【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种减毒沙门菌VNP20009在基因表达中的应用，具体涉及一种以减毒沙门菌VNP20009为载体来传递效应基因的方法。
技术介绍
沙门菌是一种侵袭性胞内菌，它与宿主之间的反应通过III型分泌机制介导，这种机制使细菌的效应蛋白能直接转移到真核细胞发挥作用，使其可以传递表达效应基因并同时表达多种治疗性蛋白。巨噬细胞是沙门菌的天然靶点，不仅在局部形成沙门菌的细胞靶点，而且建立细胞储存库使细菌系统性扩散。沙门菌侵入淋巴系统，通过血液循环定居在脾脏和肝脏等器官。VNP20009是一种将野生型鼠沙门菌通过基因修饰构建的基因工程沙门菌，部分删除了编码脂质体A的末端序列msbB(明显减低诱导血液中单核细胞产生TNF-α的能力)，并敲除purl基因(由于pur系列基因编码嘌呤合成途径中的一系列酶，purl基因缺失将影响嘌呤合成，进而影响DNA的合成从而使细菌毒性降低)，两种突变使细菌毒力降低10000倍，同时没有影响沙门菌的肿瘤正常组织比(>1000:1)，并保持了它们在原发灶及转移灶内生长能力。目前蛋白表达主要采用原核表达和真核表达系统，但有些蛋白...
【技术保护点】
一种减毒沙门菌VNP20009在基因表达中的应用，其特征是：A、沙门氏菌感受态制备：挑取沙门氏菌VNP20009单菌落接种至3 mL无抗性LB培养中，37°C 200 rpm摇床培养过夜(约16 h)，次日将400 uL活化菌液加到40 mL无抗性LB液体培养基中，37°C 200 rpm摇床培养100 min至OD 600到达0．4左右将培养物冰上放置0．5 h，同时离心机预冷，5000 rpm离心5 min弃上清，沉淀用10％甘油10 mL悬浮细胞，冰上放置10 min重复离心，上述步骤再重复一次，最后一次离心的沉淀用400 uL 10％甘油重新悬浮细胞，感受态置冰上备...
【技术特征摘要】
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