微小RNA抑制剂制造技术

提供一种微小RNA抑制剂，其具有广泛的实用性且难以降解。微小RNA抑制剂1的特征在于，其具有与为抑制靶标的微小RNA的序列互补的两个以上的序列2，和两个以上的互补序列2经一个(或多个)连接子残基3彼此连接。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】微小RNA抑制剂
本专利技术涉及微小RNA(microRNA)抑制剂。
技术介绍
微小RNA为18-25mer的小RNA，其由基因组转录并调控靶基因的表达。已知微小RNA的异常表达深度介入许多疾病如癌症等中，且近年来已极力进行了将微小RNA作为诊断和治疗的靶标的研究。抑制微小RNA的方法包括使用LNA(锁核酸，LockedNucleicAcid)的方法，且该方法在欧洲和美国处于临床阶段。作为微小RNA的其它抑制方法，存在称为微小RNASponge(海绵)的技术(非专利文献1)。[文献列表][非专利文献]非专利文献1：NATUREMETHODS,4:72
技术实现思路
专利技术要解决的问题然而，由于使用LNA的方法需要使用特定的修饰核酸，因而其缺乏广泛的实用性。此外，尽管微小RNA海绵具有广泛的实用性，但其还具有的问题在于RNA分子容易被降解酶降解。因此，本专利技术旨在提供一种具有广泛的实用性且难以降解的微小RNA抑制剂。用于解决问题的方案为了实现前述目的，本专利技术的微小RNA抑制剂的特征在于其具有与为抑制靶标的微小RNA的序列互补的两个以上的序列，且前述两个以上的互补序列经连接子残基连接。专利技术的效果由于本专利技术的微小RNA抑制剂不需要使用特定的修饰核酸，因而其在广泛的实用性方面占优，且由于前述互补序列经连接子残基连接而难以降解。附图说明图1示出本专利技术微小RNA抑制剂的示例性组成。图2示出本专利技术微小RNA抑制剂的示例性序列。图3示意性示出错配序列的实例。图4示出实施例1的微小RNA的表达水平通过qPCR的确认结果。图5为海肾荧光素(Renillaluciferase)基因通过用于实施例的质粒表达的示意图。图6为萤火虫荧光素(fireflyluciferase)基因通过用于实施例的不同质粒表达的示意图。图7为示出实施例2-1的微小RNA抑制剂的miR-16活性抑制效果的图。图8为示出实施例2-2的微小RNA抑制剂的miR-16活性抑制效果的图。图9为示出实施例2-3的微小RNA抑制剂的miR-16活性抑制效果的图。图10为示出实施例3的微小RNA抑制剂的miR-16活性抑制效果的图。图11为示出实施例4中使用HCT116细胞比较Gly型海绵低聚体(spongeoligo)(微小RNA抑制剂)和GlyGly型海绵低聚体(微小RNA抑制剂)的miR-16活性抑制效果的图。图12为示出实施例4中使用HCT116细胞比较GlyGly型海绵低聚体(spongeoligo)(微小RNA抑制剂)和TPA型海绵低聚体(微小RNA抑制剂)的miR-16活性抑制效果的图。图13为示出实施例4中使用HCT116细胞比较GlyGly型海绵低聚体(spongeoligo)(微小RNA抑制剂)和TPA型海绵低聚体(微小RNA抑制剂)的miR-16活性抑制效果的另一图。图14也为示出实施例4中使用HCT116细胞比较GlyGly型海绵低聚体(spongeoligo)(微小RNA抑制剂)和TPA型海绵低聚体(微小RNA抑制剂)的miR-16活性抑制效果的另一图。图15为示出实施例4中使用HEK293T细胞比较Gly型海绵低聚体(spongeoligo)(微小RNA抑制剂)和GlyGly型海绵低聚体(微小RNA抑制剂)的miR-16活性抑制效果的图。图16为示出实施例4中使用HEK293T细胞比较Gly型海绵低聚体(spongeoligo)(微小RNA抑制剂)和GlyGly型海绵低聚体(微小RNA抑制剂)的miR-16活性抑制效果的另一图。图17为示出实施例4中使用HEK293T细胞比较Gly型海绵低聚体(spongeoligo)(微小RNA抑制剂)和GlyGly型海绵低聚体(微小RNA抑制剂)的miR-16活性抑制效果的另一图。图18为示出实施例5中使用HCT116细胞比较当miR-16结合序列为完美型(Perfecttype)、泡型(Bubbletype)或凸型(Bulgetype)时的海绵低聚体(spongeoligo)(微小RNA抑制剂)的miR-16活性抑制效果的图。图19为示出实施例5中使用HEK293T细胞比较当miR-16结合序列为完美型、泡型和凸型时的海绵低聚体(spongeoligo)(微小RNA抑制剂)的miR-16活性抑制效果的图。具体实施方式下面参考实施例详细解释本专利技术。然而，本专利技术不受下列说明的限定。本专利技术的微小RNA抑制剂优选具有键合至存在于微小RNA抑制剂两末端的前述互补序列的各端部的连接子残基。以该形式，可进一步抑制降解。在本专利技术的微小RNA抑制剂中，前述连接子残基优选包含选自由氨基酸残基、聚胺残基和多元羧酸残基组成的组的至少之一。前述连接子残基可包含或可不包含除氨基酸残基、聚胺残基和多元羧酸残基以外的残基。例如，前述连接子残基可为多元羧酸残基、对苯二甲酸残基和氨基酸残基中任一。本专利技术中，“聚胺”意指包含多个(两个、三个或更多)氨基的任意化合物。前述“氨基”不限于-NH2基团，还包括亚氨基(-NH-)。本专利技术中，前述聚胺不特别限定，其实例包括1,4-苯二胺、1,3-苯二胺和1,2-苯二胺等。此外，在本专利技术中，“多元羧酸”意指包含多个(两个、三个或更多)羧基的任意化合物。本专利技术中，前述多元羧酸不特别限定，其实例包括1,4-二羧基苯(对苯二甲酸)、1,3-二羧基苯(间苯二甲酸)和1,2-二羧基苯(邻苯二甲酸)。另外，本专利技术中，“氨基酸”意指如下所述分子中包含一个以上的氨基和一个以上的羧基的任意有机化合物。前述“氨基”不限于-NH2基团，还包括亚氨基(-NH-)。在本专利技术的微小RNA抑制剂中，存在于前述两个以上的互补序列之间的氨基酸残基可为多个互连的氨基酸残基。本专利技术中，为多个互连的氨基酸残基的氨基酸残基为例如包含肽结构的残基。更具体地，为多个互连的氨基酸残基的前述氨基酸残基为例如下述化学式(I)的氨基酸残基，其中下述化学式(Ia)为肽(例如，甘氨酸二聚体或甘氨酸三聚体等)。在本专利技术的微小RNA抑制剂中，前述氨基酸残基可为甘氨酸残基、对苯二甲酰胺残基或脯氨酸残基。在本专利技术的微小RNA抑制剂中，键合至前述互补序列的端部的氨基酸残基可为多个互连的氨基酸残基。另外，在本专利技术的微小RNA抑制剂中，存在于两个以上的互补序列之间的前述氨基酸残基和键合至前述互补序列的端部的氨基酸残基的至少之一可为甘氨酸二聚体或三聚体的残基。本专利技术中，前述互补序列可为RNA或DNA。本专利技术中，连接前述两个以上的互补序列的氨基酸残基不特别限定，如上所述可使用例如甘氨酸残基、对苯二甲酰胺残基或脯氨酸残基。另外，前述氨基酸残基可为修饰的氨基酸残基或氨基酸衍生物。连接(结合)前述两个以上的互补序列的氨基酸残基可为单一氨基酸残基或彼此连接的两个以上的氨基酸残基。本专利技术中，如上所述，存在于微小RNA抑制剂的两末端的前述互补序列优选具有前述连接至各端部的连接子残基。前述连接子残基可为例如氨基酸残基。在前述氨基酸残基不特别限定的同时，其为例如甘氨酸残基、对苯二甲酰胺残基或脯氨酸残基。连接前述两个以上的互补序列的氨基酸残基可为单一氨基酸残基或两个以上的氨基酸残基。本专利技术中，前述互补序列与为抑制靶标的微小RNA全部或部分互补。当序列部分互补时，优选其与从微小RNA环的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微小RNA抑制剂，其包括与为抑制靶标的微小RNA的序列互补的两个以上的序列，其中所述两个以上的互补序列经一个或多个连接子残基连接。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2012.03.04 JP 2012-0474661.一种微小RNA抑制剂，其包括与为抑制靶标的微小RNA的序列互补的两个以上的序列，其中所述两个以上的互补序列经一个或多个连接子残基连接，并且所述连接子残基键合至存在于所述微小RNA抑制剂的两末端处的所述互补序列的各端部，其中所述连接子残基包括氨基酸残基，其中所述连接子残基选自由下列化学式(G1)表示的原子团、下列化学式(G2)表示的原子团和下列化学式(TPA)表示的原子团组成的组：在前述化学式(G1)中，Gly为由下列化学式(Gly)表示的原子团，下列化学式(Gly)中的末端的羰基碳键合至化学式(G1)中的N原子，下列化学式(Gly)中的末端氮原子键合至上述化学式(G1)的羰基碳，(Gly)-HN-CH2-CO-；在前述化学式(G2)中，GlyGly为由下列化学式(GlyGly)表示的原子团，下列化学式(GlyGly)中的末端羰基碳键合至化学式(G2)中的N原子，下列化学式(GlyGly)中的末端的氮原子键合至上述化学式(G2)中的羰基碳，(GlyGly)-HN-CH2-CO-HN-CH2-CO-；且当前述连接子残基存在于在末端处存在的前述微小RNA的互补序列的端部时，所述连接子残基的末端为H。2.一种微小RNA抑制剂，其包括与为抑制靶标的微小RNA的序列互补的两个以上的序列，其中所述两个以上的互补序列经一个或多个连接子残基连接，并且所述连接子残基键合至存在于所述微小RNA抑制剂的两末端处的所述互补序列的各端部，其中所述连接子残基包括氨基酸残基，其中所述连接子残基选自由下列化学式(G1)表示的原子团、下列化学式(G2)表示的原子团和下列化学式(TPA)表示的原子团组成的组：在前述化学式(G1)中，Gly为由下列化学式(Gly)表示的原子团，下列化学式(Gly)中的末端的羰基碳键合至化学式(G1)中的N原子，下列化学式(Gly)中的末端氮原子键合至上述化学式(G1)的羰基碳，(Gly)-HN-CH2-CO-；在前述化学式(G2)中，GlyGly为由下列化学式(GlyGly)表示的原子团，下列化学式(GlyGly)中的末端羰基碳键合至化学式(G2)中的N原子，下列化学式(GlyGly)中的末端的氮原子键合至上述化学式(G2)中的羰基碳，(GlyGly)-HN-CH2-CO-HN-CH2-CO-；且当前述连接子残基存在于在末端处存在的前述微小RNA的互补序列的端部时，所述连接子残基的末端为保护基。3.根据权利要求2所述的微小RNA抑制剂，其中所述保护基为磷酸保护基。4.根据权利要求1-3任一项所述的微小RNA抑制剂，其中所述互补序列为RNA或DNA。5.根据权利要求1-3任一项所述的微小RNA抑制剂，其由下列SEQIDNOs：2、4、6、13和15至18中的任一来表示：5’-Gly-CGCCAATATTCGATGCTGCTA-Gly-CGCCAATATTCGATGCTGCTA-Gly-CGCCAATATTCGATGCTGCTA-Gly...

【专利技术属性】
技术研发人员：大木忠明，白水久男，铃木宽，滨崎智洋，水谷隆之，
申请(专利权)人：株式会社博纳克，
类型：发明
国别省市：日本;JP