抗菌肽的分级二次超滤纯化方法技术

本发明专利技术公开了抗菌肽的分级二次超滤纯化方法，该方法包括预处理、微滤、二次超滤和纳滤等步骤；所述的预处理是诱导抗菌肽的产生、收集含抗菌肽的液体、去除杂质及大分子物质、低温抑制蛋白酶；所述的二次超滤是分别采用高于和低于目标抗菌肽分子量的2种不同截留分子量超滤膜，截取目标抗菌肽。本发明专利技术的方法流程简单，耗时缩短，费用降低，可用于抗菌肽的工业化制备，本发明专利技术的抗菌肽纯化方法可最大限度保持抗菌肽的活性和纯度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗菌肽的纯化方法，具体涉及抗菌肽的分级二次超滤纯化方法。
技术介绍
无论宿主是低等动物还是高等动物，微生物都必须克服宿主的天然免疫或获得性免疫防御机制才能生存。在宿主天然免疫防御机制中，多种细胞产生的抗菌因子发挥重要作用。天然免疫的所有效应因子均为多肽或小分子量蛋白，其中抗菌肽(antibacterialpeptides，ABP)是天然免疫的主要效应分子，是动物机体具有天然免疫力的重要原因。1972年，Boman等发现果蝇(Drosophila)经诱导可产生有抗菌作用的蛋白。1981年，Steiner、Boman等在惜古比天蚕(Hyalophoracecropia)中分离并命名了第一个昆虫抗菌肽—cecropins(杀菌肽)。同年，Patterson-Delafield、Lehrer等从兔肺泡巨噬细胞中分离出另一种抗菌肽—defensins(防御素)。此后，在哺乳动物猪的小肠(1989)及无脊椎动物(1997)等生物中相继发现抗菌肽。目前在从细菌到高等动物(比如人)本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗菌肽的分级二次超滤纯化方法，其特征在于包括以下步骤：(1)预处理对于天然昆虫抗菌肽，预处理的步骤是：诱导昆虫产生抗菌肽，接着收集昆虫的血淋巴，沸水浴10‑30min，然后离心取上清，得到粗提抗菌肽；对于采用基因工程方法获得的各类抗菌肽，预处理的步骤是：①分泌表达的基因工程抗菌肽：取发酵液，离心取上清，得到粗提抗菌肽；②细胞内表达的基因工程抗菌肽：先裂解细胞，然后离心取上清，得到粗提抗菌肽；对于细菌类抗菌肽，预处理步骤为：从液体或固体培养基中收集活菌；裂解细胞，然后离心取上清，得到粗提抗菌肽；(2)微滤将步骤(1)得到的粗提抗菌肽用孔径为0.1‑1μm的微孔滤膜过滤，取过滤液；(3)超滤采用二...

【技术特征摘要】
1.抗菌肽的分级二次超滤纯化方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)预处理
对于天然昆虫抗菌肽，预处理的步骤是：诱导昆虫产生抗菌肽，接着收集
昆虫的血淋巴，沸水浴10-30min，然后离心取上清，得到粗提抗菌肽；
对于采用基因工程方法获得的各类抗菌肽，预处理的步骤是：①分泌表达
的基因工程抗菌肽：取发酵液，离心取上清，得到粗提抗菌肽；②细胞内表达
的基因工程抗菌肽：先裂解细胞，然后离心取上清，得到粗提抗菌肽；
对于细菌类抗菌肽，预处理步骤为：从液体或固体培养基中收集活菌；裂
解细胞，然后离心取上清，得到粗提抗菌肽；
(2)微滤
将步骤(1)得到的粗提抗菌肽用孔径为0.1-1μm的微孔滤膜过滤，取过滤
液；
(3)超滤
采用二次超滤：先采用孔径大于目标抗菌肽分子量的超滤膜对步骤(2)得
到的过滤液进行超滤，取滤过液，然后再采用孔径小于目标抗菌肽分子量的超
滤膜对滤过液进行超滤，取截留液，即为目标产物；或者是，先采用孔径小于
目标抗菌肽分子量的超滤膜对步骤(2)得到的过滤液进行超滤，取截留液，然
后再采用孔径大于目标抗菌肽分子量的超滤膜对截留液进行超滤，取滤过液，
即为目标产物；
可根据粗提抗菌肽中抗菌肽含量的高低、超滤膜的种类、生产规模的大小
等选择以上超滤操作中的一种；
(4)纳滤
将步骤(3)得到的目标产物过纳滤膜浓缩，得到纯化后的抗菌肽。
2.根据权利要求1所述的抗菌肽的分级二次超滤纯化方法，其特征在于：
步骤(1)所述的诱导昆虫产生抗菌肽，是采用温水浸泡法、超声波刺激法或注...

【专利技术属性】
技术研发人员：张卫民，
申请(专利权)人：张卫民，
类型：发明
国别省市：广东;44