一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法技术

技术编号:13135915 阅读:123 留言:0更新日期:2016-04-06 21:54
本发明专利技术涉及免疫学检测技术领域,具体涉及一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法。本发明专利技术提供的一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒,包括Anti-Sm IgG校准品、Anti-Sm IgG试剂1号、Anti-Sm IgG试剂2号、Anti-Sm IgG磁分离试剂、Anti-Sm IgG质控品和清洗液。本发明专利技术还公开了上述试剂盒的制备和检测方法。该检测方法在传统的膜条免疫法和酶联免疫吸附法的基础上,将灵敏度和线性范围在提高3-5个数量级、实现了定量检测,具有敏感度高、特异性强、准确性好、成本低、操作简便和结果判断客观优点,并配合全自动化学发光免疫分析仪实现全自动使用,具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及免疫学检测
,具体涉及一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法
技术介绍
Sm是一位病人名字的缩写,在这位诊断为红斑狼疮的病人血清中,首次找到了这种抗体,因此命名。以后大量的报道证实在红斑狼疮病人血清中,存在此种抗体,属于一类抗核抗体。Sm系统中的主要蛋白质抗原为B、B'、D、E蛋白,分子量11~29kD,此外还有A、A'、B"、C、F、G以及68kD、150kD等蛋白质。这些蛋白质与含鸟苷十分丰富的小核RNAs(snRNAs)即UsnRNAs形成复合物。目前在哺乳动物中发现至少有13种UsnRNAs,即U1~U13snRNAs。Sm抗原由U1、U2、U5、U4/U6与上述蛋白质构成小核核糖核蛋白(U1、U2、U5、U4/U6snRNP),它在异质性核RNA(hnRNA)向成熟信使RNA(mRNA)的转化中起重要作用。抗Sm抗体IgG是系统性红斑狼疮(SLE)的特异性抗体,与抗dsDNA、抗核小体、抗核糖体P蛋白抗体IgG一起可用于SLE的诊断。抗Sm抗体可在5%~40%的SLE患者中检出。系统性红斑狼疮(SLE)是一种发病率较高的慢性多系统疾病,伴有多种血清自身抗体,为典型的自身免疫性疾病。但到目前为止其确切病因和发病机制仍不清楚,这对SLE诊断、治疗和预防的进展造成了很大障碍。患者血清中自身抗体检测己成为SLE实验诊断的主要临床指标。近年来,已在病人血清中检出抗ENA抗体、抗ds-DNA抗体、ANA和抗心磷脂抗体等多种自身抗体。ENA可分为Sm、RNP、SSA、SSB、Rib和组蛋白等已知和未知成分共十几种,其中Sm、RNP和Rib三者与SLE关系密切。抗Sm抗体阳性被认为是SLE标记性抗体,对SLE诊断意义很大目前,使用磁微粒化学发光分析法在抗Sm抗体IgG免疫分析产品的应用仍未见。中国专利CN103105489A公开了检测自身免疫性疾病抗体的免疫印迹试剂盒及其制备方法,涉及一种检测多种自身免疫性疾病相关抗体的免疫印迹试剂盒,解决目前尚无用于多种自身免疫性疾病体检筛查的免疫印迹产品技术上的不足:在所述的硝酸纤维素膜或尼龙膜上含有:分别由dsDNA、Sm/RNP、CCP、SSA,SSB,GAD、ICA、IA-2A、TG,AMA-M2共10种中的至少两种天然或重组抗原包被而成的两条以上平行的检测线,1条高浓度质控带,1条中浓度质控带及1条低浓度质控带。该专利公开的是一种膜条免疫法,更能说明膜条免疫法存在的灵敏度较低、线性范围窄、重复性差和反应时间长的问题。
技术实现思路
为了克服现有技术中的缺陷,本专利技术提供一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒,其能够以较低的成本制备得到,且能够实现抗Sm抗体IgG准确和高精确地定量测定。本专利技术是通过如下技术方案来实现的:一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒,所述试剂盒包括:Anti-SmIgG校准品、Anti-SmIgG试剂1号、Anti-SmIgG试剂2号、Anti-SmIgG磁分离试剂、Anti-SmIgG质控品和清洗液。所述Anti-SmIgG校准品包括6个液体校准瓶,所述液体校准瓶内目标浓度分别为0、5、20、50、100、200RU/mL的抗Anti-Sm抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液;所述Anti-SmIgG试剂1号为1个含有5mL的生物素标记的Sm抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶;所述Anti-SmIgG试剂2号为1个含有15mL的碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶;所述Anti-SmIgG磁分离试剂为1个含有5mL的链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶;所述Anti-SmIgG质控品包括2个质控瓶,所述质控瓶内的浓度的范围分别为:16-24RU/mL和80-120RU/mL。所述试剂盒检测原理为将待测样品、所述Anti-SmIgG试剂1号混合温育,样品中的抗Sm抗体IgG与Sm抗原特异性结合,再加入所述Anti-SmIgG磁分离试剂,抗Sm抗体IgG与Sm抗原的免疫复合物被吸附到磁微粒表面,洗涤去除未结合的抗体和杂质,加入Anti-SmIgG试剂2号并混合温育。碱性磷酸酶标记(ALP)的羊抗人IgG抗体与已经结合在磁珠上的抗Sm抗体IgG特异性结合。洗涤去除未结合的抗体和杂质后加入化学发光底物,ALP催化底物发光,测定相对发光强度(RLU)。在一定范围内RLU与样品中抗Sm抗体IgG浓度呈正比,通过RLU就可以从标准曲线上计算出待测样品的抗Sm抗体IgG含量。本专利技术采取的又一技术方案是:一种抗Sm抗体IgG的磁微粒化学发光定量检测试剂盒的制备方法,所述试剂盒的制备方法包括以下步骤:步骤1.制备所述Anti-SmIgG校准品包括:Anti-SmIgG校准品稀释液配制步骤和Anti-SmIgG校准品配制步骤:所述Anti-SmIgG校准品稀释液的配制步骤包括:加800mL纯化水和11.2g的Tris到容器中,搅拌混合均匀,再加8.5g的氯化钠和2mL的Proclin300,搅拌至完全溶解,将pH值调为7.0-7.5,加40g的牛血清白蛋白到容器中,搅拌至完全溶解,再将pH值调为7.0-7.5,用纯化水定容至1L,使用0.2μm滤器过滤,将获得的所述校准品稀释液保存在2-8℃待用;所述Anti-SmIgG校准品的配制步骤包括:用上述Anti-SmIgG校准品稀释液将抗Sm抗体IgG分别配制为0、5、20、50、100、200RU/mL共6个浓度点;步骤2.制备所述Anti-SmIgG试剂1号包括:Anti-SmIgG试剂1号稀释液配制步骤和Anti-SmIgG试剂1号配制步骤:所述Anti-SmIgG试剂1号稀释液的配制步骤:加800mL纯化水、12.1g的Tris和5.8g的NaCl于1L容器中,搅拌至完全溶解,再加入2mL的Proclin300,搅拌至完全溶解,再加入5g的牛血清白蛋白,搅拌至完全溶解,将pH值调为7.0-7.5,用纯化水定容至1L,使用0.2μm滤器过滤,将获得的所述试剂1号稀释液保存在2-8℃待用;所述Anti-SmIgG试剂1号的配制步骤:用0.2mol/L的pH9.0碳酸盐缓冲液配制0.5mg/mL的生物素溶液,按照Sm抗原与生物素溶液质量比为10:1的比例在Sm抗原溶液中加入到上述0.5mg/mL的生物素溶液,混合均匀,室温静置18h,反应生成Sm抗原-生物素连本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒,所述试剂盒包括:Anti‑Sm IgG校准品、Anti‑Sm IgG试剂1号、Anti‑Sm IgG试剂2号、Anti‑Sm IgG磁分离试剂、Anti‑Sm IgG质控品和清洗液,其特征在于:所述Anti‑Sm IgG校准品包括6个液体校准瓶,所述液体校准瓶内目标浓度分别为0、5、20、50、100、200RU/mL的抗Anti‑Sm抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液;所述Anti‑Sm IgG试剂1号为1个含有5mL的生物素标记的Sm抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶;所述Anti‑Sm IgG试剂2号为1个含有15mL的碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶;所述Anti‑Sm IgG磁分离试剂为1个含有5mL的含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶;所述Anti‑Sm IgG质控品包括2个的质控瓶,所述质控瓶内的浓度的范围分别为:16‑24RU/mL和80‑120RU/mL。

【技术特征摘要】
1.一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒,所述试剂盒包括:Anti-Sm
IgG校准品、Anti-SmIgG试剂1号、Anti-SmIgG试剂2号、Anti-SmIgG磁分离试剂、Anti-Sm
IgG质控品和清洗液,其特征在于:
所述Anti-SmIgG校准品包括6个液体校准瓶,所述液体校准瓶内目标浓度分别为0、5、
20、50、100、200RU/mL的抗Anti-Sm抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液;
所述Anti-SmIgG试剂1号为1个含有5mL的生物素标记的Sm抗原和牛血清白蛋白的
Tris缓冲液的瓶;
所述Anti-SmIgG试剂2号为1个含有15mL的碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛
血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶;
所述Anti-SmIgG磁分离试剂为1个含有5mL的含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清
白蛋白的Tris缓冲液瓶;
所述Anti-SmIgG质控品包括2个的质控瓶,所述质控瓶内的浓度的范围分别为:
16-24RU/mL和80-120RU/mL。
2.一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒的制备方法,其特征在于,
所述的制备方法包括:
步骤1.制备所述Anti-SmIgG校准品包括:Anti-SmIgG校准品稀释液配制步骤和Anti-Sm
IgG校准品配制步骤:
所述Anti-SmIgG校准品稀释液的配制步骤包括:
加800mL纯化水和11.2g的Tris到容器中,搅拌混合均匀,再加8.5g的氯化钠和2mL
的Proclin300,搅拌至完全溶解,将pH值调为7.0-7.5,加40g的牛血清白蛋白到容器中,搅
拌至完全溶解,再将pH值调为7.0-7.5,用纯化水定容至1L,使用0.2μm滤器过滤,将获得
的所述校准品稀释液保存在2-8℃待用;
所述Anti-SmIgG校准品的配制步骤包括:
用上述Anti-SmIgG校准品稀释液将抗Sm抗体IgG分别配制为0、5、20、50、100、
200RU/mL共6个浓度点;
步骤2.制备所述Anti-SmIgG试剂1号包括:Anti-SmIgG试剂1号稀释液配制步骤和
Anti-SmIgG试剂1号配制步骤:
所述Anti-SmIgG试剂1号稀释液的配制步骤:
加800mL纯化水、12.1g的Tris和5.8g的NaCl于1L容器中,搅拌至完全溶解,再加入
2mL的Proclin300,搅拌至完全溶解,再加入5g的牛血清白蛋白,搅拌至完全溶解,将pH

\t值调为7.0-7.5,用纯化水定容至1L,使用0.2μm滤器过滤,将获得的所述试剂1号稀释液保
存在2-8℃待用;
所述Anti-SmIgG试剂1号的配制步骤:
用0.2mol/L的pH9.0碳酸盐缓冲液配制0.5mg/mL的生物素溶液,按照Sm抗原与生物
素溶液质量比为10:1的比例在Sm抗原溶液中加入到上述0.5mg/mL的生物素溶液,混合均
匀,室温静置18h,反应生成Sm抗原-生物素连接物的反应液,将得到的Sm抗原-生物素连
接物反应液通过G-25凝胶柱进行分离,除去未反应的生物素,得到Sm抗原-生物素连接物,
再用所述试剂1号稀释液将Sm抗原-生物素连接物稀释到0.1-0.3μg/mL,得到所述的试剂1
号;
步骤3.制备所述Anti-SmIgG试剂2号包括:Anti-SmIgG试剂2号稀释液配制步骤和
Anti-SmIgG试剂2号的配制步骤:
所述Anti-SmIgG试剂2号稀释液的配制步骤:
加800mL纯化水、6.06g的4-羟乙基哌嗪乙磺和8.5g的NaCl到容器中,搅拌至完全溶
解,再加入5g的牛血清白蛋白、0.1g的ZnCl2、0.2mL的Proclin300和0.1g的MgCl2,搅拌
至完全溶解,将pH值调为7.5-8.0,用纯化水定容至1L,使用0.2um滤器过滤,将获得的所
述试剂2号稀释液保存在2-8℃待用;
所述Anti-SmIgG试剂2号的配制步骤:
将1mg的羊抗人抗体和2-4μL的10mg/mL的偶联剂为2-亚胺四氢噻吩溶液,室温静置
20min,加入0.1mol/L的甘氨酸溶液10μL,室温静置5min,用G-25凝胶柱除盐,收集活化
后抗体,将活化后的抗体保存在2-8℃备用,取1.5mg的碱性磷酸酶,加入5mg/mL的4-(N-
马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶液10-20μL,室温静置30mi...

【专利技术属性】
技术研发人员:不公告发明人
申请(专利权)人:北京中航赛维生物科技有限公司
类型:发明
国别省市:北京;11

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