全程C-反应蛋白免疫层析定量检测试纸条制造技术

本实用新型专利技术公开了一种全程C-反应蛋白免疫层析定量检测试纸条，包括底板、样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素和吸水垫；所述试纸条由样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素、吸水垫依次搭接粘贴在底板上构成。所述荧光标记物结合垫含有链霉亲和素标记荧光蛋白和生物素标记的全程C-反应蛋白单克隆抗体；所述硝酸纤维膜上有检测线和质控线，检测线被全程C-反应蛋白单克隆抗体，其与上述生物素标记的全程C-反应蛋白单克隆抗体具有不同的识别表位。本实用新型专利技术与目前常见的检测全程C-反应蛋白的方法相比(如：化学发光法/免疫增强比浊法/胶体金法)，不仅大大缩短了检测时间，同时还提高了检测灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
全程C-反应蛋白免疫层析定量检测试纸条
本技术属于免疫检测领域，具体涉及一种高灵敏度全程C-反应蛋白免疫层析定量检测试纸条。
技术介绍
人类C反应蛋白(CRP)是在感染和组织损伤时血浆浓度快速，急剧升高的主要的急性期蛋白。C-反应蛋白可以激活补体和加强吞噬细胞的吞噬而起调理作用，从而清除入侵机体的病原微生物和损伤，坏死，凋亡的组织细胞，在机体的天然免疫过程中发挥重要的保护作用。关于C-反应蛋白的研宄已经有70多年的历史，传统观点认为C-反应蛋白是一种非特异的炎症标志物，但近十年的研宄揭示了 CRP直接参与了炎症与动脉粥样硬化等心血管疾病，并且是心血管疾病最强有力的预示因子与危险因子。 C-反应蛋白的检测在八十年代以前作为炎症和组织损伤的非特异性标志物大量应用于临床。但由于过去C-反应蛋白的检测方法较为落后，假阳性和假阴性很高，影响了它在临床上的价值，而逐渐被临床所忽视。近年来，由于检测技术的更新，测定C-反应蛋白的快速、简便和可靠的方法已迅速建立，使C-反应蛋白在临床应用领域大大增加。 目前检测C-反应蛋白的常用方法有: I单向免疫扩散法(简称单扩法) 单扩法是一种经典的抗原抗体沉淀试验，其基本原理是在琼脂胶中混入一定量的抗体，使待测抗原溶液从局部向琼脂内自由扩散，在沉淀区域内形成可见的沉淀环，沉淀环直径或面积的大小与抗原量相关。单扩法作为简易抗原定量的方法有特异性高，重复性好，操作简单，价格低廉，不需要特殊仪器检测等优点。因而，在一些中小型医院应用得较多。但此法最大的缺点是在抗原过量时，反应体系不出现沉淀，CRP浓度过高时，会出现较高的假阴性。因此，用单向免疫扩散法检测CRP未出现沉淀环时，必须稀释标本后复检，以避免漏诊。此外，由于该法的敏感性较差，制约了其临床上的广泛应用。 2胶乳凝集法 胶乳凝集法是临床较常用的血清学方法，属于间接的凝集试验。胶乳试剂用纯化的抗人CRP抗体致敏，能和病人血清中CRP发生特异性反应，数分钟内呈现清晰的凝集颗粒，出现凝集者为阳性，未出现凝集者为阴性。此方法操作简单、快速，敏感性、特异性较高。但易受补体、类风湿因子(RF)等因素的干扰，产生假阳性结果。因此，为了提高结果的准确性，检测时应对待测标本进行预处理，以去除干扰因素。 3速率散射比浊法 速率散射比浊法是Sternberg 1977年创建的微量免疫沉淀法，是以测定溶液对光的散射程度来判断样品中抗原的含量。一定波长的光沿水平轴照射，碰到小颗粒的免疫复合物可导致光散射，散射强度与抗原抗体免疫复合物的含量成正比。 此法是一种抗原抗体结合反应的动态测定法，可快速、准确地测量样品中抗原的含量，并且可在多种自动化检测仪上测定结果。目前应用较广泛的自动化仪器是Backman-Coulter公司生产的全自动蛋白分析仪。速率散射比池法在临床上已作为CRP常规检测手段。有研宄显示:速率散射比浊法在检测时间、操作方法、结果精确度、重复性、灵敏度方面均优于单扩法。在灵敏度、准确度上与胶乳凝集法相比也具有显著性差异(P< 0.05)，明显高于胶乳凝集法。 4免疫透射比浊法 免疫透射比浊法是实验室常用检测CRP的方法，目前许多厂家也都用此法，英科新创(厦门)科技有限公司的CRP就是该法。免疫透射比浊法也是一种微量的免疫沉淀测定法。其与速率散射比浊法不同的是以测定透过溶液的光量来反映待测抗原的含量。当光线透过反应体系时，溶液中的抗原抗体免疫复合物可对光线加以吸收和反射，使透射光减少。免疫复合物越多，吸收的光线越多，透射光越少，这种变化可用吸光度表示。若抗体量固定，所测吸光度与免疫复合物的量成正比，也与待测抗原的量成正比。以一系列已知浓度的抗原标准品作对照，即可以测出受检物含量。 5胶乳增强免疫透射比浊法 在上述的比浊法中，检测CRP的敏感性方面仍不够理想。这就需要建立更敏感、更精确、在血清CRP浓度较低的情况下仍具有较高准确度的检测CRP方法。于是人们对检测方法进行了改进和更新，创立了胶乳增强免疫透射比浊法。 胶乳增强免疫透射比浊法基本原理是首先将抗体吸附在一种胶乳颗粒上，当遇到相应的抗原时，抗原抗体结合而出现胶乳凝集。单个胶乳颗粒的大小在入射光波长之内，光线可透过。当两个以上胶乳颗粒凝集时，可阻碍光线透过，使透射光减少，其减少程度与胶乳凝集的程度成正比，亦与抗原量成正比。此方法是测定高敏C-反应蛋白(Hs-CRP) —种新型的高敏检测方法，具有快速、方便、准确等优点。 6免疫标记技术 免疫标记技术用于CRP测定的免疫标记方法有放射免疫法、酶免疫法、金标免疫法、荧光标记免疫法等。由于放射免疫法存在放射性同位素半衰期短，放射性污染不易保存，稳定性差等缺点，使用中有诸多不便，尤其是酶免疫法的广泛应用，使该方法现在临床上已很少采用。目前，临床应用较多方法是以酶联免疫吸附试验(ELISA)为主的酶免疫标记技术。该方法是将抗原抗体反应的特异性与酶对底物高效催化作用结合起来，根据酶作用底物后颜色变化，通过酶标仪对检测样品进行定量测定和分析，并用标准曲线对照计算出CRP含量。ELISA法具有高度的敏感性、特异性，而且它的试剂比较稳定，无放射性污染。尤其是商品试剂盒和自动化酶标仪的应用，使其成为适用于各级检验部门的检测手段。同时，也是测定患者血清Hs-CRP常用的方法之一。 用金标法及荧光标记免疫层析法进行定量CRP的检测，在检测灵敏度及测试快捷性方面得到比较好的统一。优点是检测标本用量少，检测快速，可与血常规一起检测，特异性高，在临床检测中也显示出良好的应用前景。目前国产产品以及韩国、加拿大进口产品已经在国内有了一定的应用。 生物素-亲和素系统(b1tinavidin system，BAS)，是一种新型生物反应放大系统。随着各种生物素衍生物的问世，BAS很快被广泛应用于医学各领域。将该系统应用于免疫组化，酶联免疫，荧光免疫，放射免疫等检测技术中，可显著地提高以上技术方法的敏感性、特异性和稳定性，使方法更简便，有助于临床快速诊断，并利于进行大规模流行病学调查，成为研宄免疫反应的有力工具。由于BAS检测系统经济快速，又无放射物质污染，不需复杂仪器，充分显示了此系统的巨大潜力和应用的可能性。 生物素-亲和素系统检测原理:BAS是在常规ELISA原理的基础上，结合生物素与亲和素间的高度放大作用，而建立的一种检测系统。亲和素是卵白蛋白中提取的一种碱性糖蛋白，分子量为68kDa，由4个亚单位组成，对生物素有非常高的亲和力(结合常数高达1015M-1)。生物素很易与蛋白质(如抗体等)以共价键结合。这样，结合了酶的亲和素分子与结合有特异性抗体的生物素分子产生反应，既起到了多级放大作用，又由于酶在遇到相应底物时的催化作用而呈色，达到检测未知抗原(或抗体)分子的目的。链霉亲和素是与亲和素有相似生物学特性的一种蛋白质，链霉亲和素与亲和素一样分子中每条肽链都能结合一个生物素，因几乎所有用于标记的物质均可以同亲和素或链霉亲合素结合。利用生物素-亲和素系统研制降钙素原检测试快速诊断试剂尚无报道。
技术实现思路
本技术的目的，在于提供一种全程C-反应蛋白免疫层析定量检测试纸条，其基于双抗体夹本文档来自技高网...

【技术保护点】
全程C‑反应蛋白免疫层析定量检测试纸条，其特征在于：其包括底板，所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区，所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上，所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的全程C‑反应蛋白单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定有识别全程C‑反应蛋白另外一个表位的单克隆抗体构成的检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。

【技术特征摘要】
1.全程C-反应蛋白免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:其包括底板，所述底板上依次设有样品垫、荧光标记物结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述吸水垫和荧光标记物结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端后在硝酸纤维素膜的表面形成检测区，所述样品垫交叠压在荧光标记物结合垫上，所述荧光标记物结合垫上固定有生物素标记的全程C-反应蛋白单克隆抗体和链霉亲和素标记的荧光蛋白；所述检测区内的硝酸纤维素膜上固定有识别全程C-反应蛋白另外一个表位的单克隆抗体构成的检测线和羊抗鼠IgG多克隆抗体构成的质控线。2.根据权利要求1所述的全程C-反应蛋白免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:所述荧光标记物结合垫包括层叠的第一荧光标记物结合垫和第二荧光标记物结合垫，所述第一荧光标记物结合垫的一端垫在样品垫的下方，所述第二荧光标记物结合垫交叠压在硝酸纤维素膜的一端。3.根据权利要求2所述的全程C-反应蛋白免疫层析定量检测试纸条，其特征在于:所述第一荧光标记物结合垫中插入样品垫下方的一端设有定位条，所述样品垫的下端面设有能...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈泳钗，姚立新，王小明，夏坤，佟顺刚，
申请(专利权)人：广州天宝颂原生物科技开发有限公司，
类型：新型
国别省市：广东;44