本发明专利技术公开了一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，取新鲜海蜇或盐渍海蜇组织捣碎，匀浆机搅拌成糜，加入NaCl溶液搅拌提取数小时，离心取上清，上清液经过多级膜系统处理，得到目标糖蛋白浓缩液，加入乙醇配置成乙醇溶液，冷藏静置，离心得到沉淀，冷冻干燥沉淀，得到分子量约为26kD的糖蛋白粉末。经检测糖蛋白含量＞80.0%，糖含量＞15.6%，蛋白质含量＞65.9%。此糖蛋白具有明显的降压活性及抑菌活性，对体外ACE酶具有明显的抑制作用，并且能够有效抑制溶壁微球菌。本发明专利技术采用多级膜系统分离纯化活性糖蛋白，操作简单、绿色高效，易于实现规模化生产，产物活性高，提高了海蜇的生物利用率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种海蜇糖蛋白的制备方法，尤其是一种经过多级膜系统分离纯化的糖蛋白的方法。
技术介绍
海蜇，为海生肛肠动物，产于我国沿海各地。按产地分，有南蜇、东蜇、北蜇等品种，以福建、浙江所产最好。调查显示，21世纪头三年福建沿海海蜇年渔获量都在1000t以上。海蜇营养极为丰富，其体内含有较多的蛋白质及钙、磷、碘、铁等无机盐，素有“水产瑰宝”之美称。海蜇不仅可以食用，还是一味治病良药。《本草纲目》中所述，海蜇有清热解毒、化痰软坚、降压消肿等功效，对气管炎、哮喘、高血压、胃溃疡等症均有疗效。因此，海蜇作为一种医食同源的大型生物，其有着重要的经济和食用价值。大量文献资料报道，海蜇活性肽及活性糖蛋白的分离纯化方法，大都采用提取后醇沉、离心的方法，杂质较多，分子量分布广泛，因而存在提取过程繁琐，成本较高，分子量不明确等问题。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种工序简单，易于实现工业化生产的多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，可获得含量> 80.0%，分子量约为26kD，具有明显的抑制ACE酶活性及抑制溶壁微球菌的作用的海蜇糖蛋白。为实现上述目的，本专利技术的解决方案是: ，其步骤包括: (1)原料的处理:选取新鲜海蜇或者盐渍海蜇为原料，采用组织搅碎机绞碎并用搅拌机搅拌匀浆成糜； (2)提取:处理后的原料装入提取罐，加入0.3%-0.9%NaCl溶液搅拌提取，料液比W: V为1:1-1:5，温度控制25-75°C，搅拌提取、离心取上清； (3)分离纯化:上清液采用多级膜系统处理，除去大分子量及小分子量杂质，得到目标糖蛋白浓缩液； (4)干燥:对糖蛋白浓缩液进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。所述步骤2是搅拌提取2-7h，以4000-14000rpm的转速离心取上清。所述步骤4是采用喷雾干燥的方式对糖蛋白浓缩液进行干燥。所述步骤3进一步在糖蛋白浓缩液加入乙醇配置成乙醇溶液，冷藏静置，离心，得到分子量约为26kD的糖蛋白固体。所述步骤3是加入乙醇配置成50%_75%的乙醇溶液，4_15°C冷藏静置，以转速为8000-10000rpm 离心。所述步骤4是采用冷冻干燥的方式对糖蛋白糖蛋白固体进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。所述步骤3中多极膜系统包括顺次连接的膜过滤单元，每个膜过滤单元包括一个膜过滤器，沿物料过滤方向，膜过滤器的膜孔径逐级升高或降低；膜过滤器的入口端经栗连接有大物料罐，膜过滤器的出口端为取样口。采用上述方案后，本专利技术可绿色高效的分离纯化海蜇活性糖蛋白，可除去无活性的大分子及小分子杂质，提高了糖蛋白样品的生物活性，为开发高附加值的海蜇产品提供有效方法，为医药、功能性食品、化妆品等方面的应用提供了技术基础。本专利技术制备的海蜇糖蛋白具有明显的抑制ACE酶活性及抑制溶壁微球菌的作用。这种糖蛋白具有明显的降压及抑菌活性。本专利技术采用多级膜系统分离纯化，除去大分子及小分子杂质，锁定活性分子片段，提高了海蜇的生物利用活性，且测定了此片段物质为糖蛋白。并且多级膜系统操作方便、绿色环保、经济高效，利于实现工业化生产。【具体实施方式】下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的阐述。本专利技术揭示了，包含以下步骤: (1)原料的处理:选取新鲜海蜇或者盐渍海蜇为原料，采用组织搅碎机绞碎并用搅拌机搅拌匀浆成糜； (2)提取:处理后的海蜇糜原料装入提取罐，加入0.3%-0.9%NaCl溶液搅拌提取，料液比W:V为1:1-1:5，温度控制25-75°C，搅拌提取2_7h，4000-14000rmp离心取上清； (3)分离纯化:上清液采用多级膜系统处理，此多极膜系统包括顺次连接的膜过滤单元，每个膜过滤单元包括一个膜过滤器，沿物料过滤方向，膜过滤器的膜孔径逐级升高或降低；膜过滤器的入口端经栗连接有大物料罐，膜过滤器的出口端为取样口，经过去杂浓缩得到目标糖蛋白浓缩液，加入乙醇配置成75%乙醇溶液，4-15°C冷藏静置，8000-10000rpm离心10-20min，得到分子量约为26kD的糖蛋白固体； (4)干燥:采用冷冻干燥的方法对糖蛋白固体进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末；所述的冷冻干操作为常规操作，可在任意型号的冻干机中进行。当然，如果步骤3中不添加乙醇时，是采用喷雾干燥的方式对糖蛋白溶液进行干燥得到目标糖蛋白粉末。经检测糖蛋白粉末含量> 80.0%，糖含量> 15.6%，蛋白质含量> 65.9%，此糖蛋白具有明显的降压活性及抑菌活性，对体外ACE酶具有明显的抑制作用，以及能够有效抑制溶壁微球菌。本专利技术采用多级膜系统分离纯化活性糖蛋白，操作简单、绿色高效，易于实现规模化生产，产物活性高，提高了海蜇的生物利用率。实施例一: 称取新鲜海蜇绞碎液5kg，加入0.3% NaCl溶液10L，搅拌机再次绞碎匀浆至无明显颗粒感，装入50L反应釜中，再次加入0.3% NaCl溶液15L，控温35°C，搅拌提取4h，取出送入离心机中，1000rmp离心取上清液；上清液采用多级膜系统除杂浓缩，得到目标糖蛋白溶液，加入乙醇配置成75%的乙醇溶液，4-15°C冷藏静置，8000rpm离心lOmin，冷冻干燥得到分子量约为26kD的糖蛋白粉末。实施例二: 称取新鲜海蜇绞碎液5kg，加入0.5%的NaCl溶液10L，搅拌机再次绞碎匀浆成糜，装入50L反应釜中，再次加入0.5% NaCl溶液15L，控温35°C，搅拌提取4h，取出送入离心机中，1000rmp离心取上清液；上清液采用多级膜系统除杂浓缩，得到目标糖蛋白浓缩液，加入95%乙醇至乙醇含量达到75%，4-15°C冷藏静置2h，1000rmp离心取沉淀，采用冷冻干燥的方式干燥沉淀，得到分子量约为26kD的糖蛋白粉末。实施例三: 称取新鲜海蜇绞碎液5kg，加入0.5%的NaCl溶液10L，搅拌机再次绞碎匀浆至细度Imm以下，装入50L反应釜中，再次加入0.5% NaCl溶液15L，室温25°C搅拌提取7h，取出送入离心机中，1000rmp离心取上清液；上清液采用多级膜系统除杂浓缩，得到分子量约为26kD的糖蛋白溶液，采用喷雾干燥的方式得到目标糖蛋白粉末。实施例四: 盐渍海蜇脱盐后，称取匀浆液5kg，加入0.9% NaCl溶液30L，装入50L反应釜中，控温40°C，搅拌提取5h，取出送入离心机中，1000rmp离心取上清液；上清液采用多级膜系统除杂浓缩，得到分子量约为26KD的糖蛋白浓缩液，加入乙醇至乙醇含量达到85%，4-15°C冷藏静置2h，1000rmp离心取沉淀，采用冷冻干燥的方式干燥沉淀，得到分子量约为26kD的糖蛋白O以上所述，仅是本专利技术实施例而已，并非对本专利技术的技术范围作任何限制，故凡是依据本专利技术的技术实质对以上实施例所作的任何细微修改、等同变化与修饰，均仍属于本专利技术技术方案的范围内。【主权项】1.，其包括以下步骤: (1)原料的处理:选取新鲜海蜇或者盐渍海蜇为原料，采用组织搅碎机绞碎并用搅拌机搅拌匀浆成糜； (2)提取:处理后的原料装入提取罐，加入0.3%-0.9%NaCl溶液搅拌提取，料液比W: V为1:1-1:5，温度控制25-75°C，搅拌提取、离心取上清； (3)分离纯化:上清液采用多级膜系统处理，除去大分子量及小分子量杂质本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种多级膜分离技术制备海蜇活性糖蛋白的方法，其包括以下步骤：（1）原料的处理：选取新鲜海蜇或者盐渍海蜇为原料，采用组织搅碎机绞碎并用搅拌机搅拌匀浆成糜；（2）提取：处理后的原料装入提取罐，加入0.3%‑0.9%NaCl溶液搅拌提取，料液比W:V 为1:1‑1:5，温度控制25‑75℃，搅拌提取、离心取上清；（3）分离纯化：上清液采用多级膜系统处理，除去大分子量及小分子量杂质，得到目标糖蛋白浓缩液；（4）干燥：对糖蛋白浓缩液进行干燥，制得海蜇活性糖蛋白粉末。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：黄文文，易瑞灶，洪碧红，孙继鹏，
申请(专利权)人：国家海洋局第三海洋研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35
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