基于荧光定量PCR熔解曲线法的DHAV分型检测法制造技术

本发明专利技术公开一种基于荧光定量PCR熔解曲线法的DHAV分型检测法：病毒RNA的提取和cDNA合成；阳性标准模板的制备；基于荧光定量PCR熔解曲线法的甲型鸭肝炎病毒分型检测方法的建立；方法验证：特异性试验、敏感性试验、重复性试验。本发明专利技术中仅需加一对引物，单管检测A、C基因型，方法简单易行，耗时少；整个扩增和检测过程均为闭管操作，避免了PCR扩增产物的污染，减少了假阳性结果；扩增片段短，采用较高的退火温度，保证了扩增的特异性。本发明专利技术建立了一种快速检测分型鸭甲肝病毒的方法，给该病的正确诊断和防治提供了极大的便利，为农业生产带来经济效益。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于荧光定量PCR熔解曲线法的DHAV(甲型鸭肝炎病毒）分型检 测法。
技术介绍
甲型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis A virus，DHAV)是一种引起雏鸭病毒性肝 炎的主要病原。其主要以1~21日龄的雏鸭发生急性坏死性肝炎为病理特征，发病迅速 且死亡率高并具有高度的传染性，目前已呈世界性分布。DHAV根据遗传进化距离可分为 DHAV-A，DHAV-B，DHAV-C共三种基因型，其中我国的优势毒株主要是DHAV-A和DHAV-C。由 于针对的DHAV特异性抗体很难通过产蛋鸭传递给雏鸭，故当前主要依靠对雏鸭注射弱毒 疫苗或特异性的卵黄抗体来防治该病的发生。然而大量实验证实，不同基因型的DHAV之间 缺乏交叉保护能力，即使用针对DHAV-A的弱毒疫苗或卵黄抗体对防治DHAV-C的感染不起 作用，反之亦然。由于两种基因型的病毒感染雏鸭后所表现出的临床症状和病理变化非常 相似，仅凭眼观病理变化无法辨别；且当前DHAV-A和DHAV-C的共流行现象日趋严重，给该 病的正确诊断和防治带来了极大的困难。故迫切需要建立一种可行的方法，能快速检测患 病雏鸭所本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于荧光定量PCR熔解曲线法的甲型鸭肝炎病毒分型检测用引物，其特征在于，所述引物如下：DHAV‑F:5'GTTGTGAAACGGATTACCGGTAGT 3'，DHAV‑R:5'ACTCGACCAGCCGCGACCCTAT 3'。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘光清，孟春春，黄云秀，李传峰，陈宗艳，
申请(专利权)人：中国农业科学院上海兽医研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31