具有递送功能的基因表达调控用单链核酸分子制造技术

提供一种单链核酸，其具有递送功能，能够抑制靶基因的表达。一种分子，其特征在于当沿着从5’侧向3’侧的方向观察时以下列顺序包括5’侧区域(Xc)、连接子区域(Lx)、内部区域(Z)、连接子区域(Ly)和3’侧区域(Yc)，其中前述内部区域(Z)由相互连接的内部5’侧区域(X)和内部3’侧区域(Y)构成，前述5’侧区域(Xc)与前述内部5’侧区域(X)互补，前述3’侧区域(Yc)与前述内部3’侧区域(Y)互补，选自前述内部区域(Z)、前述5’侧区域(Xc)和前述3’侧区域(Yc)的至少之一包含抑制靶基因的表达的表达抑制序列，并且一种生物相关物质结合至选自由5’末端、3’末端、前述连接子区域(Lx)和前述连接子区域(Ly)组成的组的至少之一。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有递送功能的基因表达调控用单链核酸分子
本专利技术涉及具有递送功能（delivery化nction)的基因表达抑制用单链核酸分 子，包含其的组合物及其用途。
技术介绍
作为用于抑制基因表达的技术，例如RNA干扰（RNAi)是已知的（非专利文献1)。 RNA干扰对基因表达的抑制一般例如通过将短双链RNA分子投与至细胞等来进行。前述双 链RNA分子一般称作siRNA(小干扰RNA)。已报道称基因表达还可被经分子内退火而具有 部分形成于其中的双链的环状RNA分子所抑制（专利文献1)。然而，在该些技术中，诱导基 因表达抑制的RNA分子具有下列问题。 首先，为了生产前述SiRNA,必须单独合成正义链和反义链并在该过程结束时将该 些链杂交。因此，存在制造效率低下的问题。此外，当前述SiRNA投与至细胞时，必须在抑 制单链RNA解离的同时将SiRNA投与至细胞，该需要设定用于操作SiRNA的条件的繁重工 作。环状RNA分子具有的问题在于其合成困难。为了应对现状，本专利技术人构建了具有通过 自身退火产生的双环结构的新的单链核酸分子，解决了上述问题（专利文献2)。 [文献列表] [专利文献] 专利文献 1 ;JP-A-2008-278784 专利文献 2 ;W0 2012/005368 [000引[非专利文献] 非专利文献 1 ;Fire,等人，化Uire,vol. 391，P. 806-811，1998
技术实现思路
专利技术要解决的巧颖 此外，此类新的单链核酸分子需要进一步实现至祀标的优异递送功能。 因此，本专利技术旨在提供具有递送功能的能够抑制祀基因表达的单链核酸。 [001引 巧于解决巧颖的方案 为了实现前述目的，本专利技术的单链核酸分子为具有递送功能的祀基因表达抑制用 单链核酸分子，所述单链核酸分子从5'侧至3'侧依下列顺序包括5'侧区域狂C)、连接子 区域（Lx)、内部区域狂）、连接子区域（Ly)和3'侧区域（Yc),其中前述内部区域狂）通过 内部5'侦眶域佩和内部3'侦眶域（Y)的连接构成，前述5'侦眶域狂C)与前述内部5' 侧区域佩互补，前述3'侧区域（Yc)与前述内部3'侧区域（Y)互补，前述内部区域狂)、 前述5'侧区域狂C)和前述3'侧区域（Yc)的至少之一包括抑制祀基因的表达的表达抑制 序列，且选自由5'末端、3'末端、前述连接子区域（Lx)和前述连接子区域（Ly)组成的组的 至少之一结合至生物相关物质。 专利技术的效果 本专利技术的单链核酸分子能够实现向祀标的优异递送能力，而不必须 (essentially)需要例如递送用载体。因此，例如，不需要考虑载体的毒性，并且可避免设定 与形成核酸分子和载体的复合体相关的各种条件的研究。因此，例如，可减少生产和使用方 面的劳力和成本。 【附图说明】 图1示出说明本专利技术单链核酸分子的实例的示意图。 图2示出说明本专利技术单链核酸分子的另一实例的示意图。 图3为示出本专利技术实施例中稳定表达蛮火虫英光素酶（P化3LUC)的乳腺癌细胞系 MCF-7的蛮火虫英光素酶基因表达抑制效果（英光素酶的相对活性）的图。 图4为示出本专利技术实施例中稳定表达蛮火虫英光素酶（P化3LUC)的乳腺癌细胞系 MCF-7的蛮火虫英光素酶基因表达抑制效果（英光素酶的相对活性）的另一图。 图5为示出本专利技术实施例中稳定表达蛮火虫英光素酶（P化3LUC)的乳腺癌细胞系 MCF-7的蛮火虫英光素酶基因表达抑制效果（英光素酶的相对活性）的又一图。 图6为示出本专利技术实施例中稳定表达蛮火虫英光素酶（P化3LUC)的乳腺癌细胞系 MCF-7的蛮火虫英光素酶基因表达抑制效果（英光素酶的相对活性）的又一图。 图7为示出本专利技术实施例中稳定表达蛮火虫英光素酶（P化3LUC)的乳腺癌细胞系 MCF-7的蛮火虫英光素酶基因表达抑制效果（英光素酶的相对活性）的又一图。 图8为示出本专利技术实施例中稳定表达蛮火虫英光素酶（P化3LUC)的乳腺癌细胞系 MCF-7的蛮火虫英光素酶基因表达抑制效果（英光素酶的相对活性）的又一图。 [00巧]图9为示出本专利技术实施例中稳定表达蛮火虫英光素酶（P化3LUC)的乳腺癌细胞系MCF-7的蛮火虫英光素酶基因表达抑制效果（英光素酶的相对活性）的又一图。 图10示出本专利技术实施例中小鼠蛮火虫英光素酶基因表达抑制的测量结果的照 片。图10(a)为示出用本专利技术单链核酸处理的小鼠的测量结果的照片，图10化）为未处理 小鼠的测量结果的照片。 图11为示出图10照片所示全身英光素酶活性（蛮火虫英光素酶基因的表达抑 巧D的测量结果的图。 图12为示出图10照片所示脑英光素酶活性（蛮火虫英光素酶基因的表达抑制） 的测量结果的图。 【具体实施方式】 除非另有说明，本说明书中使用的术语意指它们在本领域中通常的含义。 1.SS化分子 如上所述，本专利技术的单链核酸分子为具有递送功能的祀基因表达抑制用单链核酸 分子，并且所述单链核酸分子的特征在于其从5'侧至3'侧W下列顺序包括5'侧区域狂C)、 连接子区域（Lx)、内部区域狂）、连接子区域（Ly)和3'侧区域（Yc),其中 前述内部区域似通过内部5'侧区域佩和内部3'侧区域（Y)的连接构成， [003引前述5'侦眶域狂C)与前述内部5'侦眶域佩互补， 前述3'侦眶域（Yc)与前述内部3'侦眶域（Y)互补， [00巧]前述内部区域狂）、前述5'侧区域狂c)和前述3'侧区域（Yc)的至少之一包括抑 制祀基因的表达的表达抑制序列，和 选自由5'末端、3'末端、前述连接子区域（Lx)和前述连接子区域（Ly)组成的组 的至少之一结合至生物相关物质。 本专利技术中，祀基因的表达抑制意指例如抑制前述祀基因的表达。前述抑制实现 的机理不特别限定，并可为例如下调或沉默。前述祀基因的表达抑制可通过例如来源于祀 基因的转录产物量的降低；前述转录产物活性的降低；由前述祀基因产生的翻译产物量的 降低；或前述翻译产物活性的降低等来证实。前述蛋白质可为例如成熟蛋白质、进行加工之 前或翻译后修饰的前体蛋白质。 本专利技术的单链核酸分子在下文中还可称为本专利技术的SS化分子。本专利技术的SS化 分子可用于体内或体外抑制例如祀基因的表达，且还可称为祀基因的表达抑制用SS化分 子或祀基因的表达抑制剂。此外，本专利技术的SS化分子可通过例如RNA干扰抑制前述祀 基因的表达，且其还可称为RNA干扰用SS化分子、RNA干扰诱导分子、RNA干扰剂或 RNA干扰诱导剂。本专利技术的SS化分子还可例如抑制干扰素等的副作用。 在本专利技术的SS化分子中，5'端和3'端不相互连接。因此，本专利技术的SS化分子还 可称为线性单链核酸分子。在本专利技术的SS化分子中，例如，前述内部5'区域狂）和前述 内部3'区域（巧在前述内部区域狂）处直接连接。 在本专利技术的SS化分子中，前述5'侧区域狂C)与前述内部5'侧区域狂）互补，前 述3'侧区域（Yc)与前述内部3'侧区域（Y)互补。因此，在5'侧，双链可通过前述区域 狂C)向区域佩的折回并且前述区域狂C)和佩的自身退火而形成，在3'侧，双链可通过 前述区域（Yc)向区域（Y)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种单链核酸分子，其为具有递送功能的靶基因的表达抑制用单链核酸分子，所述单链核酸分子从5’侧至3’侧以下列顺序包括5’侧区域(Xc)、连接子区域(Lx)、内部区域(Z)、连接子区域(Ly)和3’侧区域(Yc)，其中前述内部区域(Z)通过内部5’侧区域(X)和内部3’侧区域(Y)的连接而构成，前述5’侧区域(Xc)与前述内部5’侧区域(X)互补，前述3’侧区域(Yc)与前述内部3’侧区域(Y)互补，前述内部区域(Z)、前述5’侧区域(Xc)和前述3’侧区域(Yc)的至少之一包括抑制靶基因的表达的表达抑制序列，和选自由5’末端、3’末端、前述连接子区域(Lx)和前述连接子区域(Ly)组成的组的至少之一结合至生物相关物质。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.05.26 JP 2012-1203371. 一种单链核酸分子，其为具有递送功能的靶基因的表达抑制用单链核酸分子，所述 单链核酸分子从5'侧至3'侧以下列顺序包括5'侧区域（Xc)、连接子区域（Lx)、内部区域 (Z)、连接子区域（Ly)和3'侧区域（Yc)，其中 前述内部区域（Z)通过内部5'侧区域（X)和内部3'侧区域（Y)的连接而构成， 前述5'侧区域（Xc)与前述内部5'侧区域⑴互补， 前述3'侧区域（Yc)与前述内部3'侧区域⑴互补， 前述内部区域（Z)、前述5'侧区域（Xc)和前述3'侧区域（Yc)的至少之一包括抑制靶 基因的表达的表达抑制序列，和 选自由5'末端、3'末端、前述连接子区域（Lx)和前述连接子区域（Ly)组成的组的至 少之一结合至生物相关物质。2. 根据权利要求1所述的单链核酸分子，其中所述生物相关物质为脂质。3. 根据权利要求2所述的单链核酸分子，其中所述生物相关物质为单纯脂质、复合脂 质、衍生脂质、单链脂质、双链脂质、糖脂质、脂溶性维生素或类固醇。4. 根据权利要求2所述的单链核酸分子，其中所述脂质选自由棕榈酸、肉豆蘧酸、硬脂 酸和油酸组成的组的至少之一。5. 根据权利要求1所述的单链核酸分子，其中所述生物相关物质为选自由抗体蛋白 质、其肽和穿膜肽组成的组的至少之一。6. 根据权利要求1至5任一项所述的单链核酸分子，其满足下式（1)和（2)的条件： Z=X+Y(1) Z彡Xc+Yc(2) 其中Z为内部区域（Z)的碱基数，X为内部5'侧区域（X)的碱基数，Y为内部3'侧区 域（Y)的碱基数，Xc为5'侧区域（Xc)的碱基数，和Yc为3'侧区域（Yc)的碱基数。7. 根据权利要求1至6任一项所述的单链核酸分子，其包括至少一种修饰残基。8. 根据权利要求1至7任一项所述的单链核酸分子，其包括稳定同位素。9. 根据权利要求1至8任一项所述的单链核酸分子，其中所述连接子区域（Lx)和/或 所述连接子区域（Ly)由核苷酸残基和非核苷酸残基的至少之一构成。10. 根据权利要求9所述的单链核酸分子，其中所述核苷酸残基为非修饰核苷酸残基 和/或修饰核苷酸残基。11. ...

【专利技术属性】
技术研发人员：大木忠明，青木绘里子，江村智佐登，滨崎智洋，
申请(专利权)人：株式会社博纳克，
类型：发明
国别省市：日本;JP