本发明专利技术提供一种用于从重组多克隆抗体(rpAb)的制剂中去除多聚体同时将单体的比率维持在窄范围内的方法。本发明专利技术提供一种分离重组多克隆抗体多聚体而具有最小单体分离的方法，该方法包括使一种包含多种单克隆抗体的混合物经受至少一种分离方法，从而产生一种基本上不含多聚体的抗体单体制剂，该至少一种分离方法选自下组，该组由以下各项组成：多模式色谱法、磷灰石色谱法以及疏水相互作用色谱法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】具有最小单体分离的重组多克隆抗体多聚体的分离 专利
本专利技术涉及从重组多克隆抗体（rpAb)的制剂中分离抗体多聚体（多聚体）。 专利技术背景 对重组生物制药制剂中的多聚体和多聚体的控制是令人感兴趣的，因为这些物质 潜在地造成安全性和免疫原性的问题（罗森伯格（R〇senberg)，A. S. (2006)AAPSJ 8:59; G.尚卡尔（Shankar)，G.等人（2007)自然生物技术（Nat.Biotechnol).25:555;科尔多 瓦-罗德里格斯（Cordoba_Rodriguez)，R· (2008)国际生物制药（Biopharm.Int. )21:44)〇 对于重组多克隆抗体（mAb)，通常使用离子交换色谱法来实现多聚体的分离，其中最终抗体 制剂的单体纯度经常超过99% (苏达（Suda)，E. J.等人（2009)色谱法杂志A卷（J. Chrom. △?) 1216:5256;周（211〇11)，1乂.等人（2007)色谱法杂志八卷1175:69;￥丨823￥(伊格佐耳）， Y.等人（2009)当代药物生物技术（Curr.Pharm. Biotechnol. )10:421)。对于来源于人血 浆的多克隆IgG制剂，IgG多聚体的水平较高，在IVIG制剂的一项研究中该IgG多聚体的水 平在5%-18%的范围内（克内热维奇-马拉米察（1(1^6￥；\&1抑1]1；^3)，1.等人（2003) 输血杂志（Transfusion) 43:1460)。与mAb相比，在商业多克隆IVIG制剂中所见的多聚体 水平较高的部分原因是材料的性质不同（例如，等电点的范围和IgG亚类）。虽然出于治疗 原因维持血浆来源的IVIG的完全多样性是重要的，但也使得分离多聚体而不同时分离基 于特征（如电荷）而不同的IgG单体极其困难（福雷尔（Forrer)，N.等人（2008)色谱法 杂志 A 卷 1214:59)。 重组多克隆抗体（rpAb)代表一类新颖的能够靶向多种抗原的生物药剂。为了降 低成本，可预料的是，将以单个批次制造用于治疗使用的rpAb，其中各个组分mAb在相同生 物反应器中共表达并且一起纯化（拉斯马森（Rasmussen)，S.K.等人（2012)生物化学与生 物物理学集刊（Arch. Biochem. Biophys.) 526:139)。 与mAb类似，对于rpAb，希望将多聚体物质控制在低水平下。与mAb不同，rpAb 纯化增添了另外的约束，即各个组分mAb的相对比率被控制在窄范围内（T.P弗兰德森 (Frandsen)，T.P.等人（2011)生物技术（Biotech. Bioeng. )108:2171)。这个问题提出了 重大挑战，因为需要分离不希望的物质（多聚体）而不同时分离代表rpAb混合物的mAb的 不同组，从而确保抗体相对比率被维持在窄范围内。以另一种方式说明该问题，多克隆混合 物的组分mAb必须一起共纯化而多聚体物质不能。对于这类具有挑战性的分离，用于mAb 的传统方法如离子交换色谱法可能并不合适。 我们已经出乎意料地发现了实现同时具有最小单体分离的重组多克隆抗体多聚 体的分离的方法。 专利技术概述 本专利技术提供一种分离重组多克隆抗体多聚体而具有最小单体分离的方法，该方法 包括使一种包含多种单克隆抗体的混合物经受至少一种分离方法，从而产生一种基本上不 含多聚体的抗体单体制剂，该至少一种分离方法选自下组，该组由以下各项组成：多模式色 谱法、磷灰石色谱法以及疏水相互作用色谱法。 在一些实施例中，该混合物经受至少两种分离方法，从而产生基本上不含多聚体 的抗体单体制剂，该至少两种分离方法选自下组，该组由以下各项组成：多模式色谱法、磷 灰石色谱法以及疏水相互作用色谱法。 在其他实施例中，该分离方法是单独多模式色谱法。在其他实施例中，该分离方法 是单独磷灰石色谱法。在其他实施例中，该分离方法是单独疏水相互作用色谱法。 在一些实施例中，该分离方法是多模式色谱法和磷灰石色谱法。在一些实施例中， 该分离方法是多模式色谱法和疏水相互作用色谱法。在一些实施例中，该分离方法是磷灰 石色谱法和疏水相互作用色谱法。在一些实施例中，该混合物经受多模式色谱法、磷灰石色 谱法以及疏水相互作用色谱法，从而分离重组多克隆抗体多聚体而具有最小单体分离。 在一些实施例中，由该方法产生的抗体制剂是至少90%至91%不含多聚体。在其 他实施例中，该抗体制剂是至少92 %至93 %不含多聚体。在其他实施例中，该抗体制剂是 至少94%至95 %不含多聚体。在其他实施例中，该抗体制剂是至少96 %至97 %不含多聚 体。在其他实施例中，该抗体制剂是至少98%至99%不含多聚体。在其他实施例中，该抗 体制剂是100 %不含多聚体。 在一些实施例中，相对于rpAb混合物中的任何其他抗体单体，任何抗体单体的量 变化小于40 %。在其他实施例中，相对于rpAb混合物中的任何其他抗体单体，任何抗体单 体的量变化小于30 %。在其他实施例中，相对于rpAb混合物中的任何其他抗体单体，任何 抗体单体的量变化小于20 %。在其他实施例中，相对于rpAb混合物中的任何其他抗体单 体，任何抗体单体的量变化小于10 %。在其他实施例中，相对于rpAb混合物中的任何其他 抗体单体，任何抗体单体的量变化小于5 %。在其他实施例中，相对于rpAb混合物中的任何 其他抗体单体，任何抗体单体的量变化〇 %。 本专利技术还提供一种分离重组多克隆抗体多聚体而具有最小单体分离的方法，该方 法包括使包含多种单克隆抗体的混合物接触多模式色谱法树脂，并且使用包含缓冲物质和 在0M与1M之间的盐的至少一种洗脱缓冲液，从所述树脂上洗脱抗体单体。 本专利技术还提供一种分离重组多克隆抗体多聚体而具有最小单体分离的方法，该方 法包括使包含多种单克隆抗体的混合物接触磷灰石色谱法树脂，并且使用盐的逐步改变或 线性梯度以使电导率从小于lmS/cm增加至大于90mS/cm或在lmS/cm与90mS/cm中间的任 何范围，从所述树脂上洗脱抗体单体。例如，可以使用盐的逐步改变以使电导率从5mS/cm 增加至20mS/cm来洗脱柱。 本专利技术还提供一种分离重组多克隆抗体多聚体而具有最小单体分离的方法，该方 法包括使包含多种单克隆抗体的混合物接触疏水相互作用色谱法树脂，并且使用盐的逐步 改变或线性梯度以使电导率从大于200mS/cm减小至小于lmS/cm或在200mS/cm与lmS/cm 中间的任何范围，从所述树脂上洗脱抗体单体。例如，可以使用盐的逐步改变以使电导率从 60mS/cm减小至10mS/cm来洗脱柱。 附图简要说明 图1示出含有以近似1:1:1比率的mAb A、mAb B以及mAb C的rpAb混合物的波 罗斯 50HS(P0R0S 50HS)色谱法。 图2示出含有以近似1:1:1比率的mAb A、mAb B以及mAb C的rpAb混合物的 Capto Adhere 色谱法。 图3示出含有以近似1:1比率的mAb A和mAb B的rpAb混合物的Capto Adhere 色谱法。 图4示出含有以近似1:1比率的mAb A和mAb B的rpAb混合物的羟基磷灰石色 谱法。 图本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离重组多克隆抗体多聚体而具有最小单体分离的方法，该方法包括使一种包含多种单克隆抗体的混合物经受至少一种分离方法，从而产生一种基本上不含多聚体的抗体单体制剂，该至少一种分离方法选自下组，该组由以下各项组成：多模式色谱法、磷灰石色谱法以及疏水相互作用色谱法。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·亨德，T·派斯特，J·王，王向阳，H·刘，
申请(专利权)人：米迪缪尼有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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