免疫学检测方法和免疫学检测试剂技术

本发明专利技术的目的是提供一种通过使用包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段(以下，“包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段”简称为“针对抗原的抗体片段”)的抗原-抗体反应检测样品中的分析物(抗原)的方法，所述方法抑制由所述抗体片段引起的非特异性反应。更具体地，本发明专利技术提供一种通过使用针对抗原的抗体片段的抗原-抗体反应检测样品中的分析物抗原的方法，所述方法包括以下步骤：a)使样品与变性的抗体片段接触；和b)在步骤a)后，使所述样品与固定在不溶性载体上的抗体片段接触，所述方法抑制非特异性的反应。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种抑制方法和用于抑制非特异性反应的试剂（非特异性反应抑制 剂）以及使用所述试剂的免疫测定，并且更具体地涉及抑制方法和用于抑制非特异性反应 的试剂，其特征在于使用固定在不溶性载体上的抗体片段的免疫测定。
技术介绍
临床化学领域中，用于测量样本中的分析物的一种通用方法是使用针对分析物 (抗原）的抗体的免疫测定。具体地，使用固定在不溶性载体上的抗体的免疫凝集反应法和 免疫色谱法在灵敏性和可用性方面具有优点，因此，它们成为用于多种临床检查项目的通 用测量方法。 由于近来在测量准确性方面的提高，避免免疫测定中的非特异性反应成为体外诊 断试剂研发中的一个问题。非特异性反应是这样的现象：其中样品中的某种因子与用作免 疫测定要素的作为试剂的组成成分的抗体反应，并且产生假信号，这导致对正确的测量的 干扰。发现非特异性反应的一个引起因素是异好性抗体和类风湿因子（RF)。 异好性抗体是下述人抗体的总称，所述抗体表现出针对构成免疫测定的主要成 分的动物来源的抗体的反应性，并且已知HAMA(人抗小鼠抗体）是代表性的抗体。由于 提议异好性抗体可以在不知不觉的情形下（如饮食，与动物接触，和施用生物学药物） 通过抗原致敏产生，并且在来自未暴露于抗原的人的样品中的抗体可以表现出异好性 (heterophilicity)，所以其原因目前尚没有详细或以统一方式澄清。另一方面，由于类风 湿因子在类风湿性关节炎患者中出现，并且已知识别免疫球蛋白（抗体）的Fc区，因此，认 为类风湿因子的概念不同于异好性抗体的概念；然而，二者在关于与动物来源的抗体的反 应性方面都具有共同的特征，并且已知二者实际上是人IgG或IgM(所谓的自体抗体），如非 专利文献1所述。 在常规方法中，通过去除Fc区域获得的抗体片段（下文定义），Fab或F (ab' )2， 用作用于体外诊断试剂的抗体，以减少非特异性反应，并且所述方法在抑制类风湿因子的 作用方面特别有效。另外地，作为成分包含在非专利文献2和3所述的抗-人IgM单克隆 抗体中的异好性阻断剂HBR由SCANTIB0DIES商业化作为抑制非特异性反应的添加剂，所述 非特异性反应是由于与Fab结合的异好性抗体导致。还已经设计了其他方法，包括在专利 文献1中所述的方法，所述方法包括向由与制备用于测量的抗体的物种相同物种的动物制 备的IgM种类天然抗体中加入多克隆抗体；专利文献2中所述的方法，所述方法包括向类风 湿因子的识别区加入多种动物抗体；和专利文献3中所述的抑制非特异性反应的方法，所 述方法包括使用能够凝集人IgM的单一种类的抗人IgM单克隆抗体。 然而，仅通过常规对策不能充分抑制非特异性反应，并且已经发现，在一些样本 中，所述对策本身引起非特异性反应。 引用列表 专利文献 专利文献 I :JP Η11_2878〇1Α 专利文献 2 :JP HO7-Ol28I8A 专利文献 3 :W〇2〇10/〇26758 非专利文献 非专利文献I :Clinical Chemistry (临床化学）；第23卷增刊175a_l至 175a-10(1994) 非专利文献 2 〖Advertising Material for Heterophilic Blocking Reagent HBR(NAGASE&CO.，LTD.，1993) 非专利文献 3 :CLIN. CHEM.(临床化学）45/7, 942-956(1999) 专利技术概述 技术问题 本专利技术涉及一种抑制方法和非特异性反应抑制剂以及使用所述抑制剂的免疫测 定，更具体地，本专利技术要解决的问题是提供用于抑制非特异性反应的方法和试剂，其特征在 于使用固定在不溶性载体上的抗体片段的免疫测定。 问题的解决方案 作为解决该问题的深入研究的结果，本专利技术人已经发现，在使用其上固定有抗体 片段的不溶性载体的测量方法中，可以在使样品与其上固定有抗体片段的不溶性载体接 触之前或同时使表现出不能通过常规对策使用全长、非片段化的抗体（以下还称为完整抗 体）抑制非特异性反应的样品与变性的抗体片段接触而抑制非特异性反应，由此完成了本 专利技术。因此，本专利技术的目的是涉及使用变性的抗体片段抑制非特异性反应的方法。 本专利技术人已经令人惊讶地发现，即使变性的抗体片段和固定在不溶性载体上的抗 体片段不是来源于相同的全长抗体，只要所述抗体片段是针对分析物抗原的抗体，就发挥 本专利技术目的的非特异性反应抑制作用。因此，本专利技术的另一个目的是涉及包含变性的抗体 片段的非特异性反应抑制剂，并且另一个目的是涉及使用所述抑制剂的免疫测定和免疫测 定剂。 具体地，本专利技术具有下述方案。 -种通过使用包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段（以下"包含针 对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段"简称为"抗体片段"）的抗原-抗体反应检测样品 中的所述分析物抗原的方法，所述方法包括以下步骤： a)使样品与变性的抗体片段接触； b)与步骤a)同时或在步骤a)之后，使所述样品与固定在不溶性载体上的抗体片 段接触。 的检测方法，其中所述变性的抗体片段识别与所述固定在不溶性载体上的 抗体片段所识别的表位相同或不同的表位。 或的检测方法，其中b)中所述的固定在不溶性载体上的抗体片段包含 至少两种抗体片段，所述至少两种抗体片段具有彼此不同的抗原结合区，并且独立地固定 在不溶性载体上。 -种在通过使用抗体片段的抗原-抗体反应检测样品中的分析物抗原的方法 中抑制非特异性反应的方法，所述方法包括以下步骤： a)使样品与变性的抗体片段接触； b)与步骤a)同时或在步骤a)之后，使所述样品与固定在不溶性载体上的抗体片 段接触。 的抑制非特异性反应的方法，其中所述变性的抗体片段识别与所述固定在 不溶性载体上的抗体片段识别的表位相同或不同的表位。 或的抑制非特异性反应的方法，其中b)中所述的固定在不溶性载体上 的抗体片段包含至少两种抗体片段，所述至少两种抗体片段具有彼此不同的抗原结合区， 并且独立地固定在不溶性载体上。 至中任一项的抑制非特异性反应的方法，其中非特异性反应由用于测 量的抗体片段引起。 至中任一项的抑制非特异性反应的方法，其中非特异性反应是用包含 全长抗体的用于抑制非特异性反应的试剂不能抑制的反应。 的抑制非特异性反应的方法，其中所述全长抗体抗体是全长抗人IgG抗体 或抗人IgM抗体或抗人IgA抗体。 的抑制非特异性反应的方法，其中所述全长抗体是由杂交瘤FERM BP-11134产生的单克隆抗体。 的抑制非特异性反应的方法，其中包含全长抗体的用于抑制非特异性反 应的试剂是 HBR(SCANTIBODIES)。 -种用于通过抗原-抗体反应检测样品中的分析物抗原的试剂，所述试剂包 含： 1)不溶性载体，其上固定有针对所述分析物抗原的抗体片段；和 2)针对所述分析物抗原的变性的抗体片段。 的试剂，其中所述变性的抗体片段识别与固定在不溶性载体上的抗体片 段所识别的表位相同或不同的表位。 或的试剂，其中固定在1)不溶性载体上的抗体片段包含至少两种 抗体片段，所述至少两种抗体片段具有彼此不同的抗原结合区，并且独立地固定在不溶性 载体上。 或的试剂，其还包含：3)包含全长抗体的用于抑制非特异性反应的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种通过使用包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段(以下“包含针对分析物抗原的抗原结合区的抗体片段”将简称为“抗体片段”)的抗原‑抗体反应检测样品中的所述分析物抗原的方法，所述方法包括以下步骤：a)使样品与变性的抗体片段接触；b)与步骤a)同时或在步骤a)之后，使所述样品与固定在不溶性载体上的抗体片段接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：片冈智惠，高桥弘至，吉田忠晃，坂场义正，
申请(专利权)人：积水医疗株式会社，
类型：发明
国别省市：日本;JP