抑制静止素巯基氧化酶(QSOX1)的组合物及其用途制造技术

公开了抑制或阻止基膜中的层粘连蛋白装配的方法。所述方法包括使组织与抑制QSOX1活性或表达的试剂接触，从而抑制或阻止基膜中的层粘连蛋白装配。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抑制静止素巯基氧化酶（QS0X1)的组合物及其用途 专利
和背景 本专利技术，在其某些实施方案中，涉及QSOXl抑制剂，并且，更具体地但并非排他地涉及 其治疗层粘连蛋白相关疾病的用途。 静止素巯基氧化酶 I (Quiescin sulfhydryl oxidase 1，QS0X1)是一种酶，其使 用结合的黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD)辅因子以介导电子从底物蛋白质中的硫醇基对转移 至分子氧，产生过氧化氢作为副产物。QSOXl与在内质网（ER)的早期蛋白质折叠中起作用 的许多其他酶以及在线粒体膜间隙中介导蛋白质折叠和驻留的酶共享二硫化物形成的这 一基本催化活性。然而，QSOXl是已知主要定位于分泌途径中的ER的细胞器下游并且已知 经历从细胞的经调节分泌的仅有的二硫化物催化剂。QSOXl是多域蛋白，其经历一系列二巯 基化物/二硫化物交换步骤，以将电子从底物硫醇传递给其FAD辅因子。该酶的两个主要 的氧还活性结构域（一个与含蛋白硫醇的底物相互作用，另一个催化分子氧的还原）在反 应周期期间必须改变它们的相对取向。具体地讲，氨基-末端的氧还活性二半胱氨酸基序， 硫氧还蛋白-折叠（Trx)结构域（图1A-B)必须经充分地溶剂暴露，以接受来自底物蛋白 的电子。然后Trx结构域必须将自身相对于产生二硫化物的ERV-折叠（Erv)结构域的氧 还活性二半胱氨酸基序而遮蔽起来，以进一步传递电子（图1A-B)。来自哺乳动物和来自锥 虫寄生虫的一组QSOX晶体结构说明了 QSOX酶所表现出来的构象变化的性质和鉴定了允许 这类重排的柔性接头。 最初发现QSOXl是在乳汁和哺乳动物精囊分泌物中作为二硫键形成的催化剂 [Janolino V.G.和 SwaisgoodH-E. (1975) J. Biol. Chem.烈》，2532-2538]。随后经 由将其在培养的肺成纤维细胞中诱导而鉴定QSOXl转录物，当所述细胞达到汇合并进入静 息状态时[Coppock D.L.等人（1993) Cell Growth Differ. 4 483-493]。QSOXl 表达 已经在胚胎发育期间[Portes K. R等人（2008) J. Mol. Histol. 217-225]以及在 许多成体器官和组织类型中在体内已经观测到。QS0X1水平在具有高分泌能力的器官中特 别高，所述器官例如肺、卵巢和子宫内膜[Musard J. F.等人（2001) Biochem. Biophys. Res. Comm.忽7，83-91]，以及胃、细支气管、唾液腺、食道、郎格罕氏胰岛、膀胱、和男女生 殖系统的表面上皮层[Tury A.等人（2006) Cell Tissue Res. J力，91-103]。QS0X1 在 发育中的脑中也显示出空间和时间上的复杂表达模式[Amiot C.等人（2004) Brain Res. Mol. BrainRes. 7激，13-21]。静息成纤维细胞所产生的QS0X1显示出被分泌[Coppock D.等人（2000) Biochem. Biophys. Res. Comm.激没，604-610]，并且不同体液中的疏基 氧化酶活性表明QS0X1也从其他细胞类型中分泌[Janolino V. G.和Swaisgood，出处同 上]。 胞外或晚期分泌的二硫化物催化剂的目的仍然是个主要的开放性问题，并且 QS0X1的天然底物仍有待鉴定。 最近几个研究人员已经将QS0X1和癌症关联起来。根据Antwi等人[Antwi K.等 人（2009) J. Proteome Res. & 4722-4731]的教导，增加的QS0X1蛋白水平在人类患 者的胰腺导管腺癌（DAP)和相关的微小转移中可见。此外，DAP患者的血清肽组的质谱研 究揭示出高水平的肽，所述肽衍生自QSOXl并且明显经蛋白水解[Antwi等人（2009)，出 处同上]。Katchman等人教导QSOXl促进由基质金属蛋白酶介导的胰腺肿瘤细胞的侵袭 [Katchman等人（2011) Mol Cancer Res ;6^7力1621-31]。此外，在前列腺癌小鼠模型 中，Nkx3. 1肿瘤抑制物的功能丧失导致QSOXl产生增加 [Ouyang X.等人（2005) Cancer Res. 65，6773-6779]。QSOXl尤其在前列腺肿瘤发生中的早期事件：前列腺增生和上皮 间肿瘤（interepithelial neoplasia)中高度表达[Song H.等人（2009) Oncogene 忽， 3307-3319]〇 额外
技术介绍
包括PCT申请号WO 2010/077921和WO 2010/071787。 专利技术概沭 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了抑制或阻止基膜中的层粘连蛋白装配的方 法，所述方法包括使组织与抑制QSOXl活性或表达的试剂接触，从而抑制或阻止基膜中的 层粘连蛋白装配。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了抑制经由包含层粘连蛋白的基膜的细 胞迁移的方法，所述方法包括使组织与抑制QSOXl活性或表达的试剂接触，从而抑制经由 包含层粘连蛋白的基膜的细胞迁移。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了在有需要的受试者中治疗层粘连蛋白 相关疾病或病症的方法，所述方法包括将治疗有效量的抑制QSOXl活性或表达的试剂给予 所述受试者，从而在所述受试者中治疗所述层粘连蛋白相关疾病或病症。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了治疗有效量的抑制QSOXl活性或表达 的试剂在制备经鉴定用于在有需要的受试者中治疗层粘连蛋白相关疾病或病症的药物中 的用途。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了分离的抗体，其包含抗原识别域，所述 抗原识别域在介导支持细胞迁移的基膜装配中特异性地结合QSOXl和抑制QSOXl活性。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了药物组合物，其包含作为活性成分的 本专利技术的分离的抗体和药学上可接受的载体。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了分离的多核苷酸，其编码本专利技术的抗 体。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了分离的多核苷酸，其包含编码互补决 定区（CDR)的核酸序列，所述CDR含有具有SEQ ID NOs: 29-34所示的CDR的多肽。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了在受试者中诊断层粘连蛋白相关疾病 或病症的方法，包括：（a)在适合所述分离的多肽与QSOXl蛋白之间形成免疫复合物的条 件下使所述受试者的生物样品与本专利技术的分离的多肽接触；和（b)检测所述免疫复合物 的形成，其中所述免疫复合物的存在超过预定阈值就表明所述层粘连蛋白相关疾病，从而 在所述受试者中诊断所述层粘连蛋白相关疾病或病症。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了试剂盒，用于在包含本专利技术抗体的生 物样品中检测QSOXl水平。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了鉴定QSOXl抑制剂的方法，所述方法 包括在测试试剂存在或不存在时培养组织，其中在用所述测试试剂进行培养后功能性基膜 的减少就表明所述测试试剂是QSOXl抑制剂。 依据本专利技术某些实施方案的一方面，提供了分离的多肽，其包含QSOXl的氨基酸 序列，所述肽长度小于500个氨基酸。 依据本本文档来自技高网...

【技术保护点】
抑制或阻止基膜中的层粘连蛋白装配的方法，所述方法包括使组织与抑制QSOX1活性或表达的试剂接触，从而抑制或阻止基膜中的层粘连蛋白装配。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.03.07 US 61/607696;2012.06.28 US 61/6653651. 抑制或阻止基膜中的层粘连蛋白装配的方法，所述方法包括使组织与抑制QS0X1 活性或表达的试剂接触，从而抑制或阻止基膜中的层粘连蛋白装配。2. 抑制经由包含层粘连蛋白的基膜的细胞迁移的方法，所述方法包括使组织与抑制 QS0X1活性或表达的试剂接触，从而抑制经由包含层粘连蛋白的基膜的细胞迁移。3. 权利要求2的方法，其中所述细胞是肿瘤细胞。4. 权利要求1或2的方法，其中所述组织是肿瘤组织。5. 权利要求1或2的方法，其中所述组织包含成纤维细胞。6. 权利要求1或2的方法，其中所述方法在体内进行。7. 在有需要的受试者中治疗层粘连蛋白相关疾病或病症的方法，所述方法包括将治 疗有效量的抑制QS0X1活性或表达的试剂给予所述受试者，从而在所述受试者中治疗所述 层粘连蛋白相关疾病或病症。8. 治疗有效量的抑制QS0X1活性或表达的试剂在制备经鉴定用于在有需要的受试者 中治疗层粘连蛋白相关疾病或病症的药物中的用途。9. 权利要求7的方法，或权利要求8的用途，其中所述层粘连蛋白相关疾病或病症是 肿瘤。10. 权利要求9的方法或用途，其中所述肿瘤是转移性实体瘤。11. 权利要求9的方法或用途，其中所述肿瘤是腺癌。12. 权利要求9的方法或用途，其中所述肿瘤选自前列腺癌、肺癌、乳腺癌、宫颈癌、脐 尿管癌、阴道癌、结肠癌、食道癌、胰腺癌、喉癌、胃癌和髓细胞性白血病。13. 权利要求7的方法，或权利要求8的用途，其中所述层粘连蛋白相关疾病或病症与 纤维化相关。14. 权利要求1、2或7的方法，或权利要求8的用途，其中所述层粘连蛋白包含ci4链。15. 权利要求1、2或7的方法，或权利要求8的用途，其中所述层粘连蛋白是层粘连蛋 白-411或层粘连蛋白-421。16. 权利要求7的方法，或权利要求8的用途，其中所述试剂是多肽试剂。17. 权利要求16的方法或用途，其中所述多肽试剂选自抗体、抗体片段或肽。18. 权利要求16的方法或用途，其中所述多肽试剂针对所述QS0X1的氨基酸坐标 34-266。19. 权利要求17的方法或用途，其中所述抗体是MAb492. 1并且包含互补决定区 (CDRs) SEQ ID NOs: 29-34。20. 权利要求17的方法或用途，其中所述抗体片段是scFV492. 1并且包含⑶Rs SEQ ID NOs: 29-34。21. 权利要求7的方法，或权利要求8的用途，其中所述试剂是多核苷酸试剂。22. 权利要求21的方法或用途，其中所述多核苷酸试剂选自反义、siRNA、小RNA、核酶 和脱氧核酶。23. 分离的抗体，其包含抗原识别域，所述抗原识别域在介导支持细胞迁移的基膜装 配中特异性地结合QS0X1和抑制QS0X1活性。24. 权利要求23的分离的抗体，其中所述活性通过胞外基质的免疫荧光（IF)染色测 定或检测可溶性层粘连蛋白的蛋白质印迹测定中的至少一种而测定。25. 权利要求23的分离的抗体，其中所述抗体是抗体片段。26. 权利要求23的分离的抗体，其中所述抗体选自Fab片段、Fv片段、单链抗体和单 域抗体。27. 权利要求23的分离的抗体，其中所述QS0X1是人QS0X1。28. 权利要求23的分离的抗体，其中所述QS0X1是鼠QS0X1。29. 权利要求23的分离的抗体，其中所述抗体是单克隆抗体。30. 权利要求29的分离的抗体，其中所述单克隆抗体是MAb492. 1并且包含⑶Rs SEQ ID NOs: 29-3...

【专利技术属性】
技术研发人员：D法斯，I格罗斯曼，T伊拉尼，A阿龙，
申请(专利权)人：耶达研究及发展有限公司，
类型：发明
国别省市：以色列;IL