一种高效CIK细胞培养方法技术

本发明专利技术涉及细胞生物学领域，具体地说是通过单核细胞分离、接种培养瓶、接种培养袋和收取细胞等四个步奏对CIK细胞进行高效培养，在培养过程中添加IL-1、IL-2、IL-24、IFN-γ、CD3 AK、EGF等诱导因子，诱导外周血单个核细胞成为CIK细胞，并使其在体外高效扩增的高效CIK细胞培养方法。培养10天可以使初始细胞数量为2×                                                的外周血单个核细胞细胞诱导后扩增为1×的CIK细胞，可有效提高CIK细胞体外扩增培养速度和最终获取的细胞数量，除此之外，采用本方法培养出来的CIK细胞可以使子宫颈癌Hela细胞及骨髓瘤Sp20细胞最高凋亡率达到64.2%和54.3%。

【技术实现步骤摘要】
一种高效CIK细胞培养方法
本专利技术属于细胞生物学领域，具体地说是一种通过添加IL-1、IL-2、IFN-γ、CD3AK、EGF作为诱导因子，有效提高CIK细胞体外扩增培养速度和最终获取的细胞数量、所培育CIK细胞可大幅增加子宫颈癌Hela细胞及骨髓瘤Sp20细胞最高凋亡率的高效CIK细胞培养方法。
技术介绍
随着细胞生物学技术、临床医疗技术的研究深入和发展，进一步推动了细胞培养技术迅速发展，然而对自体免疫细胞的培养研究有限，从而限制了免疫细胞治疗各类疾病的技术发展和应用。细胞因子诱导的杀伤细胞（Cytokine-InducedKiller，CIK）是一种新型的免疫活性细胞，CIK细胞增殖能力及细胞毒作用强，具有一定的免疫特性。作为一种新型的、高效的、非MHC限制性的免疫活性细胞得到了广泛应用。CIK细胞的实质和来源是指CD3+、CD56+的淋巴细胞，存在于正常人体中，但含量较少，约占5%以下｡目前国内外用于临床的CIK细胞制品，就是在体外倍增出的以这些细胞为主的细胞群｡随着生物医学技术的发展，CIK细胞已在临床大量应用，疗效也得到一定程度的认可，为进一步提高CIK细胞的增殖能力及本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效CIK细胞培养方法，其特征在于培养步骤为：第一步：单核细胞分离将定量血样装到离心管中，对血样进行离心，弃去底部剩余；将获得的血细胞用生理盐水稀释，缓慢加入到装有血样容积20%‑30%的淋巴细胞分离液的离心管中，进行离心后，吸弃上清；缓慢吸取白膜层细胞至新的离心管中，向离心管内加入生理盐水，混合均匀，得到白细胞稀释液，最终获得的白细胞稀释液为血样容积的70%‑80%，将白细胞稀释液进行离心处理，吸弃上清；用血样容积5%‑10%的生理盐水重悬，加入血样容积70%‑80%的生理盐水离心后，弃去上清后，得到细胞沉淀；第二步：接种培养瓶取血样容积5%‑10%的TCM‑199培养基重悬细胞沉淀，再...

【技术特征摘要】
1.一种高效CIK细胞培养方法，其特征在于培养步骤为：第一步：单核细胞分离将定量血样装到离心管中，对血样进行离心，弃去底部剩余；将获得的血细胞用生理盐水稀释，生理盐水稀释血细胞时，稀释比例为1:1，缓慢加入到装有血样容积20％-30％的淋巴细胞分离液的离心管中，进行离心后，吸弃上清；缓慢吸取白膜层细胞至新的离心管中，向离心管内加入生理盐水，混合均匀，得到白细胞稀释液，最终获得的白细胞稀释液为血样容积的70％-80％，将白细胞稀释液进行离心处理，吸弃上清；用血样容积5％-10％的生理盐水重悬，加入血样容积70％-80％的生理盐水离心后，弃去上清后，得到细胞沉淀；第二步：接种培养瓶取血样容积5％-10％的TCM-199培养基重悬细胞沉淀，再次添加血样容积25％-35％的TCM-199培养基，混匀后置于T175培养瓶中；用血样容积30％-60％的TCM-199培养基清洗离心管，清洗后，将洗涤液倒入T175培养瓶中；向T175培养瓶中分别加入HEPES-TL、IL-2、IL-24、IFN-γ后，将培养瓶放入CO2培养箱中培养；第2天，向培养瓶内添加IL-1、CD3AK、EGF；第4天，向培养瓶内添加...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘慧玉，李春雨，李鹏，高妍，刘法显，
申请(专利权)人：刘慧玉，
类型：发明
国别省市：山东;37