一种壳寡糖透明质酸复合纳米微粒的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种高分子材料学领域的纳米微粒的制备技术，即一种壳寡糖透明质酸复合纳米微粒的制备方法，本发明专利技术采用壳寡糖和透明质酸作为原料，通过聚合物凝聚法合成目标产物。具体步骤为：将壳寡糖、透明质酸分别溶于去离子水中，得到壳寡糖溶液和透明质酸溶液，将上述两种溶液中的一种在搅拌条件下缓慢滴加到另一种溶液中，进行聚合物沉淀反应，待滴加量接近一半时，停止滴加，然后将所得的反应体系反向滴加到前一种溶液中，并保持搅拌。控制搅拌转速、壳寡糖的浓度、透明质酸的浓度、壳寡糖与透明质酸的质量比以及溶液的滴加速度，待反应完毕，超声分散，分离纯化，干燥得到本发明专利技术的产品。产品的平均粒径在120—200nm，Zeta电位为-20mV—+30mV，可作为药物载体和医用生物材料，具有良好的研究和开发前景。

【技术实现步骤摘要】


本专利技术属于生物材料领域的一种壳寡糖透明质酸复合纳米微粒的制备方法。

技术介绍

壳寡糖又叫壳聚寡糖、低聚壳聚糖，是以壳聚糖为原料，经生物技术降解而成的一种寡糖产品。壳寡糖的水溶性好、生物活性高，在人体内吸收率近100%，其功效是壳聚糖的数十倍，对人体的作用包括免疫调节、抗肿瘤、降血脂、调节血糖、改善肝脏和心肺功能及其他多种生理功能。现有的研究专利技术中，曾有报道通过溶剂扩散法制备了壳寡糖纳米微粒，并考察了人肺腺癌细胞对其摄取的情况，揭示了壳寡糖纳米微粒作为生物大分子药物载体的潜在功能。还有报道通过微乳化-胶凝法制备了半乳糖化壳寡糖纳米微粒，以甘草酸二铵为模式药物，考察了其肝脏靶向功能。然而，以上方法制备的纳米微粒稳定性差、制备过程相对复杂、使用乳化剂和分散剂等不易除去，降低了其生物相容性，影响了其在体内作为药物载体的应用。因此，本专利技术旨在制备一种稳定性强、分散性好、制备过程简单、条件温和并且具有一定靶向性的纳米微粒，对于生理条件下的药物包载、释放及靶向递送具有重要意义。

技术实现思路

本专利技术的目的是提供一种壳寡糖透明质酸复合纳米微粒的制备方法，以弥补已有工艺的缺点。
本专利技术采用壳寡糖和透明质酸作为原料，通过聚合物凝聚法合成壳寡糖透明质酸复合纳米微粒。具体步骤为：将壳寡糖、透明质酸分别溶于去离子水中，得到壳寡糖溶液和透明质酸溶液，将上述两种溶液中的一种在搅拌条件下缓慢滴加到另一种溶液中，进行聚合物沉淀反应，待滴加量接近一半时，停止滴加，然后将所得的反应体系反向滴加到前一种溶液中，并保持搅拌。控制搅拌转速、壳寡糖的浓度、透明质酸的浓度、壳寡糖与透明质酸的质量比以及溶液的滴加速度，待反应完毕，超声分散，分离纯化，干燥得到壳寡糖透明质酸复合纳米微粒。
本专利技术具有操作简单，成本低廉，制备条件温和快速，不添加乳化剂与分散剂等优点，本专利技术所使用的原材料-壳寡糖和透明质酸均有较好的生物相容性，低毒，生理条件下可溶，作为药物传输载体在生物体内的应用具有显著的优势。本专利技术的重要意义在于制备得到的纳米微粒具有规则的球形，中性条件下能够稳定存在，有利于生理条件下进行药物的包载和释放。同时在细胞表面存在透明质酸的受体CD44，这也赋予了壳寡糖透明质酸复合纳米微粒体内的靶向性，在生物材料和癌症诊疗中具有良好的研究应用前景。
附图说明
图1:壳寡糖透明质酸复合纳米微粒的示意图（方法一）
图2:壳寡糖透明质酸复合纳米微粒的示意图（方法二）。
具体实施方式
本专利技术采用壳寡糖作为原料，通过聚合物凝聚法合成目标产物。具体实施方案为：
第一步：分别将壳寡糖和透明质酸溶于去离子水中，壳寡糖的浓度为0.2%-1.2%，透明质酸的浓度为0.2%-1.2%
第二步：
方法一：
将透明质酸溶液缓慢滴加到壳寡糖溶液中，壳寡糖与透明质酸的质量比为0.2-1:1，当透明质酸溶液的滴加量达到40%-60%时，将所得的反应体系反滴加到剩余的透明质酸溶液中，15-30min内完成滴加，转速为200-500转/分钟，反应时间为1-5小时，超声功率为100-150w，超声时间为5-10分钟，20000转/分钟离心20分钟，弃去上清液，冷冻干燥，即可得到目标产物。
方法二：
将壳寡糖溶液缓慢滴加到透明质酸溶液中，滴加量为壳寡糖与透明质酸的质量比为0.2-1:1，当壳寡糖溶液的滴加量达到40%-60%时，将所得的反应体系反滴加到剩余的壳寡糖溶液中，15-30min内完成滴加，转速为200-500转/分钟，反应时间为1-5小时，超声功率为100-150w，超声时间为5-10分钟，20000转/分钟离心20分钟，弃去上清液，冷冻干燥，即可得到目标产物。
本专利技术中的壳寡糖的分子量为1000-5000Da,脱乙酰度90%以上，透明质酸的分子量为10000-50000Da，所得产物的结构示意图如图1所示，将产物进行粒径及Zeta电位分析，结果表明所制备的纳米微粒的粒径均一，分散系数在0.093-0.195，平均粒径在120-200nm,纳米体系比较稳定，Zeta电位均-20mV—+30mV(表1)。对产物进行透射电镜的观察，纳米微粒呈球形，大小均一，分散均匀（图2）。
以下几个具体实施例为例进一步给出本专利技术的制造方法。
实施例1：
取0.01g分子量为1500Da的壳寡糖溶于5mL去离子水中，在搅拌条件下，缓慢滴加2mL0.4%(w/v)分子量为10000Da的透明质酸溶液，随后，将所得的反应体系滴加到3mL透明质酸溶液中，20分钟滴完，搅拌速度为300转/分钟，反应2小时，100w超声5分钟，20000转/分钟离心20分钟，弃去上清液，冷冻干燥即得壳寡糖透明质酸复合纳米微粒。
实施例2：
取0.02g分子量为2500Da的壳寡糖溶于5mL去离子水中，在搅拌条件下，缓慢滴加3mL0.6%(w/v)分子量为20000Da的透明质酸溶液，随后，将所得的反应体系滴加到剩余的2mL透明质酸溶液中，30分钟滴完，搅拌速度为400转/分钟，反应3小时，120w超声5分钟，20000转/分钟离心20分钟，弃去上清液，冷冻干燥即得壳寡糖透明质酸复合纳米微粒。
实施例3：
取0.05g分子量为40000Da的透明质酸溶于5mL去离子水中，在搅拌条件下，缓慢滴加2mL0.2%（w/v）分子量为3500Da的壳寡糖溶液，随后，将所得的反应体系滴加到3mL壳寡糖溶液中，30分钟滴完，搅拌速度为200转/分钟，反应4小时，120w超声10分钟，20000转/分钟离心20分钟，弃去上清液，冷冻干燥即得壳寡糖透明质酸复合纳米微粒。
实施例4：
取0.06g分子量为50000Da的透明质酸溶于5mL去离子水中，在搅拌条件下，缓慢滴加3mL0.3%（w/v）分子量为5000Da的壳寡糖溶液，随后，将所得的反应体系滴加到2mL壳寡糖溶液中，20分钟内滴完，搅拌速度为500转/分钟，反应5小时，150w超声10分钟，20000转/分钟离心20分钟，弃去上清液，冷冻干燥即得壳寡糖透明质酸复合纳米微粒。
附表说明
表1：壳寡糖透明质酸复合纳米微粒的平均粒径、分散系数及Zeta电位
本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种壳寡糖透明质酸复合纳米微粒的制备方法，其特征是用聚合物凝聚法制备目标产物，即壳寡糖透明质酸复合纳米微粒。

【技术特征摘要】
1.一种壳寡糖透明质酸复合纳米微粒的制备方法，其特征是用聚合物凝聚法制备目标产物，即壳寡糖透明质酸复合纳米微粒。
2.具体步骤为：将壳寡糖、透明质酸分别溶于去离子水中，得到壳寡糖溶液和透明质酸溶液，将上述两种溶液中的一种在搅拌条件下缓慢滴加到另一种溶液中，进行聚合物沉淀反应，待滴加量接近一半时，停止滴加，然后将所得的反应体系反向滴加到前一种溶液中，并保持搅拌,控制搅拌转速、壳寡糖的浓度、透明质酸的浓度、壳寡糖与透明质酸的质量比以及透明质酸溶液的滴加速度，待反应完毕，超声分散，分离纯化，干燥，即得到本发明的产品。
3.根据权利要求1所述的壳聚糖...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘雅，陈西广，程晓杰，孔明，冯超，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东;37