【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种用于敲除L‑乳酸脱氢酶1基因的载体的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:(1)从NCBI中找到L‑乳酸脱氢酶1编码基因的位置及其上下游800~1000bp的DNA序列,然后确定保守序列设计引物并引入重叠片段,提取植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DMDL 9010的DNA,并以此为模板,扩增得到不含L‑乳酸脱氢酶编码基因的该基因的上下游DNA片段,利用高保真酶进行重叠延伸PCR连接该基因的上下游DNA片段;所述植物乳杆菌DMDL的保藏编号为CGMCC NO.5172;(2)将上述连接片段的3′端进行加A反应后与pMD18‑T载体进行连接反应并转化到大肠杆菌DH 5α感受态细胞中,最后得到亚克隆载体,然后大量制备亚克隆载体,进行XhoⅠ和PstⅠ双酶切,在重叠片段上引入粘性末端;(3)将经过XhoⅠ和PstⅠ双酶切处理的pG+host9质粒与步骤(2)制得的重叠片段进行连接反应,然后将此连接产物化转到大肠杆菌MC1061或TG1中,于红霉素抗性平板上进筛选阳性转化菌,得到重组载体。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员:刘冬梅,费永涛,黄娟,陈思敏,黄智斌,
申请(专利权)人:华南理工大学,
类型:发明
国别省市:广东;44
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