一种裸鼹鼠雪旺细胞培养方法技术

本发明专利技术涉及细胞生物学技术领域，特别涉及一种裸鼹鼠雪旺细胞的分离纯化和培养方法。本发明专利技术综合使用多种培养基从裸鼹鼠胎鼠脊髓DRG神经节中分离并纯化培养雪旺细胞，摸索出了适于变温的啮齿类哺乳动物裸鼹鼠雪旺细胞的合理培养方法。本发明专利技术方法能够简便、高效、经济的获得大量功能活性正常的裸鼹鼠雪旺细胞，低氧条件下的培养能够保证这种细胞在离体环境中依然能够保持在体状态下的生物学特性，从而便于直接在纯净的体外细胞培养模型中进一步研究裸鼹鼠雪旺细胞的特殊生理功能，从而为探索其中的生物学机制并应用于临床相关领域提供重要的理论依据。

【技术实现步骤摘要】
一种裸鼹鼠雪旺细胞培养方法
本专利技术涉及细胞生物学
，具体涉及一种细胞的分离纯化及培养方法，特别涉及一种裸鼹鼠雪旺细胞的分离纯化和培养方法。
技术介绍
雪旺细胞(Schwanncell)是脊髓的成髓鞘细胞，其包绕神经元轴突形成的髓鞘结构对神经元有营养、支持及保护作用，并且髓鞘的存在能够保证神经元之间信息传递的速率。未成熟的雪旺细胞可以受到微环境的刺激而再次启动分化。在脊髓横断损伤、肌肉萎缩性侧面硬化病等疾病中一般会伴随有髓鞘的损伤(BilliardsSS,HaynesRL,FolkerthRD,BorensteinNS,TrachtenbergFL,RowitchDH,LigonKL,VolpeJJ,KinneyHC.2008.Myelinabnormalitieswithoutoligodendrocytelossinperiventricularleukomalacia.BrainPathol18:153–163.)。裸鼹鼠是一种变温哺乳动物，在氧气浓度仅有6％左右的不通风洞穴中能够保持脑结构和功能的完整无损并进行正常的生命活动，尤其是耗氧量较高的已经形成髓鞘的雪旺细胞。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种裸鼹鼠雪旺细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：A、收集裸鼹鼠DRG混合神经细胞：分离胚胎期58‑65天的裸鼹鼠脊髓DRG神经节，将DRG神经节剪碎，加入组织消化液I混匀之后消化，再用组织消化液II消化；然后用混合神经细胞培养基终止消化，离心去除上清之后，在混合神经细胞培养基中将沉淀重悬并吹打成单细胞悬液；将单细胞悬液种于无菌且预先包被有基质层的培养板中；所述的组织消化液I为含有0.15％胶原酶和0.03mg/ml DNA酶I的混合液；所述的组织消化液II为含有0.25％胰酶和0.03mg/ml DNA酶I的混合液；所述的基质层为左旋多聚赖氨酸的基质层；B、裸鼹鼠DRG混合神经细胞的培养...

【技术特征摘要】
1.一种裸鼹鼠雪旺细胞培养方法，其特征在于，包括以下步骤：A、收集裸鼹鼠DRG混合神经细胞：分离胚胎期58-65天的裸鼹鼠脊髓DRG神经节，将DRG神经节剪碎，加入组织消化液I混匀之后消化，再用组织消化液II消化；然后用混合神经细胞培养基终止消化，离心去除上清之后，在混合神经细胞培养基中将沉淀重悬并吹打成单细胞悬液；将单细胞悬液种于无菌且预先包被有基质层的培养板中；所述的组织消化液I为含有0.15％胶原酶和0.03mg/mlDNA酶I的混合液；所述的组织消化液II为含有0.25％胰酶和0.03mg/mlDNA酶I的混合液；所述的基质层为左旋多聚赖氨酸的基质层；B、裸鼹鼠DRG混合神经细胞的培养：将步骤A得到的DRG混合神经细胞，用混合神经细胞培养基培养于三气培养箱中培养24小时后更换新鲜的混合神经细胞培养基，之后每3天换一次培养基；培养25天后换为雪旺细胞纯化培养基进行培养，每三天更新一次培养基；所述的混合神经细胞培养基为含有体积百分数为15％进口胎牛血清的低糖DMEM培养基；所述的雪旺细胞纯化培养基为含体积分数为2％B27的Neurobasal并添加质量体积分数为0.01mg/ml的PDGFa；所述的三气培养箱的参数设置为：温度控制在35±...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔淑芳，杨文静，孙伟，程继帅，林丽芳，丛薇，蔡丽萍，余琛琳，赵善民，徐晨，李周桐，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：上海,31