【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及免疫学检测
,具体涉及一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒及其制备方法和检测方法。
技术介绍
Sm是一位病人名字的缩写,在这位诊断为红斑狼疮的病人血清中,首次找到了这种抗体,因此命名。以后大量的报道证实在红斑狼疮病人血清中,存在此种抗体,属于一类抗核抗体。Sm系统中的主要蛋白质抗原为B、B'、D、E蛋白,分子量11~29kD,此外还有A、A'、B"、C、F、G以及68kD、150kD等蛋白质。这些蛋白质与含鸟苷十分丰富的小核RNAs(snRNAs)即UsnRNAs形成复合物。目前在哺乳动物中发现至少有13种UsnRNAs,即U1~U13snRNAs。Sm抗原由U1、U2、U5、U4/U6与上述蛋白质构成小核核糖核蛋白(U1、U2、U5、U4/U6snRNP),它在异质性核RNA(hnRNA)向成熟信使RNA(mRNA)的转化中起重要作用。抗Sm抗体IgG是系统性红斑狼疮(SLE)的特异性抗体,与抗dsDNA、抗核小体、抗核糖体P蛋白抗体IgG一起可用于SLE的诊断。抗Sm抗体可在5%~40%的SLE患者中检出。系统性红斑狼疮(SLE)是一种发病率较高的慢性多系统疾病,伴有多种血清自身抗体,为典型的自身免疫性疾病。但到目前为止其确切病因和发病机制仍不清楚,这对SLE诊断、治疗和预防的进展造成了很大障碍。患者血清中自身抗体检测己成为SLE实验诊断的主要临床指标。近年来,已在病人血清中检出 ...
【技术保护点】
一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒,所述试剂盒包括:Anti‑Sm IgG校准品、Anti‑Sm IgG试剂1号、Anti‑Sm IgG试剂2号、Anti‑Sm IgG磁分离试剂、Anti‑Sm IgG质控品和清洗液,其特征在于:所述Anti‑Sm IgG校准品包括6个液体校准瓶,所述液体校准瓶内目标浓度分别为0、5、20、50、100、200RU/mL的抗Anti‑Sm抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液;所述Anti‑Sm IgG试剂1号为1个含有5mL的生物素标记的Sm抗原和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶;所述Anti‑Sm IgG试剂2号为1个含有15mL的碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶;所述Anti‑Sm IgG磁分离试剂为1个含有5mL的含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清白蛋白的Tris缓冲液瓶;所述Anti‑Sm IgG质控品包括2个的质控瓶,所述质控瓶内的浓度的范围分别为:16‑24RU/mL和80‑120RU/mL。
【技术特征摘要】
1.一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒,所述试剂盒包括:Anti-Sm
IgG校准品、Anti-SmIgG试剂1号、Anti-SmIgG试剂2号、Anti-SmIgG磁分离试剂、Anti-Sm
IgG质控品和清洗液,其特征在于:
所述Anti-SmIgG校准品包括6个液体校准瓶,所述液体校准瓶内目标浓度分别为0、5、
20、50、100、200RU/mL的抗Anti-Sm抗体IgG和牛血清白蛋白的Tris缓冲液;
所述Anti-SmIgG试剂1号为1个含有5mL的生物素标记的Sm抗原和牛血清白蛋白的
Tris缓冲液的瓶;
所述Anti-SmIgG试剂2号为1个含有15mL的碱性磷酸酶标记的羊抗人多克隆抗体和牛
血清白蛋白的Tris缓冲液的瓶;
所述Anti-SmIgG磁分离试剂为1个含有5mL的含有链霉亲和素标记的磁微粒和牛血清
白蛋白的Tris缓冲液瓶;
所述Anti-SmIgG质控品包括2个的质控瓶,所述质控瓶内的浓度的范围分别为:
16-24RU/mL和80-120RU/mL。
2.一种使用磁微粒化学发光定量检测抗Sm抗体IgG的试剂盒的制备方法,其特征在于,
所述的制备方法包括:
步骤1.制备所述Anti-SmIgG校准品包括:Anti-SmIgG校准品稀释液配制步骤和Anti-Sm
IgG校准品配制步骤:
所述Anti-SmIgG校准品稀释液的配制步骤包括:
加800mL纯化水和11.2g的Tris到容器中,搅拌混合均匀,再加8.5g的氯化钠和2mL
的Proclin300,搅拌至完全溶解,将pH值调为7.0-7.5,加40g的牛血清白蛋白到容器中,搅
拌至完全溶解,再将pH值调为7.0-7.5,用纯化水定容至1L,使用0.2μm滤器过滤,将获得
的所述校准品稀释液保存在2-8℃待用;
所述Anti-SmIgG校准品的配制步骤包括:
用上述Anti-SmIgG校准品稀释液将抗Sm抗体IgG分别配制为0、5、20、50、100、
200RU/mL共6个浓度点;
步骤2.制备所述Anti-SmIgG试剂1号包括:Anti-SmIgG试剂1号稀释液配制步骤和
Anti-SmIgG试剂1号配制步骤:
所述Anti-SmIgG试剂1号稀释液的配制步骤:
加800mL纯化水、12.1g的Tris和5.8g的NaCl于1L容器中,搅拌至完全溶解,再加入
2mL的Proclin300,搅拌至完全溶解,再加入5g的牛血清白蛋白,搅拌至完全溶解,将pH
\t值调为7.0-7.5,用纯化水定容至1L,使用0.2μm滤器过滤,将获得的所述试剂1号稀释液保
存在2-8℃待用;
所述Anti-SmIgG试剂1号的配制步骤:
用0.2mol/L的pH9.0碳酸盐缓冲液配制0.5mg/mL的生物素溶液,按照Sm抗原与生物
素溶液质量比为10:1的比例在Sm抗原溶液中加入到上述0.5mg/mL的生物素溶液,混合均
匀,室温静置18h,反应生成Sm抗原-生物素连接物的反应液,将得到的Sm抗原-生物素连
接物反应液通过G-25凝胶柱进行分离,除去未反应的生物素,得到Sm抗原-生物素连接物,
再用所述试剂1号稀释液将Sm抗原-生物素连接物稀释到0.1-0.3μg/mL,得到所述的试剂1
号;
步骤3.制备所述Anti-SmIgG试剂2号包括:Anti-SmIgG试剂2号稀释液配制步骤和
Anti-SmIgG试剂2号的配制步骤:
所述Anti-SmIgG试剂2号稀释液的配制步骤:
加800mL纯化水、6.06g的4-羟乙基哌嗪乙磺和8.5g的NaCl到容器中,搅拌至完全溶
解,再加入5g的牛血清白蛋白、0.1g的ZnCl2、0.2mL的Proclin300和0.1g的MgCl2,搅拌
至完全溶解,将pH值调为7.5-8.0,用纯化水定容至1L,使用0.2um滤器过滤,将获得的所
述试剂2号稀释液保存在2-8℃待用;
所述Anti-SmIgG试剂2号的配制步骤:
将1mg的羊抗人抗体和2-4μL的10mg/mL的偶联剂为2-亚胺四氢噻吩溶液,室温静置
20min,加入0.1mol/L的甘氨酸溶液10μL,室温静置5min,用G-25凝胶柱除盐,收集活化
后抗体,将活化后的抗体保存在2-8℃备用,取1.5mg的碱性磷酸酶,加入5mg/mL的4-(N-
马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-羧酸琥珀酰亚胺酯溶液10-20μL,室温静置30mi...
【专利技术属性】
技术研发人员:不公告发明人,
申请(专利权)人:北京中航赛维生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:北京;11
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