一种体外诱导扩增NK细胞的方法技术

本发明专利技术提供一种体外诱导扩增NK细胞的方法，包括向NK细胞培养液中添加三叶青提取物，所述的三叶青提取物的浓度为0.00625μg/ml~9.76μg/ml，所述的三叶青提取物为三叶青总提取物Th-t、水煮脱糖部位Th-w3、石油醚部位Th-p或水部位脱糖部位Th-w2；本方法可在体外培养条件下获得大量的、应用安全的、纯度较高的以及杀伤活性强的NK细胞，从而使得该细胞达到能够安全有效的应用于临床的质量指标，同时该方法操作简便，成本低，适用于大规模应用；利用本方法所获得的NK细胞，在细胞数量、纯度、杀伤活性、细胞因子分泌水平均有显著提高，利用本方法培养，细胞数量提高了几千倍。

【技术实现步骤摘要】
一种体外诱导扩增NK细胞的方法
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及利用三叶青提取物的一种体外诱导扩增NK细胞的方法。
技术介绍
近年来，肿瘤的生物治疗已经成为肿瘤治疗领域研究的热点。NK细胞是一类独立的淋巴细胞群，NK细胞主要通过细胞毒活性而显示生物学效应，可直接杀伤肿瘤细胞、病毒感染的细胞，胞内寄生菌等。NK细胞可以识别自身正常细胞和异常组织细胞，其仅杀伤异常细胞而对宿主正常组织细胞没有细胞毒作用。此外，NK细胞通过分泌多种细胞因子，在免疫调节和某些免疫细胞分化中发挥重要作用。NK细胞主要以组织相容性复合物(majorhistocompatibilitycomplex，MHC)非限制性方式识别肿瘤，通过颗粒酶B(granzymeB)和穿孔素(perforin)等途径杀伤肿瘤细胞，而T细胞表面的CD107aPb分子，与T细胞活化以后脱颗粒过程相关，其比值可以直接反应该效应细胞具有的特异性杀伤活性。同时，NK细胞还能与其它固有免疫细胞和适应性免疫细胞相互作用，协同发挥抗肿瘤作用。目前NK细胞已经成为肿瘤患者过继免疫治疗的重要效应细胞。由此可见，为满足生物学功能研究和临床过继细胞免疫治本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种体外诱导扩增NK细胞的方法，其特征在于包括向NK细胞培养液中添加三叶青提取物，所述的三叶青提取物的浓度为0.00625μg/ml～9.76μg/ml。

【技术特征摘要】
1.一种体外诱导扩增NK细胞的方法，其特征在于包括向NK细胞培养液中添加三叶青提取物，所述的三叶青提取物的浓度为0.00625μg/ml～9.76μg/ml；所述三叶青提取物为三叶青总提取物，其制备方法为取三叶青干燥药材，加5倍体积80％乙醇水溶液浸泡24h后，加热回流提取，共3次，每次40min，合并提取液，过滤，减压回收蒸干，得三叶青总提取物；或者，所述三叶青提取物为水煮脱糖部位Th-w3，其制备方法为：取三叶青干燥药材200g，加5倍体积80％乙醇水溶液浸泡24h后，加热回流提取，共3次，每次40min，合并提取液，除去提取液后的三叶青药材用水煮后减压回收蒸干，获得脱水物2.1克；或者，所述三叶青提取物为石油醚部位Th-p，取三叶青总提取物，加水混悬，采用10倍体积的水饱和石油醚进行萃取，得到石油醚部位TH-p；或者，所述三叶青提取物为Th-w2，其制备方法为：取三叶青干燥药材200g，加5倍体积80％乙醇水溶液浸泡24h后，加热回流提取，共3次，每次40min，合并提取液，过滤，减压回收蒸干，得总提取物TH-t21.6g，取此总提取，加水混悬，采用10倍体积的水饱和石油醚，进行萃取，得到石油醚部位TH-p0.15g，用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部位TH-a0.58g，用正丁醇萃取得到正丁醇部位TH-b2g，以及水部位TH-w，取水部位TH-w进行大孔吸附树脂色谱，先使用纯水进行洗脱，除去糖分，再使用10％、30％、60％、95％乙醇水溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘军权，陈锦阳，杨阳，
申请(专利权)人：杭州中德贝尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33