本发明专利技术涉及免疫学检测技术领域，具体涉及一种使用磁微粒化学发光定量检测抗SS-A抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法。本发明专利技术提供的一种使用磁微粒化学发光定量检测抗SS-A抗体IgG的试剂盒，包括Anti-SS-A IgG校准品、Anti-SS-A IgG试剂1号、Anti-SS-A IgG试剂2号、Anti-SS-A IgG磁分离试剂、Anti-SS-A IgG质控品和清洗液。本发明专利技术还公开了上述试剂盒的制备和检测方法。该检测方法在传统的膜条免疫法和酶联免疫吸附法的基础上，将灵敏度和线性范围再提高3-5个数量级、实现了定量检测，具有敏感度高、特异性强、准确性好、成本低、操作简便和结果判断客观优点，并配合全自动化学发光免疫分析仪实现全自动使用，具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及免疫学检测
，具体设及一种使用磁微粒化学发光定量检测抗 SS-A抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法。
技术介绍
抗SS-A抗体与各种自身免疫性疾病相关，常见于干燥综合征、系统性红斑狼疮、慢 性活动性肝炎患者。此外，在100 %的新生儿红斑狼疮中也可检出抗SS-A抗体，抗SS-A抗体 可经胎盘传给胎儿，引起炎症反应，还可导致新生儿先天性屯、脏传导阻滞。SS-A抗体在其他 疾病W及正常人血清中阳性率很低、抗体效价亦低，结合临床表现较易鉴别。 目前临床上抗SS-A抗体IgG的检测有的膜条免疫法和酶联免疫吸附法。膜条免疫 法应用的是膜条显色技术，其特点为固定几个项目在同一膜条测定，一般通过手工或者半 自动膜条仪进行实验操作，最终通过肉眼进行定性判定，该技术灵敏度低，反应时间长，检 测项目只能固定搭配组合，灵活性差。酶联免疫吸附法的灵敏度在膜条免疫法基础上有所 提升，但仍然较低，并且线性范围窄，重复性差，反应时间也较长，仍然不能很好满足临床的 应用。 磁微粒化学发光免疫分析法，较W前的膜条免疫法和酶联免疫吸附法，在检测灵 敏度、检测范围、检测时间及自动化操作上有了大大提高，且没有污染，临床应用广。目前， 使用磁微粒化学发光分析法在抗SS-A抗体IgG免疫分析产品的应用仍未见。 中国专利CN103105489A公开了检测自身免疫性疾病抗体的免疫印迹试剂盒及其 制备方法，设及一种检测多种自身免疫性疾病相关抗体的免疫印迹试剂盒，解决目前尚无 用于多种自身免疫性疾病体检筛查的免疫印迹产品技术上的不足:在所述的硝酸纤维素膜 或尼龙膜上含有:分别由(130魁、5111/1^\〇^、554、558、640、1〔4、14-24、了6、4魁-]\12共10种中 的至少两种天然或重组抗原包被而成的两条W上平行的检测线，1条高浓度质控带，1条中 浓度质控带及1条低浓度质控带。该专利公开的是一种膜条免疫法，更能说明膜条免疫法存 在的灵敏度较低、线性范围窄、重复性差和反应时间长的问题。
技术实现思路
为了克服现有技术中的缺陷，本专利技术提供一种使用磁微粒化学发光定量检测抗 SS-A抗体IgG的试剂盒，能够低成本制备得到，且能够实现抗SS-A抗体IgG准确和高精确地 定量测定。 本专利技术是通过如下技术方案来实现的：一种使用磁微粒化学发光定量检测抗SS-A 抗体IgG的试剂盒，所述试剂盒包括:Anti-SS-AIgG校准品、Anti-SS-AIgG试剂1号、Anti-SS-AIgG试剂2号、Anti-SS-AIgG磁分离试剂、Anti-SS-AIgG质控品和清洗液。[000引所述Anti-SS-AIgG校准品包括6个液体校准瓶，所述液体校准瓶内目标浓度分别 为0、5、20、50、100、200抓/mL的Anti-SS-AIgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液； 所述Anti-SS-AIgG试剂1号为1个含有生物素标记的SS-A抗原和牛血清白蛋白的 化is缓冲液的瓶； 所述Anti-SS-AIgG试剂2号为1个含有碱性憐酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛 血清白蛋白的化is缓冲液的瓶； 所述Anti-SS-AIgG磁分离试剂为1个含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白 蛋白的化is缓冲液瓶； 所述Anti-SS-AIgG质控品包括2个质控瓶，所述质控瓶内的浓度的范围分别为： 16-24抓/mL和80-120抓/mL。[001引所述试剂盒检测原理为将待测样品、所述Anti-SS-AIgG试剂巧混合溫育，样品 中的抗SS-A抗体IgG与SS-A抗原特异性结合，再加入所述Anti-SS-AIgG磁分离试剂，抗SS-A抗体IgG与SS-A抗原的免疫复合物被吸附到磁微粒表面，洗涂去除未结合的抗体和杂质， 加入Anti-SS-AIgG试剂2号并混合溫育。碱性憐酸酶标记(ALP)的羊抗人IgG抗体与已经结 合在磁珠上的抗SS-A抗体IgG特异性结合。洗涂去除未结合的抗体和杂质后加入化学发光 底物，ALP催化底物发光，测定相对发光强度(RLU)。在一定范围内化U与样品中抗SS-A抗体 IgG浓度呈正比，通过RLU就可W从标准曲线上计算出待测样品的抗SS-A抗体IgG含量。本专利技术采取的又一技术方案是：一种抗SS-A抗体IgG的磁微粒化学发光定量检测 试剂盒的制备方法，所述试剂盒的制备方法包括W下步骤：[001引步骤1.制备所述Anti-SS-AIgG校准品包括:Anti-SS-AIgG校准品稀释液配制步 骤和Anti-SS-AIgG校准品配制步骤：所述Anti-SS-AIgG校准品稀释液的配制步骤包括： 加800mL纯化水和11.2g的Trk到容器中，揽拌混合均匀，再加8.5g的氯化钢和2mL 的Proclin300，揽拌至完全溶解，将抑值调为7.0-7.5，加40g的牛血清白蛋白到容器中，揽 拌至完全溶解，再将pH值调为7.0-7.5,用纯化水定容至1L，使用0.2皿滤器过滤，将获得的 所述校准品稀释液保存在2-8°C待用；[001引所述Anti-SS-AIgG校准品的配制步骤包括： 用上述Anti-SS-AIgG校准品稀释液将抗SS-A抗体IgG分别配制为0、5、20、50、 100、200抓/mL共6个浓度点； 步骤2.制备所述Anti-SS-AIgG试剂1号包括:Anti-SS-AIgG试剂1号稀释液配制 步骤和Anti-SS-AIgG试剂1号配制步骤： 所述Anti-SS-AIgG试剂1号稀释液的配制步骤： 力日800血纯化水、12.1g的Tris和5.8g的化C1于1L容器中，揽拌至完全溶解，再加入 2mL的Proclin300，揽拌至完全溶解，再加入5g的牛血清白蛋白，揽拌至完全溶解，将抑值调 为7.0-7.5,用纯化水定容至1L，使用0.2WI1滤器过滤，将获得的所述试剂1号稀释液保存在 2-8°C待用； 所述Anti-SS-AIgG试剂1号的配制步骤： 用0.2mol/L的抑9.0碳酸盐缓冲液配制0.5mg/mL的生物素溶液，按照SS-A抗原与 生物素溶液质量比为10:1的比例在SS-A抗原溶液中加入到上述0.5mg/mL的生物素溶液，混 合均匀，室溫静置1她，反应生成SS-A抗原-生物素连接物的反应液，将得到的SS-A抗原-生 物素连接物反应液通过G-25凝胶柱进行分离，除去未反应的生物素，得到SS-A抗原-生物素 连接物，再用所述试剂1号稀释液将SS-A抗原-生物素连接物稀释到0.1-0.化g/mL，得到所 述的试剂1号；步骤3.制备所述Anti-SS-AIgG试剂2号包括:Anti-SS-AIgG试剂2号稀释液配制 步骤和Anti-SS-AIgG试剂2号的配制步骤： 所述Anti-SS-AIgG试剂2号稀释液的配制步骤： 力日800mL纯化水、6.06g的4-径乙基赃嗦乙横和8.5g的化C1到容器中，揽拌至完全 溶解，再加入5g的牛血清白蛋白、O.lg的化Cl2、0.2血的Proclin300和O.lg的MgCl2,揽拌至 完全溶解，将抑值调为7.5-8.0,用纯化水定容至1L，使用0.2皿滤器过滤，将获得的所述试 剂2号稀释液保存在2-8°C待用；[002引所述Anti-SS-AIgG试剂2号的配本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种使用磁微粒化学发光定量检测抗SS‑A抗体IgG的试剂盒，所述试剂盒包括：Anti‑SS‑A IgG校准品、Anti‑SS‑A IgG试剂1号、Anti‑SS‑A IgG试剂2号、Anti‑SS‑A IgG磁分离试剂、Anti‑SS‑A IgG质控品和清洗液，其特征在于：所述Anti‑SS‑A IgG校准品包括6个液体校准瓶，所述液体校准瓶内目标浓度分别为0、5、20、50、100、200RU/mL的Anti‑SS‑A IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液；所述Anti‑SS‑A IgG试剂1号为1个含有生物素标记的SS‑A抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶；所述Anti‑SS‑A IgG试剂2号为1个含有碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶；所述Anti‑SS‑A IgG磁分离试剂为1个含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶；所述Anti‑SS‑A IgG质控品包括2个质控瓶，所述质控瓶内的浓度的范围分别为：16‑24RU/mL和80‑120RU/mL。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：北京中航赛维生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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