂中，以DCC为活化剂反应制备Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OSu；
所述Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OH和HOSu的摩尔比为1:1.0～1.2；所述
Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-OH和DCC的摩尔比为1:1.0～1.2；
(8)Fmoc-Leu-Leu-Leu-Leu-Lys...

【专利技术属性】
技术研发人员：张颖，王德龙，王仁友，李同金，石鑫磊，
申请(专利权)人：济南康和医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37