本发明专利技术涉及生物技术领域，特别涉及一种RNA及其用途、包含该RNA的组合物、重组表达载体和宿主细胞。该RNA能有效抑制Hsa-miR-222的表达水平，增强TRAIL对肿瘤的杀伤活性。本发明专利技术提供的重组病毒是有生物学活性的，有希望成为肿瘤基因治疗的候选病毒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，特别涉及一种RNA及其用途、包含该RNA的组合物、重 组表达载体和宿主细胞。
技术介绍
肿瘤是威胁人类健康的头号杀手之一，并且目前并没有十分有效的手段来治疗肿 瘤。传统的治疗方法，如化疗、放疗、手术和靶向药物，尽管最初能成功控制住肿瘤，但往 往又会反过来诱导宿主细胞产生一系列其他的行为，进而最终导致肿瘤的复发、扩散和转 移。基因治疗由于其针对性强、靶向性好、有效和基本无毒副作用等优点，这些年正在越来 越受到人们的青睐和关注。TRAIL(tumor necrosis factor-related apoptosis inducing ligand)属于肿瘤坏死因子（TNF)家族成员，因其可以选择性地杀死肿瘤细胞，但对绝大多 数正常组织没有毒性而成为癌症基因治疗的研究热点之一。研究表明静脉多次注射重组可 溶性TRAIL可诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤的生长和形成，延长实验动物的生存时间的同 时却不引起可监测到的毒性发生。尽管它可以诱导多种肿瘤细胞凋亡，但不同的肿瘤细胞 对TRAIL的敏感性不同，因此增强抗性细胞对TRAIL的敏感性具有良好的临床应用前景。 目前研究表明，TRAIL抗性的机制在不同细胞中是不同的，有诸如假受体占位、细 胞内部抗凋亡分子的高表达等假说，但是有些假说验证困难，且目前并没有十分有效的方 法来改善TRAIL抗性问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供一种RNA及其用途、包含该RNA的组合物、重组表达载体和 宿主细胞。该RNA能有效抑制miR-222的表达水平，增强TRAIL对A549的杀伤活性。本发 明提供的重组病毒是有生物学活性的，有希望成为肿瘤基因治疗的候选病毒。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案： 本专利技术提供了一种RNA，其特征在于，其具有： ( I )、如SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列；或 ( II )、如SEQ ID No. 1所示的核苷酸序列的互补序列；或 (III)、与（I )或（II )的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性 而与（I )或（II )的核苷酸序列不同的序列；或 (IV)、与（I )或（II )或（III)所述序列至少有70%同源性的序列。 本专利技术还提供了所述RNA用于抑制Hsa-miR-222的用途。 本专利技术还提供了一种组合物，包括TRAIL95 281和所述的RNA。 本专利技术还提供了所述组合物的制备方法： 步骤1 :将编码TRAIL95 281与所述的RNA的核苷酸序列连接到载体中，构建表达载 体； 步骤2:将所述表达载体转化宿主细胞，表达，收集表达产物，即得。 本专利技术还提供了一种重组表达载体，包括： (1)编码trail95281的核苷酸序列；和/或 (2)编码本专利技术所述RNA的核苷酸序列。 在本专利技术的一些具体实施方案中，所述重组表达载体的构建方法，将编码 TRAIL 95 281与所述RNA的核苷酸序列连接到载体中，构建表达载体。 在本专利技术的一些具体实施方案中，所述重组表达载体的构建方法中的载体为质粒 或病毒。 在本专利技术的一些具体实施方案中，所述重组表达载体的构建方法中病毒为腺相关 病毒。 本专利技术还提供了一种宿主细胞，包括所述的重组表达载体。所述重组表达载体的结构为 pAM-CAG-pL-INS-TRAIL95 2S1-polyA-U6-miR-222-TuD -WPRE-BGH polyA 的 AAV 重组表达载体，简称 AAV-TRAIL-miR-222-TuD。所述重组表达载体包括：pAM(the abbreviation of the plasmid of anti-ampcilin construction)、 ITR(adeno_associated virus 2 inverted terminal repeat sequence)、CAG(cytomegalovirus immediated-early enhancer/chicken 0 -actin hybrid)n INS(human Insulin)secretion signal peptide、pL (poly-linker)、 TRAIL95 2S1 (编码 TRAIL 第 95 至 281 位氨基酸）、polyA(多聚腺苷酸）、U6、miR-222-TuD、 WPRE(Woodchuck Heptitis Virus Posttranscriptional Regulatory Element)、BGH(Bos taurus growth hormone)、polyA (多聚腺苷酉爱）和 ITR(adeno_associated virus 2 inverted terminal repeat sequence)〇其中，ITR sequence (Patent TO0220748)的序列如 SEQ ID No. 5 所示；CAG sequence 的序列如 SEQ ID No. 6 所不；INS secretion signal peptide sequence (Genbank accession no. NM 000207)的序列如 SEQ ID No.7 所不；WPRE sepuence(Genbank accession no. J04f514)的序列如 SEQ ID No. 8 所不；BGH(Bos taurus growth hormone) pA sequence 的序列如 SEQ ID No.9 所不；TRAIL95 281 amino acid sequence (Patent ZL03138357. 2)的序列如 SEQ ID No. 10 所示。 在本专利技术的一些具体实施方案中，所述宿主细胞为细胞株，所述细胞株选自HeLa 细胞、A549 细胞、Bel-7402 细胞、CNE-2Z 细胞、EC109 细胞、MGC-803 细胞、SW1990 细胞、 DU145细胞、U251细胞、A875细胞、HCT116细胞、MCF7细胞或SK-0V-3细胞。 本专利技术还提供了所述组合物、所述重组表达载体、所述宿主细胞在制备治疗肿瘤 的药物中的应用。 在本专利技术的一些具体实施方案中，所述肿瘤为原发性、继发性或转移性的肿瘤。 在本专利技术的一些具体实施方案中，所述肿瘤包括肺癌、肝癌、鼻咽癌、食管癌、结直 肠癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、神经胶质瘤、黑色素瘤、乳腺癌、宫颈癌或卵巢癌。 本专利技术的实验证明，在HeLa细胞、A549细胞、Bel-7402细胞、CNE-2Z细胞、EC109 细胞、MGC-803 细胞、SW1990 细胞、DU145 细胞、U251 细胞、A875 细胞、HCT116 细胞、MCF7 细胞、SK-0V-3细胞中转染了 Has-miR-222的mimics以后能增强细胞对TRAIL的抗性，而 转染了 Has-miR-222的inhibitor以后能增强细胞对TRAIL的敏感性（图1)。人工设计 的miR-222特异性抑制剂TuD (图2A)，并在原有pAM/CAG-TRAIL载体基础上加入polyA以 终止II类启动子CAG，然后插入一个新的III类启动子U6来表达mi本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种RNA，其特征在于，其具有：(Ⅰ)、如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列；或(Ⅱ)、如SEQ ID No.1所示的核苷酸序列的互补序列；或(Ⅲ)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(Ⅰ)或(Ⅱ)的核苷酸序列不同的序列；或(Ⅳ)、与(Ⅰ)或(Ⅱ)或(Ⅲ)所述序列至少有70％同源性的序列。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：马思思，史娟，
申请(专利权)人：中国医学科学院基础医学研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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